硝酸银硅胶色谱法制备蒙药土木香中土木香内酯和异土木香内酯

目的探讨蒙药土木香中土木香内酯及异土木香内酯的制备方法。方法采用硝酸银硅胶色谱法进行制备。结果得到两个色泽优良、克数较大的结晶化合物,根据其理化性质及波谱技术鉴定为土木香内酯和异土木香内酯。结论硝酸银硅胶色谱法对土木香内酯及异土木香内酯能实现满意分离,且产量大、纯度高、操作简单,是一种高效快速的制备方法,为土木香内酯及异土木香内酯的广泛应用提供精准可靠的参考资料。

气相色谱法测定参芪健胃颗粒中土木香内酯、异土木香内酯的含量

[目的]建立参芪健胃颗粒中土木香内酯和异土木香内酯的含量测定方法。[方法]采用聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱,载气为高纯氮气;进样口温度为260℃;检测器温度为280℃,柱温为程序升温;检测器为氢火焰离子化检测器(FID)。[结果]土木香内酯、异土木香内酯分别在0.004 032~0.040 32μg、0.004 06~0.040 6μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为100.0%和99.6%。[结论]该方法可用于参芪健胃颗粒的质量控制,是一种操作简单、快速准确的理想检测方法。

异土木香内酯及其衍生物的药理作用及机制

随着分子生物学和药物化学的迅速发展,医药研究领域中天然产物及其衍生物作为治疗剂的开发受到极大关注。异土木香内酯及其衍生物具有独特的药理活性,在自噬、免疫、抗炎、抗菌及抗肿瘤等方面具有多重药用价值,尤其在抗肿瘤领域展现出潜在的应用前景。然而,异土木香内酯及其衍生物的具体药理机制和临床应用潜力尚未被充分揭示。未来,深入探讨异土木香内酯及其衍生物的药理机制有助于更好地评估其临床应用的可能性。

新型去氢木香内酯/郁金香素A拼接螺环氧化吲哚的合成及其抗白血病活性

开发天然产物优势骨架的多样性衍生物库是天然有机化学的一个重要课题。本文以脯氨酸、靛红和去氢木香内酯/郁金香素A为起始原料,通过[3+2]环加成反应,N-氧化反应和分子内1,2-迁移导致的扩环反应,得到8个未见文献报道的新型目标产物去氢木香内酯/郁金香素A拼接螺环氧化吲哚(4a~4h),总产率43%~63%,dr值>20∶1,其结构经^(1)H NMR,^(13)C NMR和HR-MS(ESI-TOF)表征,化合物4e的相对构型通过单晶X-射线衍射进一步进行了确定。采用MTT法研究了(4a~4h)对人白血病细胞(K562)的体外抗肿瘤活性。结果表明:去氢木香内酯拼接螺环氧化吲哚(4b,4c)和郁金香素A拼接螺环氧化吲哚(4f,4g)对K562具有一定的抑制活性。

去氢木香内酯抗肿瘤作用机制研究进展

去氢木香内酯是从菊科云木香属植物木香Aucklandia lappa Decne.的根部提取的一种倍半萜内酯类化合物,是木香的主要活性成分之一,有抗菌、消炎、抗病毒、抗溃疡、抗糖尿病和抗肿瘤等药理活性。近年,去氢木香内酯在抗肿瘤领域引起了广泛关注。研究发现,去氢木香内酯能抑制肿瘤细胞的增殖和迁移能力,对肺癌、宫颈癌等癌症有抑制作用。其抗肿瘤机制主要包括抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞侵袭和迁移、诱导肿瘤细胞凋亡和逆转肿瘤细胞多药耐药。本文对近年来去氢木香内酯的抗肿瘤作用机制进行了详细综述,旨在为该类药物在临床肿瘤治疗中提供新的理论支持、新的思路以及参考。

