未分化胚胎细胞转录因子1与恶性肿瘤关系的研究现状

未分化胚胎细胞转录因子1(UTF1)是干细胞相关基因之一,是参与胚胎干细胞分化的重要转录因子,能促进干细胞的自我更新及分化,调控胚胎细胞和生殖细胞的增殖分化。目前,对UTF1的研究大多在干细胞和生殖细胞中,而关于UTF1与肿瘤关系的研究成果较少。越来越多的证据显示,干细胞相关基因的异常表达与肿瘤发生、转移、复发及耐药性等密切相关。其转录和表观遗传胚胎程序可以在癌细胞中重新激活,使癌细胞具有干细胞表型,并参与肿瘤的发生、发展。为获得更好的疗效,部分学者长期致力于寻找各种有效的肿瘤标志物,其中UTF1在恶性肿瘤的诊断、治疗及预后方面具有重要的潜在应用价值。

甲状腺转录因子-1、细胞角蛋白7、p63、p40在非小细胞肺癌患者中的表达及与分化程度的关系

目的探讨甲状腺转录因子-1(TTF-1)、细胞角蛋白7(CK7)、p63、p40在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达及与分化程度的关系。方法选取107例NSCLC患者和100例肺部良性疾病患者,分别作为观察组和对照组。比较两组患者及不同分化程度NSCLC患者的TTF-1、CK7、p63、p40表达情况,并比较不同分化程度NSCLC患者的临床特征。采用Logistic回归模型分析NSCLC低分化的影响因素。结果观察组患者TTF-1、CK7阳性表达率均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。低分化NSCLC患者TTF-1、CK7阳性表达率均明显高于中高分化患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。低分化NSCLC患者肿瘤直径≥5 cm、淋巴结转移比例均明显高于中高分化患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,TTF-1阳性表达、CK7阳性表达及淋巴结转移均是NSCLC低分化的危险因素(P﹤0.01)。结论NSCLC患者中TTF-1、CK7阳性表达率均较高,且TTF-1、CK7表达情况与NSCLC患者的分化程度有关。

miR-192-5p靶向CKIP-1促进骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化

背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成骨分化中发挥重要作用。目的:探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况;利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA,利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合;在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物(miR-192-5p mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-192-5p抑制剂(miR-192-5p inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),成骨诱导后第7,14天,通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况;采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论:与健康组相比,骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高,53个miRNA表达明显降低(P<0.05);利用Targetscan网站预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列(P<0.05);过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),而沉默CKIP-1的表达后,Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加(P<0.05),逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实,miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低;miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达,促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

过表达少突胶质细胞转录因子2加速小鼠胚胎干细胞分化为神经元-胶质细胞抗原2阳性少突胶质祖细胞样细胞

目的：观察少突胶质细胞转录因子2（O1ig2）过表达对小鼠胚胎干细胞（mESCs）向少突胶质祖细胞（OPCs）分化的影响.方法：将体外培养的mESCs分为空载体感染和Olig2-GFP慢病毒感染组,免疫荧光显色检测Olig2的表达.感染后9、14、21 d和28 d神经元-胶质细胞抗原2（NG2）免疫荧光显色观察mESCs向OPCs的分化情况.结果：Olig2-GFP慢病毒感染组mESCs经筛选后均为Olig2＋/GFP＋,而空载体感染组mESCs无Olig2表达.感染后9d,两组细胞均无NG2表达;感染后14d,Olig2-GFP慢病毒感染组NG2高表达,空载体感染组仅有少数细胞为NG2弱阳性;感染后21d与14 d相比,两组均无明显变化;感染后28d,两组细胞均有较强的NG2表达,组间无差异.结论：过表达Olig2能够加速mESCs分化为NG2＋的OPCs样细胞.

信号传导及转录激活因子1基因沉默促进人牙周膜细胞成骨细胞分化

目的探讨信号传导及转录激活因子1(signal transducers and activators of transcription 1,STAT1)对人牙周膜细胞骨向分化的作用及其机制。方法采用酶消化法分离培养原代人牙周膜细胞,细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激人牙周膜细胞,采用成骨分化培养基诱导人牙周膜细胞骨向分化。通过转染STAT1过表达载体或小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)实现STAT1基因过表达或基因表达沉默。采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测试剂盒和茜素红染色检测成骨分化。实时定量PCR方法检测STAT1,Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠα1,Col A1)和骨调素(osteopontin,OPN)的m RNA表达水平。Western blot方法检测STAT1和Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)的蛋白表达水平。结果 LPS炎性刺激诱导人牙周膜细胞STAT1高表达。STAT1过表达显著抑制ALP活性、骨质矿化、Runx2的核转移以及Col A1和OPN的表达水平。相反,STAT1基因沉默则显著促进ALP活性、骨质矿化、Runx2的核转移以及Col A1和OPN的表达水平。结论 STAT1基因沉默促进人牙周膜细胞成骨分化,其机制与促进Runx2核转移有关。

