未成熟卵母细胞体外培养治疗不孕症的临床研究

目的:评价未成熟卵母细胞体外培养成熟(IVM)治疗不孕症的临床价值。方法:40例不孕患者接受54个IVM周期治疗,包括26例难治性多囊卵巢综合征(PCOS)和14例月经周期正常但经其他辅助生育技术失败的患者。测定卵泡早期的性激素、抑制素-A(INH-A)、抑制素-B(INH-B)。未经任何药物刺激,于月经周期的9～12d在超声引导下经阴道对两侧卵巢内的小卵泡进行穿刺获卵。体外培养24～48h,进行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI),18h后观察受精情况,继续培养24～48h,直至胚胎移植,移植前行激光辅助孵化。结果:7个周期取消,取消率为13%(7/54)。1例生化妊娠,19例临床妊娠,每取卵周期的临床妊娠率为35.2%(19/54),每移植周期的临床妊娠率为40.4%(19/47)。47个移植周期共获得未成熟卵母细胞857个,平均每周期18.2个,体外培养48h后总成熟率为73.7%(632/857),正常受精率为75.3%(476/632),卵裂率为91.2%。妊娠组的获卵数显著多于非妊娠组[(22.4±16.2)个vs(15.2±7.1)个,P<0.05],取卵日和胚胎移植日的子宫内膜厚度显著大于非妊娠组([8.0±1.5)cmvs(6.8±0.9)cm;(9.5±1.6)cmvs(8.3±1.3)cm,P<0.05],但两组患者的年龄、不孕年限、体重指数、基础性激素、INH-A、INH-B各参数相比均无显著性差异。结论:未经药物刺激的IVM技术是治疗不孕症的一种有效方法,获卵数和子宫内膜厚度与成功率有关。

体外受精联合未成熟卵母细胞体外培养技术在辅助生殖中的应用价值

近年来卵母细胞体外培养成熟(IVM)技术的应用得到迅速拓展。IVM技术可用于治疗难治 性多囊卵巢综合征(PCOS)的不孕;在常规COH中可以预防卵巢过度刺激综合征(OHSS),拯救在 控制促排卵周期中卵巢的反应不良;自然周期下联合IVM技术可以进一步提高IVF的妊娠率。人 卵母细胞IVM的培养体系的改善提高了IVM的妊娠率。IVM技术因本身价廉、避免药物副作用 以及防止发生OHSS的优点,将会在临床上得到日益广泛的应用。

抑制Mic60在小鼠卵母细胞体外成熟过程中引起线粒体功能障碍和整合应激反应

本实验旨在探究Mic60在小鼠卵母细胞体外成熟中的作用。选取4~6周龄的雌性C57BL/6J小鼠,注射孕马血清促性腺激素(PMSG)48 h后采集卵母细胞并随机分为对照组和Mic60抑制组(包括50、100、130、150μmol/L组,Miclxin组为130μmol/L)。卵母细胞体外培养16 h后,通过免疫荧光染色检测纺锤体形态、ROS水平、线粒体分布和质量,利用qPCR检测抗氧化基因表达、线粒体呼吸链亚基的表达、整合应激反应相关基因的表达。结果表明:与对照组相比,130μmol/L Mic60抑制剂会降低卵母细胞体外成熟率(78.29%vs.21.08%,P<0.01),并显著阻碍纺锤体的组装;与对照组相比,Miclxin组卵母细胞中的ROS水平升高(P<0.05),且Sod1(0.83 vs. 0.22)和Sod2(0.84 vs. 0.27)基因表达降低(P<0.05),线粒体分布异常比例升高(0.16 vs. 0.57,P<0.05),线粒体膜电位水平降低(1.61 vs. 1.05,P<0.05),ATP产生降低(1.16 vs. 0.79,P<0.05);Miclxin组卵母细胞线粒体呼吸链复合体亚基Ndufv2和Sdha表达降低(P<0.05),Cyc1表达升高(P<0.05),卵母细胞mtDNA拷贝数降低(19 324 vs. 9 066,P<0.05);与对照组相比,Miclxin组卵母细胞Oma1、Dele1、Eif2ak1、eIF2α基因表达上调(P<0.05),触发了整合应激反应(Integrated Stress Response,ISR)并上调了ISR主要效应因子Atf4、Atf5和Chop的表达(P<0.05)。可见,抑制Mic60会通过损害线粒体功能并触发ISR影响卵母细胞体外成熟效果。

