未成熟卵体外培养成熟技术治疗后妊娠情况及结局分析

目的通过比较接受人类未成熟卵体外培养成熟(IVM)技术、常规体外受精技术(IVF)及单精子卵胞浆内注射技术(ICSI)治疗后妊娠的病例,分析妊娠和产科结局,从而评估IVM技术的安全性。方法回顾性分析安徽医科大学第一附属医院生殖医学中心2004年1月～2007年12月接受IVM35例、IVF369例和ICSI298例治疗后妊娠的702例患者的临床资料。结果3组的多胎妊娠发生率、流产率、异位妊娠率比较,差异无显著性(P>0.05)。除外流产和继续妊娠外,IVM、IVF和ICSI治疗后出生婴儿数分别为34、321和243例,比较3组单胎妊娠和双胎妊娠的妊娠结局,差异无显著性(P>0.05)。结论与常规IVF、ICSI比较,IVM并不增加妊娠风险、产科并发症和新生儿异常的比例。

未成熟卵母细胞体外成熟不同培养结局的多因素分析

目的应用多因素分析探讨人未成熟卵母细胞进行体外成熟(IVM)培养后不同培养结局(卵母细胞成熟和D3可利用胚胎)的影响因素。方法收集2020年6月至2023年6月于中山市人民医院生殖中心进行常规助孕治疗、有未成熟卵母细胞剩余患者的临床资料。按照纳排标准共纳入45例患者的207枚未成熟卵母细胞,使用商品化IVM培养液和自配IVM培养液进行IVM培养。培养24 h和48 h后,观察卵母细胞成熟情况。当卵母细胞成熟后,行常规卵胞浆内单精子注射(ICSI)、胚胎培养和胚胎观察,记录D3可用胚胎数。并采用Logistic回归分析不同培养液、女性年龄、不孕因素、体质量指数(BMI)等因素对卵母细胞成熟率和D3可用胚胎率的影响。结果纳入研究的207枚未成熟卵母细胞进行IVM培养后,获得成熟卵母细胞159个,成熟率为76.81%;获得D3可用胚胎73个,D3可用胚胎率为35.27%。不同IVM培养液、女方年龄、促排卵方案、BMI、基础FSH(bFSH)、基础LH(bLH)、FSH/LH比值、抗苗勒管激素(AMH)、不孕年限、不孕类型、不孕因素及未成熟卵状态的卵母细胞成熟率无显著性差异(P>0.05)。使用商品化IVM培养液的D3可用胚胎率为42.86%,显著高于使用自配IVM培养液的27.45%(P<0.05);不同女方年龄、促排卵方案、BMI等因素的D3可用胚胎率无显著性差异(P>0.05)。多因素Logistic回归分析显示,IVM培养液、女方年龄等都不是卵母细胞成熟的独立影响因素;而IVM培养液和女方年龄是D3可用胚胎率的独立影响因素(P<0.05)。结论经HCG刺激的未成熟卵母细胞进行IVM培养时,使用商品化IVM培养液比使用自制培养液可能更有利于后续D3可利用胚胎的形成;且随着女方年龄增加,IVM成熟卵母细胞来源的D3可用胚胎率下降。

模拟体液环境的未成熟卵母细胞体外培养的研究进展

未成熟卵母细胞体外培养(IVM)指将未成熟卵母细胞在体外培养至成熟卵母细胞,从而获得正常受精和继续发育能力的过程,是一种较安全的生育力保存方式。目前体外培养卵母细胞的发育潜能整体较低,难以在临床实践中广泛采用。模拟卵母细胞体内体液正常生理环境,优化体外培养系统从而提高辅助生殖技术效率是未来努力的方向。本文对模拟体内体液生理环境的IVM体系的相关研究进行综述,进一步明确IVM培养基内添加卵泡液、输卵管液或血清对卵母细胞成熟率的影响,以期为IVM培养基的改良和培养环境的优化提供参考。