转录因子基因Mfhb-1的表达对苜蓿体细胞胚胎发生过程中主要内源激素含量的影响

以经2,4-D诱导的苜蓿幼嫩叶片的叶肉细胞为材料,利用HPLC技术对Mfhb-1基因的正义、反义转化植株体细胞胚胎发生过程中的的主要内源激素含量进行测定。结果显示,Mfhb-1基因的表达可能在苜蓿体细胞胚胎发生诱导初期抑制了IAA、GA3和ZT的合成,促进了ABA的合成。

转录因子PDX-1在猪胰干细胞体外诱导分化过程中的表达及意义

目的 检测转录因子PDX-1在体外诱导胰干细胞分化过程中的表达,探讨PDX-1表达的意义。方法 自动胰岛分离系统分离胰腺组织,获得纯化的胰管上皮细胞,在有血清培养基(RPMI1640)中进行细胞原代培养,而后在无血清培养基(DMEM/F12)中加入表皮生长因子(EGF)和尼克酰胺(nicotinamide)促进胰管上皮细胞中的干细胞分化。Western Blotting检测分化各个阶段贴壁细胞、衍生胰岛和成熟胰岛PDX-1蛋白表达;逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测PDX-1mRNA和上皮细胞标志抗原CK-19(cytokine-19)mRNA在分化各个阶段的表达。结果 转录因子PDX-1分化的各个阶段表达逐渐增加,上皮细胞标志抗原CK-19在各个分化阶段表达逐渐减少。结论 转录因子PDX-1可能在胰干细胞分化衍生为胰岛的过程中起重要作用。

转录因子基因Mfhb-1的表达对苜蓿体细胞胚胎发生过程中营养元素含量的影响

Mfhb-1基因是在苜蓿体细胞胚胎发生诱导早期经扣除杂交得到的HD-ZipⅠ类转录因子基因,相关研究表明,Mfhb-1基因在苜蓿体细胞胚胎发生诱导的早期可能发挥重要作用。为了进一步探讨Mfhb-1基因的生物学功能与营养元素吸收的关系,试验以经2,4-D诱导的苜蓿幼嫩叶片的叶肉细胞为材料,利用电感耦合等离子体发射光谱技术,对Mfhb-1基因的正义、反义转化植株体细胞胚胎发生发育过程中的10种营养元素含量进行了测定。结果显示,Mfhb-1基因的表达可能在苜蓿体细胞胚胎发生诱导初期促进了对Na元素的吸收,同时抑制了对Mg、Zn元素的吸收;Cu、K、Fe、Mn等元素的含量变化可能受Mfhb-1基因表达的影响较小。不过Mfhb-1基因表达与营养元素吸收的关系,以及进而如何影响苜蓿体细胞胚胎发生的详细分子作用机理等有待于进一步研究。

转化生长因子β1信号通路对胚胎肝前体细胞分化的诱导作用

目的探讨TGFβ1对胚胎肝前体细胞(HPC)分化的影响。方法体外培养HPC-E14.5细胞株并以细胞免疫荧光染色法鉴定。将细胞分为对照组(HPC)、HPC+TGFβ1组和HPC+SB431542组。HPC+TGFβ1组滴加外源性TGFβ1,HPC+SB431542组加入TGFβ1受体抑制剂SB431542,处理72 h后通过qRT-PCR法和Western Blot法分别检测AFP、Alb、细胞角蛋白19(CK19)mRNA及蛋白的表达情况;糖原染色法检测细胞分化后的功能。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Dunnett’s t检验。结果qRT-PCR检测结果:对照组的AFP mRNA表达量高于其他两组(F=128.937,P<0.01),HPC+TGFβ1组的CK19 mRNA表达量高于其他两组(F=414.467,P<0.01),HPC+SB431542组的Alb mRNA表达量最高(F=794.929,P<0.01)。Western Blot法检测结果:对照组的AFP蛋白表达量高于其他两组(F=269.000,P<0.01),HPC+TGFβ1组的CK19蛋白表达量高于其他两组(F=93.010,P<0.01),HPC+SB431542组的Alb蛋白表达水平均较其他两组明显升高(F=1086.000,P<0.01)。糖原染色法结果:对照组的糖原染色表达阳性面积比例小于其他两组(F=79.251,P<0.05)。结论TGFβ1信号诱导HPC向有功能的胆管细胞分化,而阻断TGFβ1信号通路后HPC具有向成熟肝细胞分化的趋势,分化后的胆管细胞和肝细胞具有正常的糖原储存和合成功能,这些细胞可能能够参与代谢活动。