褪黑素联合囊胚培养液在人类未成熟卵母细胞体外培养中的应用

探讨一种新型的安全有效的人类未成熟卵母细胞体外成熟(in-vitro maturation, IVM)手段。 方法 将2021年1月~2021年6月作为时间段,选取在江西省妇幼保健院辅助生殖中心择期行ICSI-ET治疗的96例不孕病患作为研究对象,然后取她们促排卵周期中废弃的未成熟GV期卵母细胞作为实验材料,然后将其随机纳入对照组与实验组中实施培养,前者的培养液为囊胚培养液,后者培养液选用褪黑素联合囊胚,分析两组体外成熟度与ICSI授精情况以及胚胎繁育状况等。 结果 96个周期共取得未成熟卵母细胞(GV期)356枚,随机分成对照组和实验组各178枚。24h成熟培养后,实验组IVM成熟率71.9%较对照组IVM成熟率70.2%,实验组正常受精率75%较对照组正常受精率72.8%无统计学差异(P>0.05)。继续实施培养直到生长至胚囊器,结果得出实验组囊胚形成率47.9%明显高于对照组27.5%,实验组优质胚囊形成率36.5%明显高于对照组14.3%,且P<0.05。其中共有移植周期6例,获2例临床妊娠率,妊娠率33.33%;有2例共2个健康婴儿出生。结论 囊胚培养液和褪黑素组合的新型IVM培养液可作为一种经济安全有效的人类未成熟卵母细胞体外培养体系运用于临床。

无刺激周期未成熟卵母细胞体外培养用于多囊卵巢综合征不孕患者治疗的临床观察

目的探讨无刺激周期未成熟卵母细胞体外培养在治疗多囊卵巢综合征(PCOS)不孕患者的应用价值。方法对70例PCOS患者,在人工周期或自然周期第10～12天行阴道B超监测,如双侧卵巢中无直径>8mm的卵泡,即肌内注射人绒毛膜促性腺激素10000IU,36h后经阴道穿刺取卵,将取出的未成熟卵母细胞进行体外成熟及体外受精胚胎移植。结果共进行体外成熟周期94个,移植周期75个。共获得卵母细胞1283个,获得成熟838个(65.3%,838/1283),其中受精553个(66.0%,553/838),获得胚胎402个(48.0%,402/838),获得优质胚胎199个(23.7%,199/838)。生发泡期卵母细胞的成熟率、受精率、获得胚胎率及优质胚胎率,分别为67.7%、66.4%、47.6%及24.1%;第1次减数分裂中期的卵母细胞,分别为69.7%、71.7%、52.2%及26.1%,生发泡期与第1次减数分裂中期比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。无法评价的卵母细胞的成熟率、受精率、获得胚胎率及优质胚胎率,分别为44.8%、53.8%、46.2%及16.9%,与生发泡期及第1次减数分裂中期比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。75个移植周期中,18例获得临床妊娠,妊娠率为24%(18/75)。结论无刺激周期未成熟卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎移植可用于PCOS不孕患者的治疗,并能取得一定的妊娠成功率。