不同培养基对小鼠卵母细胞体外成熟质量及发育潜能的影响

背景:近年,未成熟卵母细胞体外成熟技术的需求逐渐增加。卵母细胞成熟受多种因素影响,其中培养基的选择尤为重要,目前尚无统一方案。目的:用不同成熟培养基对生发泡期卵母细胞体外成熟,研究其对卵母细胞质量及发育潜能的影响。方法:用G-1^(TM)PLUS培养基、CZB培养基和M16培养基对生发泡期卵母细胞体外成熟,并以体内成熟卵母细胞为对照组,比较各组间的体外受精和早期胚胎发育能力。对于各组成熟后卵母细胞,采用免疫荧光方法评估线粒体功能,共聚焦显微镜实时成像系统检测钙震荡情况。结果与结论:①3组之间第一极体排出率无明显差异(P>0.05);②G-1^(TM)PLUS组体外受精率(52.86±11.24)%高于M16组(37.76±6.70)%和CZB组(30.62±5.51)%;CZB组的囊胚率(36.23±6.63)%低于对照组(78.16±4.17)%、G-1^(TM)PLUS组(55.75±7.63)%和M16组(53.36±6.33)%;③与对照组相比,仅CZB组的纺锤体长宽比增加;④CZB组线粒体功能差于对照组、G-1^(TM)PLUS组及M16组,并出现CZB组线粒体异常凝集现象;⑤受精后CZB组及M16组的钙震动频率显著高于G1组和对照组。综上所述,在小鼠卵母细胞体外成熟过程中,G-1^(TM)PLUS、CZB及M16培养基的体外成熟率无差异,但G-1^(TM)PLUS培养基有更高的受精率和囊胚形成率。

补充褪黑素的人卵母细胞体外培养成熟技术在COH周期中的应用

目的比较同一控制性超促排卵(COH)治疗周期中,体内成熟与改良技术体外培养成熟(IVM)的卵母细胞的早期胚胎发育能力及临床结局,探讨补充褪黑素的IVM技术在临床中的应用。方法收集159例患者在COH周期中的920个成熟卵母细胞进行常规体外受精(IVF/ICSI)处理,同时收集同周期中1283个未成熟卵母细胞,在添加褪黑素的改良IVM培养基中培养成熟后行ICSI处理。通过回顾性分析,比较常规助孕技术与改良IVM技术这两种方式,对辅助生殖治疗的助孕结局和妊娠结局的影响。结果与从COH周期中收集到的行常规IVF/ICSI处理的成熟卵母细胞相比,经改良IVM技术促成熟的卵母细胞的优质囊胚形成率较低。但经胚胎移植后,两种方式获得的成熟卵母细胞的临床结局包括临床妊娠率、足月产率、婴儿体长、新生儿Apgar评分,差异均无统计学意义。结论IVM可以提高从COH周期中回收的未成熟卵母细胞的卵子利用率,改善辅助生殖技术助孕患者的妊娠结局。

小鼠未成熟卵母细胞体外培养

目的 :探讨小鼠未成熟裸卵体外培养 ,获得较高的成熟率和受精率的适宜培养时间和培养条件 .方法 :在培养液中添加不同剂量的人绝经期促性腺激素 (hMG)和卵泡刺激素 (FSH) ,分别培养从未行激素刺激排卵处理的昆明系小白鼠卵巢中获得的未成熟裸卵 ,培养 2 4h和 4 8h后 ,进行体外受精和胚胎培养 .结果 :添加不同激素和培养不同时间对未成熟裸卵的体外成熟无显著性影响 (P >0 0 5) ,但黄体生成素 (LH)的存在对培养 4 8h后成熟卵子的体外受精率有显著性影响 (P <0 0 5) ,并随LH含量的增多 ,影响也越大 .结论 :未成熟裸卵能在体外培养成熟并受精 。

体外受精-胚胎移植周期未成熟卵体外成熟培养的临床价值

目的探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期未成熟卵体外成熟培养(IVM)的临床价值。方法对106例不孕患者IVF/ICSI-ET治疗周期中357枚未成熟卵(MⅠ期,217枚;GV期,140枚)进行24h和48h体外培养,比较不同发育阶段未成熟卵的体外成熟率、受精率、卵裂率、优质胚胎率及囊胚形成率。结果 MⅠ期卵24h和48h总成熟率均显著高于GV期卵(分别为59.91%vs.24.29%和72.35%vs.42.86%)(P<0.05);体外成熟MⅡ卵平均每取卵周期可利用胚胎数只有(0.50±0.84)枚,且受精率、卵裂率和优胚率、可利用胚胎数均显著低于同一促排卵周期体内成熟MⅡ卵(P<0.05)。结论 IVF-ET周期中所获未成熟卵经IVM能发育成熟,并具备一定的受精和胚胎发育潜能,但相关指标明显低于体内成熟卵,临床应用价值有限。