UPLC-MS/MS法测定心可舒胶囊中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量

目的 建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定心可舒胶囊中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量。方法 以Waters ACQUITY UPLC?BEH C18(1.7μm×2.1 mm×100 mm)为色谱柱,流动相为0.1%甲酸-乙腈(梯度洗脱),流速为0.3 ml/min,柱温35℃,进样量2μl;质谱采用电喷雾离子源(ESI)、正离子扫描模式,以多反应监测模式(MRM)进行数据采集,木香烃内酯的定量离子对为m/z 233→187,去氢木香内酯的定量离子对为m/z 231→185。结果 木香烃内酯与去氢木香内酯分别在0.0430~2.1498μg/ml、0.0439~2.1970μg/ml浓度范围内线性关系良好(r≥0.9913),平均加标回收率为102.60%和95.56%,RSD分别为3.6%与2.3%。3批样品木香烃内酯的含量范围为5.267~5.574 mg/g,去氢木香内酯的含量范围为4.822~5.191 mg/g。结论 所建方法能有效测定心可舒胶囊中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量,可为完善该制剂的质量标准提供借鉴。

土木香内酯上调miR-3178抑制胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨土木香内酯调控微小RNA(miR)-3178对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法不同浓度的土木香内酯作用于QBC939细胞48 h,细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖,划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测QBC939细胞、胆管癌组织中miR-3178的相对水平。转染miR-3178模拟物至QBC939细胞,检测过表达对QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响。转染miR-3178抑制物至QBC939细胞,检测抑制miR-3178表达联合土木香内酯对QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果土木香内酯显著增加QBC939细胞抑制率、凋亡率、miR-3178的相对水平(P<0.05),降低克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数(P<0.05),呈剂量依赖性。与癌旁组织比较,胆管癌组织中miR-3178表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-3178显著增加QBC939细胞抑制率和凋亡率(P<0.05),降低克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数(P<0.05)。抑制miR-3178表达部分逆转了土木香内酯对QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论土木香内酯通过上调miR-3178表达抑制胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭。

去氢木香内酯通过PI3K/Akt/mTOR通路对鼻咽癌细胞自噬和凋亡的影响及机制

目的 探讨去氢木香内酯(DCL)对鼻咽癌细胞CNE1自噬和凋亡的影响及可能机制。方法 含不同浓度DCL培养液(0、5、10、20、40μmol/L)培养对数生长期CNE1细胞48 h,CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞术检测细胞凋亡率;透射电子显微镜检测CNE1细胞自噬体形成情况;Western blotting法检测CNE1细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活性水平及微管相关蛋白1A/1B轻链3(LC3)、p62、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)、cleaved caspase-3蛋白相对表达水平。结果 CNE1细胞存活率、PI3K、Akt和mTOR蛋白活性水平及p62、Bcl2蛋白相对表达水平均随DCL作用浓度增大而降低,CNE1细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Bax和cleaved caspase-3蛋白相对表达水平随DCL作用浓度增大而升高(P<0.05),同时DCL给药可显著促进CNE1细胞凋亡小体及自噬体的形成;DCL作用效果呈剂量依赖性(P<0.05)。结论 DCL可促进鼻咽癌细胞发生凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR通路激活有关。

HPLC同时测定肠康片中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量

目的建立肠康片中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯的HPLC含量测定方法。方法色谱柱为岛津Eclipse-XDB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.02%磷酸(40∶60),流速1.0 mL·min^(-1),柱温为35℃,检测波长为225 nm。结果吴茱萸碱y=102097.5127x+1168.9695(r=0.9999),线性范围为0.5016~5.0160μg·mL^(-1),平均回收率为101.52%,RSD=1.87%(n=6);吴茱萸次碱:y=524410184x-316.7073(r=0.9998),线性范围为0.5021~5.0209μg·mL^(-1),平均回收率为101.56%、RSD=2.06%(n=6);木香烃内酯:y=1757575.24234x-75774.20833(r=0.9996),线性范围为0.0299~0.2993 mg·mL^(-1),平均回收率为100.05%、RSD=1.26%(n=6);去氢木香内酯:y=1510424.60319x-66181.54167(r=0.9996),线性范围为0.0303~0.3027 mg·mL^(-1),平均回收率为99.78%,RSD=1.05%。结论本方法灵敏、准确可靠,可作为肠康片质量控制标准。

