超声波联合木瓜蛋白酶降解壳聚糖的工艺研究

采用超声波技术联合木瓜蛋白酶对壳聚糖进行降解,以还原糖释放量为指标,通过单因素实验研究了壳聚糖质量浓度、溶液p H、超声功率及超声时间对壳聚糖降解的影响。并利用傅里叶变换红外光谱(FT-IR)及X-射线衍射(XRD)分别对降解前后的壳聚糖进行结构表征分析。结果表明:超声波联合木瓜蛋白酶可以有效降解壳聚糖,在壳聚糖质量浓度为6 g/L、溶液p H为4.5、超声功率为480 W、超声时间为180 min条件下,加入木瓜蛋白酶,降解效果最明显,还原糖释放量达到1.456 g/L;FT-IR结果表明,降解后壳聚糖的结构基本没有变化;XRD结果表明,降解后壳聚糖的晶体结构受到了破坏。

多级双水相萃取木瓜蛋白酶的研究

使用双水相萃取大规模生产木瓜蛋白酶时,为获得较高的回收率,通常需要较高的萃取剂浓度和体积比,但这会导致目标物的纯度和浓度降低。该研究采用聚乙二醇和柠檬酸钠组成的双水相体系在多个离心管之间的转移来模拟工业上常用的多级错流萃取和多级逆流萃取过程,以分配系数、酶活性回收率为指标,采用McCabe Thiele图解法得到多级逆流双水相萃取的理论级数,结果表明,当相比为0.5,原料液下相的木瓜蛋白酶的初始质量浓度为0.20 mg/mL时,使用3级逆流双水相萃取木瓜蛋白酶的酶活性回收率达到了96.75%,同时设计出多级逆流双水相萃取木瓜蛋白酶的优化方案。

基于聚乙烯亚胺改性纳米磁球的木瓜蛋白酶固定化

为实现木瓜蛋白酶(Papain,PAP)的高效固定化,本文构建了易于磁分离的亲水性三维立体结构的固定化载体,采用单因素和响应面法优化了固定条件。在磁性Fe_(3)O_(4)表面包覆聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)制备核-壳结构的纳米磁球Fe_(3)O_(4)@PMMA,接枝不同分子量聚乙烯亚胺(Polyethyleneimide,PEI),将PAP物理吸附在PEI上,以戊二醛(Glutaraldehyde,GA)为交联剂,构筑易于磁分离的亲水性三维立体结构的固定化载体Fe_(3)O_(4)@PMMA-PEI,对PAP交联封装并对其微观结构和理化性质进行表征。以纳米磁球的固定化能力为评价指标,探究其固定PAP的最佳交联时间、戊二醛浓度、交联温度、交联转速等。结果表明,磁球表面PMMA酯解后形成的羧基含量为0.95 mmol/g,接枝不同分子量PEI后,磁球表面氨基含量为0.16~0.48 mmol/g;纳米磁球对PAP的固载量可通过接枝PEI的分子量进行调控,当PEI分子量为1800时,固载量达到120.71 mg/g,选择PEI1800为接枝空间臂。纳米磁球微观形貌较规整,单体分散性良好,粒径约150~200 nm。通过响应面试验优化得到最佳条件:当交联时间为32 min、戊二醛浓度为0.02%、交联温度为25℃、交联转速为90 r/min时,Fe_(3)O_(4)@PMMA-PEI 1800对PAP的固载量达139.80 mg/g。Fe_(3)O_(4)@PMMA-PEI 1800-PAP在重复使用5次之后,相对酶活力能保持80.35%。本研究设计合成纳米结构的磁性微球,实现PAP在纳米磁球表面的高效固定,为固定化PAP的研究和应用提供实验依据。

抗新冠病毒木瓜样蛋白酶原核表达条件优化及多克隆抗体的制备与鉴定

目的:优化新型冠状病毒木瓜样蛋白酶(papain-like protease,PLpro)在大肠杆菌中的表达条件,并制备高特异性大鼠抗PLpro多克隆抗体。方法:通过优化诱导时间、诱导温度和IPTG诱导浓度,确定PLpro在大肠杆菌中的最佳表达条件,以HisTrapTM亲和层析柱分离纯化PLpro后,将其作为抗原免疫大鼠,制备抗PLpro多克隆抗体,以酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和蛋白免疫印迹实验(Western blot)测定多克隆抗体的效价、抗原特异性和灵敏性。结果:PLpro最佳诱导温度为20℃、诱导时间为10 h、IPTG浓度为0.2 mmol/L;抗PLpro多克隆抗体的效价可达1∶256000,且具有良好的抗原特异性;抗PLpro多克隆抗体对抗原的检测限可达12.5 ng,具有良好的灵敏性。结论:本研究成功地进行了PLpro在大肠杆菌中的表达条件优化及高特异性大鼠抗PLpro多克隆抗体的制备,为研究PLpro在新冠肺炎中的免疫学功能奠定了基础。