未成熟卵母细胞体外培养技术助孕治疗多囊卵巢综合征疗效研究

目的探讨对多囊卵巢综合征(PCOS)患者行未成熟卵母细胞体外培养技术(IVM)助孕治疗的有效方案。方法对2010年1月至2012年12月在中信湘雅生殖与遗传专科医院接受体外受精(IVF)助孕治疗的PCOS患者进行回顾性分析。按助孕方案分3组:A组:自然周期IVM(140例);B组:促性腺激素释放激素激动剂(Gn RH-a)+短暂重组卵泡刺激素(r-FSH)刺激再行IVM(152例);C组:长方案降调节后常规体外受精-胚胎移植(505例)。分别比较3种助孕方案对PCOS患者的疗效。结果 (1)临床妊娠率:B组52.59%,C组58.35%,差异无统计学意义(P>0.05),但均明显高于A组(32.23%)(P<0.05)。(2)人绒毛膜促性腺激素(HCG)日内膜厚度:A组(5.99±1.96)mm,B组(7.87±2.14)mm,C组(11.81±2.20)mm,3组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)优胚率:A组(47.23±29.17)%,B组(59.95±30.43)%,C组(65.66±23.35)%,3组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)促性腺激素(Gn)用量:A组未使用Gn,B组(600.08±291.21)U,C组(1776.36±693.76)U,3组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。(5)并发症发生率:A、B组无卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生,C组重度OHSS发生率为2.18%。结论 IVM方案可以有效避免PCOS患者促排卵时OHSS发生,降调节后短暂Gn刺激再行IVM助孕,可以获得与传统长方案IVF相似的临床妊娠率,是PCOS患者经济、安全有效的助孕方式。

两种未成熟卵母细胞体外成熟培养液的运用效果比较

目的:通过比较自行研配的培养液与商品化培养液在卵母细胞体外成熟中的运用效果,为进一步优化体外成熟培养体系提供依据。方法:分别选择使用自行配制培养液的(IVM-A组)110个周期和使用商品化(IVM-B组)培养液的99个周期,并以同期行ICSI的治疗周期为对照(ICSI-C1和ICSI-C2),比较两组在体外成熟、胚胎发育、胚胎种植、临床妊娠及结局等方面的差异。结果:在两对照ICSI-C1和ICSI-C2各项指标无差异的情况下,IVM-A组体外成熟和胚胎发育等方面均高于IVM-B组,且可移植胚胎率、优质胚胎率明显提高(P<0.05或P<0.01),可移植胚胎率已达到ICSI组水平。虽然表面上IVM-A组在胚胎种植率、妊娠率(临床妊娠率)、活产率等指标低于IVM-B组,但不同阶段的对照组其指标明显改变,ICSI-C2(2006年以后)明显好于ICSI-C1。这种差异可能与近年来的临床治疗方案的改善及宫腔镜的使用有关。值得注意的是,IVM-A的流产率只有10.53%,显著低于其他3组,而同期的对照(ICSI-C1)却明显高于ICSI-C2,提示使用自行配制培养液培养的胚胎可显著降低流产的发生。但由于样本量还不够大,结果尚待进一步验证。结论:自行配制的培养液具有较好的运用效果,可能与其中额外添加的mHFF及E2等有关。但系统尚需进一步优化,以保证其高效、安全、价廉。

多囊卵巢综合征患者未成熟卵母细胞体外成熟培养后生长分化因子-9的表达

目的:探讨生长分化因子-9(GDF-9)与多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵母细胞体外成熟及胚胎发育的关系。方法:采集PCOS患者自然周期月经未成熟卵母细胞,经体外成熟培养(IVM)后,免疫组化比较不同成熟度的卵母细胞及其周围颗粒细胞中GDF-9的表达差异;同时收集行IVM后受精的胚胎以及同期因输卵管因素行常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的胚胎及未受精的卵子,免疫组化比较这些胚胎中GDF-9表达的差异。结果:①IVM后共获弃卵70个,其中MII期21个、MI期26个、GV期23个,染色结果显示GDF-9的表达在培养后成熟的卵母细胞MII期中表达较MI期、GV期增强,差异有显著性;而MI期、GV期两组间表达无差异;②共对343个卵子的颗粒细胞进行了免疫组化染色,MII期、MI期、GV期、退变卵周围颗粒细胞中GDF-9表达的阳性率随着卵母细胞成熟度的降低,逐渐降低,退变卵中最低。③共获IVF弃胚胎75个,GDF-9在各期胚胎中的表达均为阳性,且各期胚胎间的表达水平无差异。④对62个IVF中未受精的弃卵进行了染色,结果显示GDF-9的表达水平较IVF胚胎降低,差异有显著性。⑤共获IVM弃胚胎57个,各期胚胎间GDF-9的表达也无显著性差异,但IVF组胚胎中GDF-9的表达水平较IVM组高,差异有显著性。结论:GDF-9可能与人类卵母细胞的体外成熟及胚胎发育有关。