木香内酯诱导人脑星形胶质母细胞瘤细胞凋亡

[目的]探究木香内酯诱导人脑星形胶质母细胞瘤细胞凋亡的作用机制。[方法]通过CCK8法检测木香内酯对U87细胞增殖作用的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染法检测木香内酯对U87细胞凋亡率的影响,采用JC-1染色法检测木香内酯对U87细胞线粒体膜电位的影响;采用DCFH-DA探针检测木香内酯对U87细胞中ROS含量的影响;采用生化法检测木香内酯对U87细胞氧化应激指标丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、微量还原型谷胱甘肽(GSH)和一氧化氮(NO)含量的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测木香内酯对U87细胞Caspase-3、Bax、Bcl-2的mRNA表达水平的影响;采用分子对接寻找木香内酯与Caspase-3、Bax、Bcl-2的具体结合位点。[结果]木香内酯呈剂量依赖性抑制U87细胞的生长,细胞半抑制浓度IC_(50)为11.27μmol/L;细胞凋亡水平检测结果显示木香内酯20μmol/L组U87细胞凋亡率增加,差异具有统计学意义(P<0.001);线粒体膜电位水平检测结果显示木香内酯5μmol/L组、10μmol/L组、20μmol/L组U87细胞线粒体膜电位降低,差异具有统计学意义(P<0.001);氧化应激检测水平显示,木香内酯呈剂量依赖性上调U87细胞中ROS、MDA、NO水平;下调SOD、GSH水平,差异具有统计学意义(P<0.05);木香内酯20μmol/L组U87细胞Caspase-3、Bax mRNA表达水平均上调,差异具有统计学意义(P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达水平下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。分子对接结果显示木香内酯分别与Caspase-3、Bcl-2、Bax氨基酸残基ARG-164,LEU-168,ARG-66形成稳定的结合能。[结论]木香内酯能明显抑制U87细胞生长和介导细胞高氧化应激水平,降低线粒体膜电位并促进细胞凋亡。

去氢木香内酯对肝纤维化模型小鼠的保护作用

【目的】去氢木香内酯(DHL)对四氯化碳(CCl4)造模建立的肝纤维化小鼠的抗纤维化作用研究。【方法】将40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组,分别为对照组、模型组、DHL低剂量组(5 mg/kg)、DHL高剂量组(20 mg/kg),每组10只。CCl4建模、去氢木香内酯干预下,在特定时间点处死小鼠,检测肝体比、肝功能(ALT、AST);观察肝脏组织病理学形态改变、胶原纤维沉积情况;检测肝组织α-SMA、CollagenⅠ水平。【结果】与对照组相比,CCl4模型组的肝体比、ALT、AST明显升高(P<0.05);与模型组比较,DHL低剂量组及DHL高剂量组肝体比、ALT、AST明显下降(P<0.05),且高剂量组各指标差异较低剂量组更明显(P<0.05);各剂量组小鼠肝脏组织病理变化得到明显的改善,肝组织中α-SMA蛋白、CollagenⅠ蛋白表达出现不同程度的下降。【结论】去氢木香内酯能够改善CCl4诱导的肝纤维化小鼠肝功能和纤维化水平。