新型冠状病毒木瓜样蛋白酶抑制剂荧光共振能量转移高通量筛选模型的建立与应用

目的:以新型冠状病毒木瓜样蛋白酶(PLpro)为靶点,利用荧光共振能量转移(FRET)技术,建立用来筛选PLpro抑制剂的高通量筛选(HTS)模型。方法:通过大肠杆菌原核表达系统进行质粒构建、原核表达、分离纯化,获得高活性PLpro(以FRET检测PLpro生物活性),用的底物为两端被荧光基团Edans与淬灭基团Dabcyl修饰的多肽。通过优化实验条件,建立并评价PLpro抑制剂FRET高通量筛选模型,筛选苗头化合物。结果:利用大肠杆菌原核表达系统成功表达并分离出PLpro,其比活力>3000 U/mg。经过优化实验,确定模型筛选条件:设定HEPES缓冲液(pH 7.0)中NaCl浓度为50 mmol/L,孵育温度为25℃,孵育时间为30 min,PLpro浓度为18μmol/L,底物浓度为2μmol/L。测得Z′因子值为0.74,说明所建模型可用于高通量筛选。通过对天然产物化合物库进行筛选,发现十七烷一烯银杏酸(GA17∶1)对PLpro具有混合型抑制作用且IC50值为15.5μmol/L。结论:成功建立PLpro小分子抑制剂高通量筛选模型,初步确定GA17∶1是一种新型抗PLpro的苗头化合物,该筛选方法对于快速筛选新型冠状病毒PLpro的靶向抑制剂具有十分重要的意义。

不同pH值对木瓜蛋白酶活性的影响及分子机制

为探究不同pH值对木瓜蛋白酶活性的影响及分子机制,采用分子模拟和荧光光谱分析等技术,对不同pH值条件下(4、5、6、7、8)木瓜蛋白酶的酶活性、均方根误差(root mean square deviation,RMSD)、蛋白质残基的波动、回旋半径、蛋白间氢键、蛋白质二级结构和溶剂可及表面积等进行分析。结果表明:pH7时木瓜蛋白酶活性最高,pH4和pH8时比pH7时活性分别降低约5.00%和5.35%;分子模拟结果显示,不同pH值下木瓜蛋白酶的回旋半径波动不大,pH8时RMSD有较大波动;pH4和pH8时蛋白酶活性中心的3个氨基酸残基有较大波动;随着pH值的增加,木瓜蛋白酶间氢键数量逐渐增加,但pH8的氢键数量较pH7下降3.4个;pH7条件下木瓜蛋白酶活性中心与底物结合紧密,酶蛋白内部结构更致密,而pH4条件下酶活性中心与底物结合部位缝隙较大,酶蛋白内部结构疏松;pH4和8时活性下降与该条件下木瓜蛋白酶的结构变化有关,如氢键的破坏、活性中心残基的波动、疏水表面积的改变、β-折叠等二级结构的变化等。本研究从分子模拟角度明确了pH值对木瓜蛋白酶活性的影响。

纳米磁球固定化木瓜蛋白酶的制备及酶学性质研究

为实现木瓜蛋白酶(papain,PAP)的固定化,通过悬浮聚合法在磁性微球Fe_(3)O_(4)表面均匀包覆聚甲基丙烯酸甲酯(polymethylmethacrylate,PMMA),制备核-壳结构的磁性纳米粒子Fe_(3)O_(4)@PMMA,进一步使PMMA微球表面酯解形成羧基,接枝聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI),将PAP物理吸附在PEI—1800长链上,通过交联剂戊二醛(glutaraldehyde,GA)对PEI进行交联封装,构筑具有磁响应且表面富含氨基的亲水性三维立体结构的载体Fe_(3)O_(4)@PMMA-PEI 1800,实现PAP在纳米磁球表面的封装固定。对载体的形貌特征和理化性质表征分析,评价固定化酶Fe_(3)O_(4)@PMMA-PEI 1800-PAP的酶学性质。结果表明,Fe_(3)O_(4)@PMMA-PEI 1800比表面积为151.30 m^(2)/g,孔容为0.27 cm^(3)/g。Fe_(3)O_(4)@PMMA-PEI 1800-PAP最适温度为60℃,最适pH为6.0,在40~80℃维持80%以上的相对酶活力,在90℃时依然能保持66.84%以上的相对酶活力。Fe_(3)O_(4)@PMMA-PEI 1800-PAP热稳定性良好,在60℃下温育2 h后能保留80%以上的酶活力,在90℃温育2 h后仍能保留36.63%酶活力。Fe_(3)O_(4)@PMMA-PEI 1800-PAP在pH 5.0~pH 9.0均能维持80%以上相对酶活力。经过7次重复使用与洗脱之后,Fe_(3)O_(4)@PMMA-PEI 1800-PAP酶活力依然保留在70%以上。

