甘蔗(Saccharum spp.hybrids)木菠萝素(Jacalin)基因的克隆及生物信息学分析

木菠萝素(Jacalin)类凝集素(jacalin-related lectins,JRLs)是一类糖结合蛋白,以家族形式存在于植物中并参与各种生物进程,是植物凝集素超家族中的一类新成员。本研究从甘蔗(Saccharum spp.hybrids)叶片全长c DNA文库中克隆了一个甘蔗木菠萝素基因的c DNA全长序列,命名为Sc JRL(Gen Bank登录号为:KT971368)。Sc JRL全长845 bp,开放读码框长444 bp,共编码147个氨基酸。生物信息学分析显示,Sc JRL推导编码的蛋白为稳定亲水性蛋白,分子量为16.15 k D,预测等电点为6.13。采用实时荧光定量PCR技术,对Sc JRL基因在不同浓度以及不同处理时间的非生物胁迫处理下的表达进行了检测。结果显示,Sc JRL基因分别受Me JA(100μmol/L),SA(5 mmol/L)和H2O2(10 mmol/L)的诱导上调表达,且在处理3 h时表达量已达到最高;Sc JRL基因还分别受到ABA(100μmol/L)和Na Cl(250 mmol/L)的抑制而下调表达,且二者呈现出相同的表达模式。此外,不同处理的H2O2均诱导Sc JRL显著上调表达。当采用中等浓度的外源胁迫处理时,Sc JRL对ABA或Na Cl应答趋势的一致性,以及Sc JRL对SA或H2O2应答趋势的一致性,这说明甘蔗Sc JRL基因作为早期响应基因参与了Me JA和SA信号通路介导的甘蔗防御反应。并且该基因经由SA信号通路正向调控参与了甘蔗应答氧化胁迫,在甘蔗应答抗氧化胁迫机制过程中扮演积极的角色。此外,Sc JRL还经由ABA信号通路介导参与了甘蔗应答盐胁迫,且与ABA信号呈正相关。

木菠萝凝集素的纯化与性质研究

木菠萝种子经抽提、４０％～６０％饱和度硫酸铵沉淀和Ｇａｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和层析，得到纯化的木菠萝凝集素（Ｊａｃａｌｉｎ）。Ｊａｃａｌｉｎ分子量约为５８２００，由分子量分别是１４０００和１５８００的亚基组成，等电聚焦电泳显示多条区带，其ｐＩ为５．７～８．６５，Ｓｃｈｉｆｆ＇ｓ试剂染色证明它是一种糖蛋白，Ｎ－末端为精氨酸和甘氨酸。Ｊａｃａｌｉｎ能凝集除山羊、鸡以外的多种动物和人Ａ、Ｂ、Ｏ和ＡＢ血型红细胞，凝集活性受Ｎ－酰凝半乳糖胺（ＧａｌＮＡｃ）和半乳糖（Ｇａｌ）抑制。在ｐＨ值为４．５～１０，ｐＨ改变不影响Ｊａｃａｌｉｎ凝集活性。

标记木菠萝凝集素对大肠癌的鉴别性诊断

目的：探讨木菠萝凝集素在临床上的应用。方法：本文采用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记木菠萝凝集素，用亲和组织化学的方法，观察８０例结肠炎及结肠癌患者肠粘膜组织中凝集素受体的标记阳性率。结果：肠炎阳性率为２７．５％，肠癌为８２．５％，肠癌的凝集素受体阳性率显著高于肠炎（Ｐ＜０．０１）。结论：提示用亲和组织化学法检测肠粘膜中木菠萝凝集素受体可作为鉴别结肠癌、肠炎的一种辅助诊断措施。

采用木菠萝凝集素检测胃液中胃蛋白酶的临床研究

目的：探讨胃蛋白酶在胃部疾病中的作用。方法：采用ＨＲＰ标记ｊａｃａｌｉｎ，通过ＥＬＩＳＡ法检测各种胃病患者胃液中的胃蛋白酶。结果：胃蛋白酶在正常组（１５例）、胃炎组（３０例）、十二指肠溃疡组（３０例）、胃溃疡组（３０例）及胃癌组（１０例）中含量无显著性差异，但胃液ｐＨ＜３的胃蛋白酶含量明显高于ｐＨ＞４的酶含量，表明胃酸增加，胃蛋白酶的分泌亦增加，但胃蛋白酶与胃部疾病的发生关系不密切。结论：胃粘膜屏障的局部缺陷使之对胃蛋白酶抵抗力下降，可能与消化性溃疡的发生关系更为密切。