未成熟卵母细胞体外成熟培养技术研究进展

1935年,Pincus和Enzmanz[1]观察到兔的未成熟卵母细胞在体外培养条件下可以自发完成卵母细胞的成熟过程,自此在生殖领域引入了一个新的概念即卵母细胞体外成熟（in vitro maturation,IVM）。自1991年Cha[2]等报道IVM技术取得第1例妊娠以来,IVM技术已应用于治疗多囊卵巢综合征（PCOS）的不孕,

未成熟卵母细胞体外培养治疗多囊卵巢综合征性不孕症的临床研究

目的探讨在自然周期获取未成熟卵母细胞体外成熟技术(IVM)治疗多囊卵巢综合征(PCOS)性不孕症的临床疗效。方法 41例行体外受精-胚胎移植助孕的PCOS患者,共43个周期。获未成熟卵母细胞482枚,进行体外培养成熟后行单精子卵胞浆内注射,受精后取优质胚胎移植宫腔内。统计其获卵率、受精率、卵裂率和妊娠率。结果 43个周期体外培养成熟卵子320枚、成熟率为66.39%;用于受精363枚、受精329枚、受精率为90.63%卵裂279枚、卵裂率为84.80%,其中40个周期进行了胚胎移植,周期取消率为6.97%,19例患者妊娠,移植周期妊娠率44.18%。结论 IVM技术是治疗多囊卵巢综合征性不孕症的有效方法。

超排卵周期未成熟卵母细胞体外培养及其激活效应

目的:探讨超排卵周期中获得的未成熟卵母细胞的利用价值及人工辅助激活能否改善源于此类卵母细胞的胚胎的发育结局。方法:对226枚超排卵周期中获得的未成熟卵母细胞行体外成熟(IVM)培养,发育至MⅡ期卵母细胞行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)授精,受精后卵母细胞随机分成非激活组和激活组,非激活组卵母细胞ICSI后不作任何处理直接移入G-1中培养,激活组卵母细胞ICSI后入7%无水乙醇作用6 min(即人工辅助激活),比较两组受精、卵裂、优质胚胎、囊胚及优质囊胚形成情况。结果:未激活组和激活组体外成熟率分别为83.9%(94/112)和82.5%(94/114)、受精率分别为80.9%(76/94)和76.6%(72/94)、优质胚胎率分别为14.3%(10/70)和25.0%(18/72),囊胚形成率分别为8.6%(6/70)和16.7%(12/72),两组间差异无统计学意义(P>0.05),但卵裂率激活组(100%,72/72)高于未激活组(92.1%,70/76),差异有统计学意义(P<0.05),优质囊胚率激活组(83.3%,10/12)明显高于未激活组(0%,0/6),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:超排卵周期中的未成熟卵母细胞经体外培养成熟可获得比较满意的受精率及早期胚胎发育潜能。