转录因子Twist 对小鼠成肌细胞C2C12 分化的影响

转录因子Twist 是高度保守的碱性螺旋-环-螺旋蛋白家族B类成员,包括Twist 1 和Twist 2. Twist 在生长发育以及肿瘤的发生发展等过程都具有重要作用,但是其对小鼠成肌细胞系C2C12 分化过程的影响尚不明确.因此本研究探讨Twist 在C2C12分化过程中的表达情况及其对分化过程的影响.通过低血清诱导体外肌肉细胞分化模型,观察分化过程中细胞形态变化.采用Western blot 检测肌肉细胞分化标志分子myogenin 和MY-32 在C2C12细胞分化第1天, 2天, 4天的表达.检测分化过程中Twist 1 和Twist 2 转录和蛋白表达水平.结果显示C2C12 细胞分化过程中细胞形态逐渐变长变粗融合形成多核肌管. Myogenin 随着分化进程表达量升高, MY-32 在分化第4天出现显著表达.而Twist 1 在C2C12 细胞分化第2天和第4天转录水平均提高(P<0.05),而Twist 2在细胞分化第4天转录水平均显著提高(P<0.05),但是Twist 2蛋白表达在分化过程中未见显著变化.该研究表明Twist 1和Twist 2基因在C2C12 细胞中转录水平均升高,但是蛋白表达水平未见显著差异.

GLP-1、Betacellulin、Activin A、bFGF和Nicotinamide联合诱导小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞

【目的】探讨体外联合应用GLP-1、betacellulin、activinA、bFGF和nicotinamide5种生长因子能否将小鼠胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化为胰岛素分泌细胞。【方法】以GLP-1、betacellulin、activinA、bFGF和nicoti-namide5种生长因子诱导E14.1小鼠ES细胞30d后,应用RT-PCR、DTZ染色和免疫组化检测分化细胞胰岛素表达,以流式细胞仪检测胰岛素分泌细胞的分化率,用RIA法测定培养液中胰岛素水平。【结果】分化细胞可检测到胰岛素mRNA表达,DTZ染色和胰岛素免疫组化染色阳性,胰岛素分泌细胞的分化率平均为13.6%±3.7%,在5.6mmol/L和25mmol/L葡萄糖浓度作用下培养液中胰岛素水平分别为(0.04±0.01)ng/mL和(0.09±0.02)ng/mL。【结论】体外联合应用GLP-1、betacellulin、activinA、bFGF和nicotinamide5种生长因子能将小鼠ES细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞,但胰岛素分泌功能较差。

细胞因子信号传导抑制蛋白1对糖基化终末产物诱导的肾小管细胞转分化的影响

目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾小管上皮细胞(HKC)转分化及JAK/STAT信号通路的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆。分别采用白蛋白和AGEs进行刺激。采用Western印迹检测SOCS-1、α-SMA、E-钙黏着糖蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原(collagenI,ColI)、信号转导和转录活化因子1、3(STAT1、STAT3)及其磷酸化蛋白(p-STAT1、p-STAT3)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和E-cadherin mRNA的表达。结果与对照组相比,AGEs组肾小管细胞α-SMA和ColI蛋白表达明显上调,细胞培养上清中TGF-β1含量增加,α-SMA mRNA的表达增加,而E-cadherin蛋白和mRNA表达下调。SOCS-1过表达能够抑制AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA和ColI的表达及STAT1和STAT3的磷酸化,减少TGF-β1的含量,下调AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA mRNA的表达,同时能够逆转AGEs刺激引起的HKC细胞E-cadherin蛋白和mR-NA的下调表达。结论SOCS-1过表达抑制AGEs诱导的肾小管上皮细胞转分化可能是通过抑制JAK/STAT信号通路活化实现的。

在成骨细胞分化过程中调节Osterix转录因子表达和肿瘤坏死因子活性的同源异形盒蛋白Prx1的表达

肿瘤坏死因子（TNF-α）具有促使骨质疏松发生和抑制骨形成的作用,是骨节炎症中导致骨骼损伤的重要因子。成骨细胞（osteoblast,OB）来源于多能间充质细胞系,是骨形成的主要功能细胞,其按一定的路径分化为成熟骨细胞。Osterix（Osx,SP7）是一种OB分化所必需的转录因子。有实验证明如果机体缺乏该转录因子会导致骨骼软骨化。美国科学家的研究曾经报道过一种位于0sx启动子内的TNF抑制元件，这种抑制元件可以用于分离核蛋白，从而介导TNF-α发挥抑制OB分化的作用。

