抗稻瘟病菌活性木荷皂甙类似物的分离条件及其分离

新型木荷各皂甙极性相似,结构相近,给分离带来了极大困难,制约了抗稻瘟病菌活性木荷皂甙先导物的确立。运用单因素(色谱柱填料、流速、流动相配比)探索其色谱行为,综合塔板理论、速率理论及线性放大原理推导,以及菌丝生长速率法测定活性,确定了木荷皂甙的色谱分析条件为:Hypersil BDS C18色谱柱,流速0.8 mL/min,特定的梯度洗脱程序,获得了较为满意的色谱分析图谱,推导出木荷皂甙的速率理论半经验公式为H=!23.5195×10!3+0.1155×10!1/u+14.9675×10!3u,应用到半制备HPLC,成功分离出7个木荷皂甙单体,其中2种具有强抗稻瘟病菌活性,其EC50/EC90分别为5.9123/21.6912,5.2064/16.9781。

木荷皂甙对稻瘟病菌细胞形态及生理生化指标的影响

为开发新型木荷皂甙杀稻瘟剂，分别采用菌丝生长速率法、显微观察、电导法和比色法研究木荷活性皂甙对稻瘟病菌Magnaportheoryzae（Hebert）Barr．的活性，以及对病原细胞形态及其胞外生理生化成分含量的影响。结果显示：木荷皂甙M2IGR5抗稻瘟病菌的EC50为16．41μg／mL、EC90为76．16μg／mL；其EC50和EC90处理稻瘟病菌茵丝体24h后，可导致菌丝断裂、细胞肿胀；处理去壁的原生质体2h即可导致其变型、粘连、破裂，引起病原菌菌丝细胞内含物大量渗漏；处理2h后的可溶性蛋白渗漏量和可溶性总糖分别较对照高10倍和30～60倍，且处理液的电导率升高、几丁质酶活性增强、胞壁几丁质组成成分N-乙酰葡萄糖胺脱落。研究表明，木荷皂甙抗稻瘟病菌不仅导致膜通透性增大、完整性丧失，而且还间接引起细胞壁降解，加速了稻瘟病菌细胞的凋亡。