体外受精结合未成熟卵母细胞体外培养的临床应用研究

目的探讨常规体外受精(IVF)结合未成熟卵母细胞体外培养(IVM)的临床应用价值。方法对2004年6月至2006年3月在沈阳东方医疗集团菁华医院就诊的多囊卵巢综合征(PCOS)、既往和本次超促排卵用药反应不良的患者,在自然周期或者降调节超排用药周期10～14d超声监测,如有1～2个直径≥14mm的优势卵泡发育,其他卵泡均<10mm,则注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)10000IU,36h后将优势卵泡和小卵泡内的卵子同时取出,成熟卵子当天、未成熟卵子体外培养28～30h后行体外受精,受精后观察48～72h行胚胎移植。结果行IVF+IVM周期32个(共49个优势卵泡),移植30周期,26个周期获得31个优势卵子(当天成熟29个,成熟率93.5%,29/31),非优势卵泡共获得未成熟卵子359个,成熟194个(54.0%,194/359)。优势卵子及未成熟卵子的成熟率、受精率、卵裂率及优质胚胎率分别为93.5%、65.5%、100.0%、78.9%和54.0%、83.5%、95.7%、36.1%。18个有优势卵子参与移植的16个移植周期临床妊娠8例,没有优势卵泡参与移植的14个移植周期,临床妊娠2例。HCG日优势卵泡直径为14～17mm时,优势卵泡卵子成熟率、受精率,未成熟卵子成熟率、受精率,均无明显差别。结论IVF+IVM可应用于PCOS和卵巢反应不良的患者,优势卵泡直径14～17mm可以作为注射HCG的时间。

生物科学专业开设卵母细胞体外成熟实验

为了使学生更好地理解减数分裂和卵母细胞成熟过程,引入卵母细胞体外成熟实验。取青春期雌性小鼠卵巢,通过机械穿刺的方法,释放皮质区卵泡内的卵母细胞,收集生发泡期(Germinal Vesicle,GV)卵母细胞,进行成熟培养16~18 h后,观察并比较GV期、生发泡破裂期(GV Breakdown,GVBD)和MⅡ各时期卵母细胞的形态特征。收集MⅡ期卵母细胞,通过核染料Hoechst33342染核观察。荧光显微镜下排出第1极体的卵母细胞可见一大核(卵母细胞核)和一小核(极体核)。该实验项目的开设可以帮助学生更好地理解减数分裂的概念以及减数分裂Ⅰ的进程。

不同培养液及不同培养时间对犬卵母细胞体外成熟的影响

试验采集犬卵巢,用切割法回收卵泡中的卵母细胞,选取胞质均匀、2层或2层以上颗粒细胞、直径≥110μm的卵母细胞移入不同的培养液中:(A)M199+10%FBS+0.5μg/mL FSH+10 IU/mL hCG,(B)M199+0.1%PVA进行体外成熟培养。在培养不同时间(0,48,72 h)用1%醋酸地衣红染色,在显微镜下观察卵母细胞核成熟情况,探索适宜犬卵母细胞体外成熟的培养体系。结果表明:卵母细胞在A液中培养48 h MII期比例(7.84%)高于B液中的比例(P<0.01);在培养72 h MII期比例也是A液中(8.00%)高于B液,虽然二者差异不显著(P>0.05),但72 h卵母细胞退化比例高于48 h(P<0.01)。因此培养液中添加FBS,FSH和hCG有利于犬卵母细胞体外成熟,且在此培养液中培养48 h为最佳成熟时间。

保存温度对卵母细胞体外成熟率的影响及牦牛卵母细胞体外成熟培养方式初探

【目的】探索不同卵巢保存温度对卵母细胞体外成熟的影响以及两种培养方式对牦牛卵母细胞体外成熟的影响。【方法】通过对绵羊、山羊、牦牛、蒙古牛和奶牛卵母细胞进行体外成熟培养,比较两种保存温度对5种卵母细胞成熟率的影响,并以牦牛卵母细胞为研究对象比较两种培养方式对牦牛卵母细胞成熟率的影响。【结果】卵巢保存温度为20～25℃时,山羊卵母细胞体外成熟率显著高于卵巢保存温度26～30℃(P=0.021)。蒙古牛卵巢保存于20～25℃时,其卵母细胞成熟率极显著高于卵巢保存在26～30℃(P=0.001)。保存温度为20～25℃时,绵羊、牦牛和奶牛的卵母细胞体外成熟率都较高于卵巢保存温度为26～30℃时的成熟率。另外,牦牛卵母细胞在四孔板中成熟培养的成熟率与在35 mm培养皿中成熟率并没有显著差异(P=0.65)。【结论】绵羊、山羊、牦牛、蒙古牛和奶牛的卵巢保存于20～25℃为宜,该卵巢保存温度可提高卵母细胞体外成熟率。牦牛卵母细胞在四孔板中培养的成熟率高于在35 mm培养皿中成熟率。