两种培养液用于未成熟卵体外培养成熟治疗多囊卵巢综合征不孕症效果比较

目的:比较两种培养液用于卵母细胞体外成熟(IVM)技术治疗多囊卵巢综合征不孕症的效果。方法:取出未成熟卵母细胞置于Ⅰ、Ⅱ两种成熟培养液中进行体外培养成熟后行单精子胞浆注射,受精后取优质胚胎移植宫腔,同时比较其对助孕结局的影响。结果:两组共23例患者进行了24个IVM治疗周期。Ⅰ组的获卵率,成熟率,受精率,卵裂率,种植率和妊娠率分别为:47.42%,70.30%,95.52%,84.38%,3.13%,5.88%;Ⅱ组分别为47.47%,70.21%,84.85%,71.43%,30.77%,50.00%。Ⅱ组的妊娠率,种植率显著高于Ⅰ组(P<0.05),两组获卵率,成熟率,受精率,卵裂率差别无统计学意义(P>0.05)。结论:IVM对卵泡发育和成熟障碍的多囊卵巢综合征患者助孕有效,用含0.1 IU/ml的hCG,0.5μg/ml E2的卵子成熟培养液助孕效果较好。

两种未成熟卵母细胞体外成熟培养液的运用效果比较

目的:通过比较自行研配的培养液与商品化培养液在卵母细胞体外成熟中的运用效果,为进一步优化体外成熟培养体系提供依据。方法:分别选择使用自行配制培养液的(IVM-A组)110个周期和使用商品化(IVM-B组)培养液的99个周期,并以同期行ICSI的治疗周期为对照(ICSI-C1和ICSI-C2),比较两组在体外成熟、胚胎发育、胚胎种植、临床妊娠及结局等方面的差异。结果:在两对照ICSI-C1和ICSI-C2各项指标无差异的情况下,IVM-A组体外成熟和胚胎发育等方面均高于IVM-B组,且可移植胚胎率、优质胚胎率明显提高(P<0.05或P<0.01),可移植胚胎率已达到ICSI组水平。虽然表面上IVM-A组在胚胎种植率、妊娠率(临床妊娠率)、活产率等指标低于IVM-B组,但不同阶段的对照组其指标明显改变,ICSI-C2(2006年以后)明显好于ICSI-C1。这种差异可能与近年来的临床治疗方案的改善及宫腔镜的使用有关。值得注意的是,IVM-A的流产率只有10.53%,显著低于其他3组,而同期的对照(ICSI-C1)却明显高于ICSI-C2,提示使用自行配制培养液培养的胚胎可显著降低流产的发生。但由于样本量还不够大,结果尚待进一步验证。结论:自行配制的培养液具有较好的运用效果,可能与其中额外添加的mHFF及E2等有关。但系统尚需进一步优化,以保证其高效、安全、价廉。

超排卵周期未成熟卵体外培养的研究

目的:研究来源于超排卵周期中的未成熟卵在拆除卵丘细胞后进行体外成熟培养(IVM)的成熟、受精及胚胎发育能力,探讨IVM技术的临床应用。方法:选取46名体外受精/卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)患者为研究对象,比较MI和GV期不成熟卵的体外成熟情况,并比较体内成熟卵和体外成熟卵进行ICSI后的正常受精、异常受精、卵裂和优质胚胎形成情况。结果:体外培养中69.8%的MI期卵和77.2%的GV期卵均在24小时内达到成熟,其24小时和48小时的成熟率、总成熟率均无明显差异(P>0.05)。体外成熟卵与体内成熟卵相比较,正常受精率、异常受精率和卵裂率均无明显差异(P>0.05),优质胚胎形成率较低,差异有显著性(P<0.05)。结论:常规超排卵周期中的未成熟卵在拆除卵丘细胞后能够继续体外发育成熟,具有与体内成熟卵相似的ICSI受精、卵裂能力。虽然优质胚胎的形成率低于体内成熟卵,但增加了可移植胚胎和冷冻胚胎数量,提高了助孕成功率。