木瓜蛋白酶结合电刺激建立兔膝关节创伤性滑膜炎模型的实验研究

目的探讨木瓜蛋白酶联合电刺激建立膝关节创伤性滑膜炎动物模型的可行性。方法将12只新西兰兔随机分为正常组和模型组,每组各6只。从造模开始的第1、4、7天,将0.1 mL的4%木瓜蛋白酶水溶液注射于兔右后肢关节腔内,第8天开始,将模型兔麻醉后仰卧位固定,将电刺激针插入右后肢的股直肌,正极直刺入股直肌中点,负极针直刺入股直肌近端止点上,对应连接BL-420S生物信息采集系统的刺激器,调整参数,在自动串刺激模式下被动牵拉肌肉使膝关节重复被动屈伸,继续造模7 d,对侧肢体只针刺不通电,每天进行1次,每次2 h。造模结束后,对各组采用Lequesne MG评分进行行为学观察;采用游标卡尺测量膝关节肿胀程度、电子体温枪测量兔右膝关节皮肤温度;采用数字触诊仪(Myoton Pro)检测股直肌的肌肉张力、弹性、硬度。采用ELISA法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、P物质(SP)的表达水平;HE染色法观察滑膜病理组织情况。结果两组兔行为学Lequesne MG评分、膝关节皮温、周径及血清中IL-1β、TNF-α、SP以及兔右后肢股四头肌肌肉张力、弹性、硬度比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);滑膜组织的病理结果显示炎症改变。结论木瓜蛋白酶结合电刺激建立膝关节创伤性滑膜炎模型成功。

木瓜蛋白酶天然抑制剂筛选及在护肤品中的应用研究

选取化妆品常用的22种活性原料,分别利用紫外分光光度计法和SDS-PAGE法进行体外抑制木瓜蛋白酶活性实验;利用Franz扩散池和人体功效测试检验纤连蛋白透皮过程与抗皱功效,间接证明对木瓜蛋白酶的抑制效果。结果表明,金缕梅提取物抑制酶解反应获得的纤连蛋白浓度最高,其他依次为无患子提取物、海茴香提取物、燕麦提取物、高山火绒草提取物、卡瓦胡椒提取物,对纤连蛋白的透皮与改善眼角皱纹有显著性差异。