体外培养成熟技术对未成熟卵母细胞冻融的影响

目的:探索影响未成熟卵母细胞冻融技术的关键因素。方法:A组:来源于体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中自愿捐献的多余的成熟卵母细胞(MⅡ期),共56个;B组:来源于手术切除的卵巢组织中的未成熟卵母细胞(GV或MⅠ),共67个。不同成熟时期卵母细胞经慢冻快融后培养和体外受精,观察其体外成熟、受精及胚胎发育情况。结果:A组与B组相比,两组冻融后的存活率有显著性差异(60.71%vs 77.61%,P<0.05);A组受精率高于B组,但两组比较无显著性差异(61.76%vs 50.00%,P>0.05);A组与B组相比,两组冻融后的卵裂率和优质胚胎率有显著性差异(76.19%vs 37.50%,47.62%vs 12.50%,P<0.05)。A组获2枚囊胚,而B组没有囊胚培养成功。结论:体外成熟培养技术可能是影响冻融后未成熟卵母细胞发育的关键因素。

自然周期未成熟卵体外培养卵母细胞成熟率与临床结局的关系

目的探讨在自然周期未成熟卵体外培养后行体外受精与胚胎移植（IVF—ET），所获卵母细胞的成熟比例与胚胎发育及妊娠结局的关系。方法2008年1月至2011年4月接受自然周期未成熟卵体外培养治疗的PCOS患者183个周期，按卵母细胞成熟比例分为70％～100％（Ⅰ组）、55％～69％（Ⅲ组）、40％～54％（Ⅲ组）、〈40％（Ⅳ组），分析4组的胚胎发育情况及妊娠结局。结果4组的平均获卵数、受精率、卵裂率、平均胚胎移植数差异均无统计学意义（均P〉0．05）。Ⅳ组的胚胎种植率（7．14％）和妊娠率（13.51％）明显低于前3组（24．53％、22．93％、16.77％）和（48．65％、44．64％、33．96％），均P〈0．05，而其流产率（60％）则明显高于前3组（27．78％、20％、33．33％），均P〈0．05。结论卵母细胞成熟比例低组，胚胎的发育潜能及最终的妊娠结局也偏弱，流产率增加。

颗粒细胞在未成熟卵体外培养时对未成熟卵母细胞发育的影响

目的研究颗粒细胞在未成熟卵母细胞体外培养时对卵母细胞的成熟有何影响。方法实验分实验组和对照组。将拆除颗粒细胞的未成熟卵母细胞作为对照组,不拆除颗粒细胞的未成熟卵母细胞为实验组,观察它们在卵母细胞成熟时间、核成熟率、卵细胞受精率和优质胚胎的生成率等方面是否存在差异。结果实验组在卵母细胞成熟时间和卵细胞受精率上和对照组无明显差别,但是在卵母细胞核成熟率、优质胚胎的生成率等方面与对照组相比有显著性差异。结论颗粒细胞对卵母细胞的核成熟、胞浆成熟和保护其发育潜能有重要的作用。

温度对狗卵母细胞体外成熟培养的影响

以兰州土狗为实验动物,研究不同的温度对兰州土狗卵母细胞的体外成熟培养的影响,结果表明,采用不同温度以微滴(上覆灭菌矿物油)培养卵母细胞,其体外成熟率差异极显著.