二甲双胍联合未成熟卵体外培养成熟治疗多囊卵巢综合征的临床研究

目的探讨二甲双胍联合未成熟卵体外培养成熟(IVM)对氯米芬抵抗的多囊卵巢综合征(PCOS)的治疗效果。方法2003-10-2005-03将安徽医科大学第一附属医院56例氯米芬抵抗的PCOS患者随机分成两组,二甲双胍组(28例)给予二甲双胍500mg,每日2次,12周后进行34个IVM周期治疗;对照组(28例)直接行36个IVM周期治疗。比较两组获卵数、成熟率、受精率、优质胚胎形成率和妊娠率。荧光原位杂交(FISH)方法检测两组体外培养成熟的卵母细胞(MⅡ)13、16、18号染色体非整倍体情况。结果二甲双胍组和对照组每周期获未成熟卵数(12·35±6·29)个、(9·39±6·17)个,成熟率76·67%、70·41%,受精率69·57%、67·65%,卵裂率87·50%、89·44%,经比较差异均无显著性意义(P>0·05);两组优质胚胎形成率37·76%、24·31%,妊娠率38·24%、16·67%,经比较差异有显著性意义(P<0·05)。两组经体外培养成熟的卵细胞染色体非整倍体形成率差异无显著性意义(P>0·05)。结论对氯米芬抵抗的PCOS患者予以二甲双胍预治疗,可改善IVM的治疗效果,提高临床妊娠率。

体外受精周期中卵泡发育阻滞患者应用未成熟卵体外成熟培养的临床观察

目的观察常规体外受精(IVF)中卵泡发育阻滞患者采用未成熟卵体外成熟(IVM)培养治疗结果。方法常规IVF治疗患者11例,在促排卵过程发生卵泡发育阻滞时,取卵行IVM培养成熟后,卵母细胞行卵胞浆内单精子注射(ICSI)以获得受精卵并最终实现胚胎移植。统计分析未成熟卵的成熟率、卵母细胞的受精率、胚胎的发育情况及临床结果。结果共获取卵母细胞128枚,其中成熟卵21枚,行ICSI后15枚正常受精,获10枚正常卵裂胚胎,全部移植3例,均未妊娠;107枚未成熟卵,经IVM、ICSI和体外培养后,成熟率、受精率、正常卵裂率及优质胚胎率分别为72.9%、75.6%、78%及39.1%,胚胎移植后3例临床妊娠(新鲜周期2例,冻融周期1例)。结论常规IVF控制性超促排卵(COH)过程中,发育阻滞的卵泡在体外适宜的培养条件下仍有成熟、受精、继续发育的能力,并最终实现临床妊娠。IVM技术是改善IVF中发生卵泡发育阻滞患者结局的措施之一。

体外受精周期中不同改行时机对未成熟卵体外培养结局的影响

目的:探讨常规体外受精周期中,不同改行时机对未成熟卵体外培养结局的影响。方法:回顾性分析2008年1月至2009年12月,在温州医学院附属第一医院生殖医学中心行常规体外受精(in vitrofertilization,IVF)过程中为预防出现卵巢过度刺激综合征或因卵泡发育迟缓,改行未成熟卵体外培养(in vitro maturation,IVM)的91例患者,按促性腺激素(gonadotropin,Gn)使用天数不同分为两组,A组使用Gn 5～7 d,共51例,B组使用Gn 8～13 d,共40例。比较两组的一般指标、Gn用量、体外成熟与胚胎发育及妊娠结局。结果:两组年龄、不孕年限、基础激素水平均差异无统计学意义(P>0.05)。Gn使用量A组明显低于B组,但获卵数A组明显高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。取卵日的雌激素以及黄体生成素水平A组明显高于B组,而孕激素水平则B组高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组的卵子成熟率、受精率、卵裂率、优胚率、种植率差异均无统计学意义(P>0.05)。两组的移植周期率、hCG阳性率、周期取消率、临床妊娠率、多胎妊娠率、自然流产率、异位妊娠率等临床结局差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:体外受精咛ヒ浦仓芷谥校煌被男蠭VM均能获得较好的临床结局,但Gn使用后5～7 d比8～13 d可以显著减少促排卵药物的用量,增加获卵数,降低治疗费用。