去氢木香内酯通过PI_(3)K/Akt通路对喉癌细胞增殖、转移和侵袭的影响

目的探讨去氢木香内酯对喉癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及对磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidyl inositol 3 kinase,PI_(3)K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路的调节作用。方法第4代对数生长期Hep-2细胞经不同浓度(0、10、20、30μmol/L)去氢木香内酯处理后,MTT法检测细胞增殖抑制率、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白印迹法检测p-PI_(3)K、p-Akt、Sox-2、CD44、CD133和Nanog蛋白相对表达量。结果与0μmol/L组比较,10、20和30μmol/L组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均升高(P<0.05),迁移和侵袭能力均减弱(P<0.05),p-PI_(3)K、p-Akt、Sox-2、CD44、CD133和Nanog蛋白相对表达量均降低(P<0.05),且具有浓度依赖性。结论去氢木香内酯可抑制喉癌细胞增殖、迁移和侵袭,其可能作用机制是通过抑制PI_(3)K/Akt信号通路发挥作用。

HPLC法测定越鞠保和丸中苍术素、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量

目的:建立HPLC法测定越鞠保和丸中苍术素、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量。方法:使用C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇作为流动相A,0.2%磷酸水溶液作为流动相B,梯度洗脱;检测波长为木香烃内酯、去氢木香内酯225 nm,苍术素340 nm;柱温40℃;流速1.0 ml/min;进样量为10μl。结果:苍术素在1.036 79~103.679μg/ml范围内线性良好(r=1.000 0),木香烃内酯在2.951 17~118.046 8μg/ml范围内线性良好(r=1.000 0),去氢木香内酯在3.034~303.4μg/ml范围内线性良好(r=1.000 0)。苍术素平均回收率为103.20%,RSD为0.84%;木香烃内酯平均回收率为103.06%,RSD为0.52%;去氢木香内酯平均回收率为91.80%,RSD为0.72%。结论:本方法操作简单,专属性强,可以用于越鞠保和丸中苍术与木香两味药材的质量控制。

土木香内酯调控lncRNA PCAT19/miR-143-3p分子轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响

目的探讨土木香内酯(alantolactone,AL)对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响及其对lncRNA PCAT19/miR-143-3p分子轴的调控作用。方法原代分离培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,不同浓度的AL处理瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别将si-NC、si-PCAT19、miR-NC、miR-143-3p mimics转染至瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别将pcDNA、pcDNA-PCAT19转染至瘢痕疙瘩成纤维细胞后加入AL培养24 h;CCK-8实验、平板克隆形成实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;qRT-PCR法检测瘢痕疙瘩组织、正常皮肤组织与瘢痕疙瘩成纤维细胞中PCAT19与miR-143-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测PCAT19与miR-143-3p的靶向关系;Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达量。结果AL能够以剂量依赖性的方式抑制细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭,并可抑制PCAT19、MMP-2、MMP-9的表达,而促进miR-143-3p的表达;瘢痕疙瘩组织中PCAT19的表达量高于正常皮肤组织,而miR-143-3p的表达量低于正常皮肤组织;PCAT19可靶向调控miR-143-3p;转染si-PCAT19可抑制细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;转染pcDNA-PCAT19可拮抗AL对细胞生物学行为的作用。结论土木香内酯可通过调控PCAT19/miR-143-3p分子轴而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。

去氢木香内酯在内生真菌Y0液体发酵中的生物转化研究

目的去氢木香内酯在内生真菌Y0液体发酵中的生物转化。方法对内生真菌Y0纯化培养,采用色谱法及波谱技术对转化产物进行分离及结构鉴定,并采用MTT法评价其对结肠癌SW620细胞的毒性。利用网络药理学相关数据库获取化合物1、2以及结肠癌SW620细胞靶点信息,对化合物与结肠癌SW620细胞结合能较强的靶点做进一步的分子对接。结果去氢木香内酯在Y0菌液中转化得到2个化合物,分别鉴定为(1S,3S,5S,6S,7S,11S)-3-hydroxyl-11,13-dihydrodehydrocostuslactone和(1S,3S,5S,6S,7S,11R)-3-hydroxyl-11,13-dihydrodehydrocostuslactone。化合物1和2对结肠癌SW620细胞的IC50分别为(42.82±8.32)μg/mL,(29.23±7.17)μg/mL。化合物1和2与结肠癌SW620细胞均有结合靶点。结论化合物1和2为愈创木烷型倍半萜类化合物,化合物1与化合物2对SW620细胞毒性相比,化合物2的细胞毒性更强。