脂肪细胞定向和分化因子1(ADD1)基因的研究进展

脂肪细胞定向和分化因子1(ADD1)是重要的核转录因子。ADD1不但是脂肪分化过程中重要的转录因子,同时还可以调控与脂肪代谢相关酶基因的表达。在人类和老鼠的研究发现ADD1基因与肝脏、脾脏等非脂肪组织的脂肪沉积有明确的连锁关系。实验研究提示:ADD1基因可能是影响动物肉质性状和屠体性状的候选基因。

华裔美国科学家揭示转录因子TAF3在胚胎干细胞的分化中扮演重要角色

据生物通网2011年9月6日报道，近日美国加州大学伯克利分校的生物化学与分子生物学系钱泽南（RobertTjian，华裔）教授及其研究小组，揭示了转录因子TAF3在胚胎干细胞（ES细胞）的分化中扮演着重要角色。这一研究成果已经作为封面文章公布在最新（2011年9月2日）一期的《细胞》杂志上。

成骨细胞分化相关转录因子及其调控机制

成骨细胞的分化成熟是骨形成的前提,在该过程中需要多种因素的参与和调控。骨形成相关转录因子是其他因素如生长因子、细胞因子和动力传导的中枢和靶向,在促使间充质祖细胞向功能性成骨细胞的转化过程中起着关键作用。本文将介绍几个常见的成骨相关转录因子:R unx2、O sterix、M sx1/2和D lx5/6。

成骨细胞特异性转录因子OSF2/CBFA1

文章介绍了CBFA基因编码的OSF2/CBFA1转录因子的结构、对成骨细胞生长分化的影响、对骨基质中非胶原蛋白表达水平的调控以及OSF2/CBFA1与遗传性骨病的关系。OSF2/CBFA1作为一种成骨细胞特异性转录因子调控着骨形成过程中成骨细胞的分化,其详细机理有待深入研究。

低氧诱导因子-1α对骨髓间充质干细胞成骨分化与血管生成相关因子的影响

目的探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中对成骨分化和血管生成相关细胞因子的影响。方法分离并培养BMSCs,采用流式细胞术进行鉴定;分别构建上调和下调HIF-1α基因的质粒载体及对照组质粒,使用Lipofectamine?LTX转染试剂将各组质粒分别转染至BMSCs,将细胞分为过表达实验组、过表达对照组、低表达实验组和低表达对照组。各组成骨诱导3、7 d后分别进行茜素红染色;RT-PCR检测目的基因HIF-1α,成骨分化特异标志物Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2),以及血管生成特异标志物血小板衍生生长因子-BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的mRNA表达水平;用Western blot检测目的蛋白HIF-1α及Runx2、PDGF-BB的蛋白表达量。结果流式鉴定BMSCs表面标记物CD29、CD45阳性表达率分别为98.2%和4.2%;RT-PCR结果显示:过表达实验组BMSCs中HIF-1α、Runx2、TGF-β和PDGF-BB的mRNA表达显著升高(P<0.001);低表达组中HIF-1α、Runx2、TGF-β和PDGF-BB的mRNA表达显著降低(P<0.001);Western blot结果显示:过表达实验组BMSCs中HIF-1α、Runx2和PDGF-BB的蛋白表达量均增高(P<0.001),低表达实验组中HIF-1α、Runx2和PDGF-BB蛋白表达量降低(P<0.001)。茜素红染色结果显示,低表达实验组钙结节面积小于其对照组,过表达实验组红色钙结节面积显著大于其对照组,随着成骨诱导时间的增加,各组钙化面积也增大。结论上调和下调HIF-1α后可调控BMSCs的成骨分化及血管生成相关因子表达。

Krüppel样因子4、特异性蛋白1和细胞角蛋白19在分化型甲状腺癌中的表达关系及意义

目的观察分化型甲状腺癌(differentiated thyroid carcinoma,DTC)患者血清中Krüppel样因子4(Krüppel-like factor4,KLF4)、特异性蛋白1(specificity protein 1,SP1)和细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)的表达水平,并探讨其临床意义。方法选取2010年1月~2019年9月经张家口市第一医院耳鼻咽喉头颈外科确诊的DTC患者328例为观察组,术中留取DTC组织和癌旁正常甲状腺组织(距癌组织2 cm以上),同期健康人320名为对照组。结果观察组患者血清中KLF4 mRNA表达水平低于对照组[(1.13±0.34)vs(1.92±0.45)](P<0.05),SP1[(1.28±0.36)vs(0.79±0.18)]、CK19[(2.91±0.84)vs(1.82±0.40)]mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05);DTC患者血清中KLF4、SP1、CK19 mRNA表达水平与TNM分期和淋巴结转移均有关(P<0.05)。结论KLF4 mRNA在DTC患者血清中呈低表达,SP1、CK19 mRNA均呈现高表达,三者存在一定相关性,与TNM分期和淋巴结转移有关,对DTC有一定诊断价值,且三者联合检测诊断价值更高。