番茄灰霉病菌作用方式不同木霉菌REMI突变株生物学特性的研究

以木霉菌出发菌株T21及作用方式不同木霉菌REMI突变株为试材,研究了对番茄灰霉病菌作用方式不同木霉菌突变株间孢子萌发和产孢能力的差异以及对不同温度、pH值的适应性和对碳氮源的利用能力。结果表明:突变株Ttrm68孢子萌发率最高,为98%;突变株Ttrm25产孢能力最强,极显著高于出发菌株T21。不同木霉菌突变株对温度适应性有所改变,菌株Ttrm68表现出耐高温,在温度高达40℃时仍能生长。不同木霉菌突变株在不同pH值下的培养性状和产孢情况有所改变,菌株Ttrm68在碱性条件下能产厚垣孢子。不同木霉菌突变株对不同碳氮源的利用能力改变较大,菌株Ttrm68能够充分利用各种碳氮源,生长速度最快。

木霉菌及其REMI突变株与油菜联合吸附镉污染土壤研究

研究从木霉菌及其REMI(限制性内切酶介导的基因整合)突变株中,筛选对重金属镉具有较高耐受性和吸附能力的菌株,将其处理油菜品种沪油20,分析油菜与木霉菌联合吸收土壤中镉的效应。测量在镉胁迫条件下,不同木霉菌株与沪油20组合在株高、干重、相对生物量及镉净化率的变化。结果表明:在没有镉处理土壤条件下,野生菌T23可明显促进沪油20的生长,而在土壤有镉的胁迫条件下,突变株P6、H6可明显提高沪油20对土壤镉的净化率。

长枝木霉菌M-1的突变株筛选以及纤维降解特性研究

本研究通过紫外(UV)诱变方法对纤维素降解菌长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)M-1进行诱变,对诱变菌株进行筛选、鉴定,并对其酶活力和玉米秸秆降解特性进行测定。结果表明:有5个菌株的水解圈直径/菌落直径(D/d)值较对照增大。ITS rDNA测序结果表明,5#菌株发生了突变。通过形态学观察和聚类分析,确定5#菌株也为长枝木霉。酶活力测定结果显示,5#菌株各酶活均有所提高,滤纸酶活(Fpase)提高了30.06 U/mL,外切酶活(CBH)提高了24.44 U/mL,内切酶活(EG)提高了19.01 U/mL。玉米秸秆粉降解结果表明,菌株5#的降解率、纤维素降解率及半纤维素降解率分别提高了10.01%(2.48倍)、6.46%(1.8倍)和3.03%(1.58倍)。经过电镜扫描发现,菌株5#对玉米秸秆的降解程度比对照更彻底。本研究为农作物秸秆得以大量利用提供了优良的菌株资源。

木霉REMI突变株主要生防酶活性改变及其基因部分序列差异的研究

本文探讨了来源于同一出发菌株木霉T21的不同木霉REMI突变株的主要生防酶活性的改变及其基因部分序列的差异,利用生化技术测定了木霉几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶酶活性,并对这两种酶的基因部分序列进行了分析。结果表明,木霉REMI突变株几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性变化较大;相对于出发菌株T21,菌株Ttrm68和Ttrm31酶活性极显著高于出发菌株T21,而Ttrm94则极显著低于T21。采用简并引物克隆几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶基因的部分序列,发现菌株Ttrm68、Ttrm31在几丁质酶基因中插入了GGTATCGATATCGAC片段,菌株Ttrm94在β-1,3-葡聚糖酶基因中插入了GTC片段。

木霉的空间诱变效应

本文对产纤维素酶的木霉菌孢子和斜面培养菌体搭载中国第18颗返回式卫星后,菌落形态和产酶能力的变化进行了研究。实验结果表明,搭载菌株的菌落形态发生变异,菌株的生长周期出现了缩短或延长的现象。对搭载的木霉菌株进行筛选,获得3株产酶能力大幅度提高的优良突变菌株,产酶能力提高了50%以上,且性状遗传稳定。

木霉菌REMI变异株对部分生态因子的影响

采用常规微生物分离和植物生物量测定等方法,将木霉菌REMI变异菌株的孢子进行种子接菌、土壤接菌、水中接菌,研究木霉菌REMI变异菌株对农作物甜瓜和玉米及杂草等生长性状、甜瓜根际土壤微生物和鱼苗生长以及在水中存活等的影响,检测其生物安全性。结果表明,除Ttrm53外,其余木霉菌变异株和出发菌株T21对甜瓜和玉米种子安全,并且能够显著提高种子的出苗率、增加须根数和促进幼苗生长;部分变异菌株对杂草具有抑制作用;供试木霉菌变异株对甜瓜根际土壤真菌有抑制作用,对细菌和放线菌群体数量无显著影响;木霉菌孢子在河水及自来水中均不能萌发,分生孢子在水中存活约12～18天,厚垣孢子约18～27天,菌体自行消解;对鱼苗生长没有不良影响。

生防木霉菌对嘧霉胺抗药性变异及其相关蛋白诱导

选育对杀菌剂具有抗性的生防菌株是生物防治研究的重要内容之一。通过药剂选择培养基及紫外光诱导获得对嘧霉胺具抗性的突变体 KTm-1、KTm-2。研究结果显示,与亲本菌株相比,抗性突变体的耐药性提高20倍以上。抗性菌株在无药培养基上连续转代8次,耐药性未见下降。活体拮抗测定表明,耐药菌株的抑菌能力略高于亲本菌株。PAGE 显示抗性突变体 KTm-1的可溶性蛋白谱带比其亲本菌株多4条,其中 R_f=0.64的蛋白谱带是两个耐药菌株的特异性谱带,可视其为耐药相关蛋白。经 Sephadex G-100柱层析纯化,SDS-PAGE 测定耐药蛋白分子量为44.1KDa。