通络活血散对木瓜蛋白酶致炎大鼠髌骨的影响

目的:探讨通络活血散对木瓜蛋白酶致炎大鼠髌骨的影响。方法:使用木瓜蛋白酶诱导大鼠髌骨软化症动物模型,通过红外热成像、显微镜检和免疫组化技术研究大鼠体温、髌骨表面形态、髌骨组织,以及滑膜中肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)和转化生长因子(Transforming Growth Factor,TGF)-β1的变化。结果:①红外热成像显示,通络活血散高剂量组、通络活血散中剂量组红色最深,空白组、双氯芬酸二乙胺乳胶剂组、通络活血散低剂量组红色次之,模型组红色最浅。②金相显微镜观察发现,空白组大鼠髌骨表面平滑,凹凸排列均匀;模型组大鼠髌骨表面粗糙,多裂隙,排列不规则;双氯芬酸二乙胺乳胶剂组大鼠髌骨表面粗糙,多细小裂隙,排列不规则;通络活血散高剂量组、通络活血散中剂量组、通络活血散低剂量组大鼠髌骨表面平滑,可见凹凸,稀疏,排列不均匀,有少量细小裂隙。③空白组大鼠滑膜组织表面被覆单层滑膜细胞,髌骨组织分层清晰。模型组大鼠滑膜增生合并慢性炎症,髌骨表面不规则,有血管翳形成,表层储备细胞退变,增生层细胞明显增生,分层结构紊乱。通络活血散高剂量组、通络活血散中剂量组滑膜表面被覆单层滑膜细胞,有轻微增生,髌骨表面表层储备细胞增生,分层基本清晰。通络活血散低剂量组和双氯芬酸二乙胺乳胶剂组大鼠滑膜组织增生合并少量炎细胞浸润,髌骨表面表层储备细胞局部退变,增生层细胞明显增生。④在TNF-α免疫组化染色阳性率方面,模型组、双氯芬酸二乙胺乳胶剂组,以及通络活血散高剂量组、通络活血散中剂量组、通络活血散低剂量组均高于空白组(P<0.05);模型组高于双氯芬酸二乙胺乳胶剂组以及通络活血散高剂量组、通络活血散中剂量组、通络活血散低剂量组(P<0.05);通络活血散低剂量组高于双氯芬酸二乙胺乳胶剂组以及通络活血散中剂量组、通络活血散高剂量组(P<0.05);双氯芬酸二乙胺乳胶剂组、通络活血散中剂量组、通络活血散高剂量组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。在TGF-β1免疫组化染色阳性率方面,模型组、双氯芬酸二乙胺乳胶剂组、通络活血散高剂量组、通络活血散中剂量组及通络活血散低剂量组均高于空白组(P<0.05);模型组低于双氯芬酸二乙胺乳胶剂组、通络活血散高剂量组、通络活血散中剂量组及通络活血散低剂量组(P<0.05);双氯芬酸二乙胺乳胶剂组低于通络活血散中剂量组、通络活血散高剂量组(P<0.05),与通络活血散低剂量组之间的差异无统计学意义(P>0.05);通络活血散低剂量组低于通络活血散中剂量组、通络活血散高剂量组(P<0.05),通络活血散中剂量组、通络活血散高剂量组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:通络活血散可促进大鼠血液循环,明显减轻木瓜蛋白酶致炎引起的炎症反应,促进大鼠髌骨表面细胞与组织的修复与再生。

氮含量对木瓜蛋白酶凝固天然橡胶性能的影响

利用木瓜蛋白酶凝固天然胶乳制备了不同氮含量的天然橡胶(NR-P),研究了NR-P的生胶理化性能和混炼胶硫化特性,以及硫化胶的物理机械性能、压缩疲劳生热和动态力学性能,并与酸凝天然橡胶(NR-A)进行了对比。结果表明,随着氮含量的降低,NR-P的塑性初值先降低再趋于稳定,塑性保持率则稍有下降;混炼胶的硫化速率增大;硫化胶的300%定伸应力和拉伸强度均呈现先增大后稍有减小的趋势,压缩温升和滚动阻力都基本呈现减小趋势。与NR-A相比,NR-P的氮含量较低,但其塑性初值较高而塑性保持率稍低,硫化速率及拉伸强度也优于NR-A。当含氮质量分数处于0.18%~0.23%时,NR-P具有较快的硫化速率,较好的物理机械性能、压缩疲劳生热性能和动态力学性能。

小麦木瓜类半胱氨酸蛋白酶基因TaRD21的克隆及赤霉病菌诱导下的表达分析

木瓜类半胱氨酸蛋白酶(PLCPs)作为一类重要的蛋白水解酶,在植物生长发育以及胁迫应答过程中都发挥着重要作用。本研究从抗、感赤霉病小麦品种差异表达基因谱中获得1个注释为RD21 Cysteine proteases的EST(表达序列标签),以此序列检索小麦最新基因组数据库并设计引物,从小麦中克隆到3个基因,分别命名为TaRD21-2A、TaRD21-2B和TaRD21-2D,属于PLCPs RD21家族。序列分析表明,3个基因的开放阅读框长度分别为1410、1428和1419 bp,分别编码469、475和472个氨基酸。序列比对发现,3个基因的序列相似性为89.3%,所编码蛋白的氨基酸序列相似性为95.6%。系统进化分析表明,TaRD21-2A、TaRD21-2B和TaRD21-2D蛋白的同源性较高,且与乌拉尔图小麦TuRD21A蛋白聚为一类。qRT-PCR分析表明,3个TaRD21基因均受水杨酸(SA)、乙烯利(ETH)以及赤霉病菌诱导表达;感病品种中,TaRD21-2A对SA和赤霉病菌的响应更迅速,且表达量较高;抗病品种中,TaRD21-2B和TaRD21-2D基因对ETH的响应更迅速。