未成熟卵母细胞体外培养治疗不孕症的临床研究

目的:评价未成熟卵母细胞体外培养成熟(IVM)治疗不孕症的临床价值。方法:40例不孕患者接受54个IVM周期治疗,包括26例难治性多囊卵巢综合征(PCOS)和14例月经周期正常但经其他辅助生育技术失败的患者。测定卵泡早期的性激素、抑制素-A(INH-A)、抑制素-B(INH-B)。未经任何药物刺激,于月经周期的9～12d在超声引导下经阴道对两侧卵巢内的小卵泡进行穿刺获卵。体外培养24～48h,进行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI),18h后观察受精情况,继续培养24～48h,直至胚胎移植,移植前行激光辅助孵化。结果:7个周期取消,取消率为13%(7/54)。1例生化妊娠,19例临床妊娠,每取卵周期的临床妊娠率为35.2%(19/54),每移植周期的临床妊娠率为40.4%(19/47)。47个移植周期共获得未成熟卵母细胞857个,平均每周期18.2个,体外培养48h后总成熟率为73.7%(632/857),正常受精率为75.3%(476/632),卵裂率为91.2%。妊娠组的获卵数显著多于非妊娠组[(22.4±16.2)个vs(15.2±7.1)个,P<0.05],取卵日和胚胎移植日的子宫内膜厚度显著大于非妊娠组([8.0±1.5)cmvs(6.8±0.9)cm;(9.5±1.6)cmvs(8.3±1.3)cm,P<0.05],但两组患者的年龄、不孕年限、体重指数、基础性激素、INH-A、INH-B各参数相比均无显著性差异。结论:未经药物刺激的IVM技术是治疗不孕症的一种有效方法,获卵数和子宫内膜厚度与成功率有关。

体外培养成熟技术对未成熟卵母细胞冻融的影响

目的:探索影响未成熟卵母细胞冻融技术的关键因素。方法:A组:来源于体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中自愿捐献的多余的成熟卵母细胞(MⅡ期),共56个;B组:来源于手术切除的卵巢组织中的未成熟卵母细胞(GV或MⅠ),共67个。不同成熟时期卵母细胞经慢冻快融后培养和体外受精,观察其体外成熟、受精及胚胎发育情况。结果:A组与B组相比,两组冻融后的存活率有显著性差异(60.71%vs 77.61%,P<0.05);A组受精率高于B组,但两组比较无显著性差异(61.76%vs 50.00%,P>0.05);A组与B组相比,两组冻融后的卵裂率和优质胚胎率有显著性差异(76.19%vs 37.50%,47.62%vs 12.50%,P<0.05)。A组获2枚囊胚,而B组没有囊胚培养成功。结论:体外成熟培养技术可能是影响冻融后未成熟卵母细胞发育的关键因素。

未成熟卵母细胞体外成熟培养技术研究进展

1935年,Pincus和Enzmanz[1]观察到兔的未成熟卵母细胞在体外培养条件下可以自发完成卵母细胞的成熟过程,自此在生殖领域引入了一个新的概念即卵母细胞体外成熟（in vitro maturation,IVM）。自1991年Cha[2]等报道IVM技术取得第1例妊娠以来,IVM技术已应用于治疗多囊卵巢综合征（PCOS）的不孕,

多囊卵巢综合征患者未成熟卵母细胞体外成熟培养后生长分化因子-9的表达

目的:探讨生长分化因子-9(GDF-9)与多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵母细胞体外成熟及胚胎发育的关系。方法:采集PCOS患者自然周期月经未成熟卵母细胞,经体外成熟培养(IVM)后,免疫组化比较不同成熟度的卵母细胞及其周围颗粒细胞中GDF-9的表达差异;同时收集行IVM后受精的胚胎以及同期因输卵管因素行常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的胚胎及未受精的卵子,免疫组化比较这些胚胎中GDF-9表达的差异。结果:①IVM后共获弃卵70个,其中MII期21个、MI期26个、GV期23个,染色结果显示GDF-9的表达在培养后成熟的卵母细胞MII期中表达较MI期、GV期增强,差异有显著性;而MI期、GV期两组间表达无差异;②共对343个卵子的颗粒细胞进行了免疫组化染色,MII期、MI期、GV期、退变卵周围颗粒细胞中GDF-9表达的阳性率随着卵母细胞成熟度的降低,逐渐降低,退变卵中最低。③共获IVF弃胚胎75个,GDF-9在各期胚胎中的表达均为阳性,且各期胚胎间的表达水平无差异。④对62个IVF中未受精的弃卵进行了染色,结果显示GDF-9的表达水平较IVF胚胎降低,差异有显著性。⑤共获IVM弃胚胎57个,各期胚胎间GDF-9的表达也无显著性差异,但IVF组胚胎中GDF-9的表达水平较IVM组高,差异有显著性。结论:GDF-9可能与人类卵母细胞的体外成熟及胚胎发育有关。