用HPLC法同时测定六味安消胶囊中土木香内酯、异土木香内酯、大黄素和大黄酚的含量

目的：建立HPLC法同时测定六昧安消胶囊中土木香内酯、异土木香内酯、大黄素和大黄酚含量的方法。方法：采用HPLC-二极管阵列检测器法（HPLC—DAD），色谱柱：Agilent Eclipse PlusC18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-0．04％甲酸（60：40），流速：1．0mL／min，检测波长：220nm，柱温：25℃，进样量：10μL。结果：土木香内酯、异土木香内酯、大黄素和大黄酚的线性范围分别是：2．46～98．4、2．48～99．2、2．56～102．4和2．58～103．2μg／mL，色谱响应线性关系良好。日内和日间RSD均〈2％；最低检测限分别为1．75、1．31、0．50和0．49μg／mL。稳定性结果为峰面积的RSD分别为1．29％、1．40％、1．30％和0．45％，在48h内稳定。加样回收率结果分别为99．0％、100．6％、98．7％和99．7％（n＝6），RSD分别为1．03％、0．62％、1．36％和0．26％。结论：本法快速、简便，重现性好，精密度高，测定结果准确可靠，可作为该制剂的定量测定方法。

RP-HPLC测定藏木香中土木香内酯和异土木香内酯含量

目的建立了反相高效液相色谱法同时测定藏木香中土木香内酯和异土木香内酯的方法。方法采用Phenomenex Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5.0μm);流动相为乙腈-0.04%磷酸溶液(50∶50);检测波长:194nm;流速:1.0mL.min-1。结果异构体土木香内酯和异土木香内酯达到基线分离,含量测定的线性良好,线性范围和相关系数分别为0.07～4.80μg.L-1(r=0.9998),0.07～4.85μg.L-1(r=0.9998);回收率分别为97.5%和102.1%;方法精密度良好,RSD分别为1.56%和1.87%(n=5);方法重现性良好,RSD分别为1.67%和0.92%(n=5)。结论所建立的方法简便、快捷、准确,重现性好,可用于藏木香药材及其制剂的质量控制。

RP-HPLC测定藏药六味能消胶囊中土木香内酯和异土木香内酯的含量

目的：建立六味能消胶囊中土木香内酯和异土木香内酯的高效液相色谱法含量测定方法．方法：色谱柱为Kromasil C18色谱柱（250mm×4．6mm，5pm）；流动相为乙腈-0．1％磷酸溶液（58：42）；流速为1．0mL／min；检测波长：194nm．结果：土木香内酯、异土木香内酯均在0．30～1．50μg范围内呈良好的线性关系；r均为0．9998；平均回收率分别为98．2％（RSD=1．67％，n=5）和97．7％（RSD=1．48％，n=5）．结论：该方法简便、灵敏、准确，可作为六味能消胶囊的质量控制方法．

新疆木香中土木香内酯与异土木香内酯的分离鉴定

采用络合柱层法从新疆木香Inula helenium石油醚溶出部分分离得到两个结晶,经光谱分析鉴定为土木香内酯(Alantolactone)和异土木香内酯(Isoalantolactone)。

果旭阿汤中土木香内酯和异土木香内酯的含量测定

目的建立同时测定藏药果旭阿汤中土木香内酯和异土木香内酯含量的方法。方法通过优化提取方法,用气相色谱(GC)法同时测定藏药果旭阿汤中藏木香有效成分土木香内酯和异土木香内酯的含量。结果土木香内酯和异土木香内酯均在0.1～1.0 mg.mL-1(n=5)范围内呈良好线性关系。土木香内酯回收率为97.25%(n=6),RSD=0.93%;异土木香内酯回收率为97.42%(n=6),RSD=0.90%。结论该方法可用于藏药果旭阿汤中土木香内酯和异土木香内酯的含量同时快速、准确测定。