木瓜蛋白酶制备北极甜虾虾壳多肽工艺研究

以北极甜虾虾壳为对象,研究从北极甜虾虾壳中提取多肽的工艺。通过单一实验因素实验,得到:酶浓度为10%、酶解时间为40 min、酶解温度为50℃、pH=4时多肽产率和水解度均最高。通过四因素三水平的正交试验得出最优工艺条件,即酶解时间为40 min、酶浓度为12.5%、酶解pH为4、酶解温度为50℃。该工艺可为有壳类海产废物制备活性肽积累更多的经验,为其实现工业化、实现废弃物有效利用提供有力支持。

五味子蛋白酶解前后抗氧化活性和功能特性

以五味子蛋白为原料,评价中性蛋白酶和木瓜蛋白酶对五味子蛋白酶解前后的抗氧化活性和功能特性;根据两种蛋白酶最适酶解条件,对五味子蛋白酶解,通过扫描电子显微镜、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、游离巯基和二硫键含量测定分析其结构,并测定其体外清除羟基自由基、DPPH自由基和ABTS~+自由基的能力,测定亚铁离子螯合能力和铁离子还原能力,并对不同酶解产物的持水性、持油性、乳化性和乳化稳定性、起泡性和泡沫稳定性等功能特性进行评价;结果显示,五味子蛋白经酶解后相对分子量显著下降,中性蛋白酶酶解产物分子量最低,中性蛋白酶酶解产物水解度最高,为26.45%,酶解效果优于木瓜蛋白酶。以五味子蛋白为参照,酶解可以提升其抗氧化能力,中性蛋白酶酶解产物抗氧化能力优于木瓜蛋白酶酶解产物,但木瓜蛋白酶酶解产物具有较好的还原能力。五味子蛋白经酶解后,溶解性、乳化性和乳化稳定性、起泡性和泡沫稳定性均提高,并且中性蛋白酶酶解产物功能特性优于木瓜蛋白酶酶解产物。扫描电子显微镜观察到五味子蛋白经两种不同蛋白酶酶解后,产生不同程度的碎片和条状结构,并且木瓜蛋白酶的酶解产物中存在部分较大的片状结构,中性蛋白酶酶解产物呈现出细小的无规则碎片结构,相对松散。同时与五味子蛋白相比,两种酶解产物游离巯基含量均增加,其中中性蛋白酶酶解产物二硫键含量最小。综上,酶解可以降低五味子蛋白分子量,提升五味子蛋白的抗氧化活性和功能特性。

高压处理对木瓜蛋白酶活性的影响及分子动力学模拟

为研究超高压处理对木瓜蛋白酶活性的影响及分子机制,将木瓜蛋白酶溶液经0.1、200和600 MPa处理,测定其活性变化,并对木瓜蛋白酶在这3种压力下进行150 ns的分子模拟,分析RMSD(均方根误差)、RMSF(均方根涨落)、回旋半径、氢键、溶剂可及表面积、体积、二级结构和分子表面结构等的变化。结果显示,200 MPa对木瓜蛋白酶起到激活作用,而600 MPa条件下酶活性降低26.2%。分子模拟表明高压处理能减小酶蛋白结构的波动;减少蛋白体积,使蛋白结构更加致密;蛋白溶剂可及表面积降低,特别是疏水表面积;高压能破坏酶蛋白间的氢键,使蛋白中β-折叠增加,而α-螺旋则是在600 MPa明显减少。200 MPa下酶的激活可能与该压力下酶活性中心的结合口袋变大因而更易与目标蛋白质结合有关;而600 MPa下酶活性的部分抑制则与该压力下酶结构遭受较大破坏有关,如α-螺旋和氢键的破坏、疏水表面积和蛋白体积的减小。从分子机制上明确了高压下木瓜蛋白酶活性变化的机理。

木瓜蛋白酶与超高压技术嫩化驼肉的研究

研究木瓜蛋白酶和超高压嫩化处理对双峰驼腱子肉的嫩度及营养品质的影响。对木瓜蛋白酶浓度、溶剂pH值、嫩化温度、嫩化时间、超高压压力水平、压力时间进行单因素实验,通过测定骆驼肉的蒸煮损失、系水力、pH值、色泽、质构特性和最大剪切力,筛选两种处理方式嫩化骆驼肉的最佳条件。通过L_(9)(3^(4))正交试验筛选出驼肉的最佳嫩化工艺,结果表明:驼肉经木瓜蛋白酶和超高压嫩化处理后嫩度均有所提高,木瓜蛋白酶的最佳嫩化条件为:酶浓度120 U/mL,溶剂pH 6,嫩化温度55℃、嫩化时间2 h;超高压最佳嫩化条件为:压力250 MPa、处理时间20 min。经木瓜蛋白酶嫩化的驼肉剪切力有明显降低,超高压嫩化的效果虽没有酶嫩化效果明显,但能较好地保护肉中的营养物质。研究结果为畜禽肉的相关嫩化技术的应用提供参考依据,也为后续驼肉及其相关产品的开发奠定了基础。

分子动力学模拟抗坏血酸对木瓜蛋白酶活性的影响

为探究抗坏血酸对木瓜蛋白酶活性的影响,以实验结果为基础,利用分子对接和分子模拟技术对二者的结合机制进行分析。结果表明:3种浓度(0.1、0.2、0.3 mmol/L)的抗坏血酸均能促进木瓜蛋白酶酶活性,平均激活率分别为10%、21%、28%,抗坏血酸浓度越高,激活作用越明显;分子模拟结果表明,木瓜蛋白酶与抗坏血酸结合后均方根误差呈略微上升的趋势,木瓜蛋白酶内部的氢键数量降低,结合前氢键数量平均值为146,而加入抗坏血酸后为143,总可及表面积增加2.38 nm2,且3个活性位点(Asp158、His159、Cys25)的均方根波动程度均增大,发挥主要催化作用的25号位半胱氨酸与2个辅助氨基酸的间距缩小。因此,木瓜蛋白酶的激活可能是由于抗坏血酸的加入引起了蛋白活性中心结构的变化,从而使木瓜蛋白酶更有利于发挥催化作用。

木瓜蛋白酶提取辣木籽多肽的工艺研究

以脱脂辣木籽粉为原料,选用超声波辅助木瓜蛋白酶提取其多肽,考察酶在不同pH、加酶量、超声功率、超声时间以及温度对脱脂辣木籽多肽含量的影响。在单因素的基础上,再通过设计L9(34)正交试验,得到超声波辅助木瓜蛋白酶提取多肽的最佳工艺为:超声温度为50℃、酶添加量为3.5%、pH为7、超声功率为210 W、超声时间为45 min,在该条件下,得到取辣木籽多肽浓度达到5.13 mg/mL。本研究为辣木籽多肽提取及其活性成分的继续深入研究提供参考价值。

木瓜蛋白酶对调理猪排品质的影响

本文以猪后肘肉为原料,探究木瓜蛋白酶对调理猪排品质的影响,对调理猪排的感官评价、质构特性、滋味、蛋白质降解程度以及水分分布状态进行分析。结果表明:浓度为340 U/g的木瓜蛋白酶显著改善了调理猪排的感官评价和质构特性(P<0.05);调理猪排中的蛋白质显著降解,肉的滋味得到改善,肉中不易流动水含量升高,自由水含量降低;浓度为500 U/g的木瓜蛋白酶会使调理猪排中的蛋白质降解过度,口感不佳,食用品质下降;木瓜蛋白酶在调理猪排的感官评价、质构特性和滋味方面有很大的优势,为木瓜蛋白酶在肉制品中的应用提供理论依据。

不同浓度木瓜蛋白酶建立兔膝骨关节炎模型的比较研究

目的:比较不同浓度木瓜蛋白酶建立的兔膝骨关节炎模型,为研究骨关节炎病理及诊疗方法提供数据支持。方法:将60只新西兰大耳白兔随机分为4组,分别在1、3、5d右膝关节腔注射2%(低剂量组)、5%(中剂量组)、10%(高剂量组)(w/v)木瓜蛋白酶和0.03mol/L的L-半胱氨酸混合溶液0.1ml/kg(实验组),以及等量生理盐水(对照组)。整个实验过程观察兔状态并记录体重和膝关节宽度。首次注射后第2、4、6周将兔分批处死,取股骨髁、胫骨平台及滑膜做大体及组织病理学观察,并进行评分。结果:实验组均出现关节宽度增大、关节软骨变薄、基质分解破坏、滑膜增生等炎症及退行性改变,严重程度随浓度增高而增高,也随时间延长而发展;对照组无上述改变,二者比较差异有统计学意义。结论:兔膝骨关节腔注射2%、5%、10%木瓜蛋白酶和0.03mol/LL-半胱氨酸混合溶液0.1ml/kg可制备不同严重程度的骨关节炎模型,周期短,可重复且成功率高。