两种未成熟卵母细胞体外成熟培养液的运用效果比较

目的:通过比较自行研配的培养液与商品化培养液在卵母细胞体外成熟中的运用效果,为进一步优化体外成熟培养体系提供依据。方法:分别选择使用自行配制培养液的(IVM-A组)110个周期和使用商品化(IVM-B组)培养液的99个周期,并以同期行ICSI的治疗周期为对照(ICSI-C1和ICSI-C2),比较两组在体外成熟、胚胎发育、胚胎种植、临床妊娠及结局等方面的差异。结果:在两对照ICSI-C1和ICSI-C2各项指标无差异的情况下,IVM-A组体外成熟和胚胎发育等方面均高于IVM-B组,且可移植胚胎率、优质胚胎率明显提高(P<0.05或P<0.01),可移植胚胎率已达到ICSI组水平。虽然表面上IVM-A组在胚胎种植率、妊娠率(临床妊娠率)、活产率等指标低于IVM-B组,但不同阶段的对照组其指标明显改变,ICSI-C2(2006年以后)明显好于ICSI-C1。这种差异可能与近年来的临床治疗方案的改善及宫腔镜的使用有关。值得注意的是,IVM-A的流产率只有10.53%,显著低于其他3组,而同期的对照(ICSI-C1)却明显高于ICSI-C2,提示使用自行配制培养液培养的胚胎可显著降低流产的发生。但由于样本量还不够大,结果尚待进一步验证。结论:自行配制的培养液具有较好的运用效果,可能与其中额外添加的mHFF及E2等有关。但系统尚需进一步优化,以保证其高效、安全、价廉。

多囊卵巢综合征患者未成熟卵母细胞体外成熟培养后生长分化因子-9的表达

目的:探讨生长分化因子-9(GDF-9)与多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵母细胞体外成熟及胚胎发育的关系。方法:采集PCOS患者自然周期月经未成熟卵母细胞,经体外成熟培养(IVM)后,免疫组化比较不同成熟度的卵母细胞及其周围颗粒细胞中GDF-9的表达差异;同时收集行IVM后受精的胚胎以及同期因输卵管因素行常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的胚胎及未受精的卵子,免疫组化比较这些胚胎中GDF-9表达的差异。结果:①IVM后共获弃卵70个,其中MII期21个、MI期26个、GV期23个,染色结果显示GDF-9的表达在培养后成熟的卵母细胞MII期中表达较MI期、GV期增强,差异有显著性;而MI期、GV期两组间表达无差异;②共对343个卵子的颗粒细胞进行了免疫组化染色,MII期、MI期、GV期、退变卵周围颗粒细胞中GDF-9表达的阳性率随着卵母细胞成熟度的降低,逐渐降低,退变卵中最低。③共获IVF弃胚胎75个,GDF-9在各期胚胎中的表达均为阳性,且各期胚胎间的表达水平无差异。④对62个IVF中未受精的弃卵进行了染色,结果显示GDF-9的表达水平较IVF胚胎降低,差异有显著性。⑤共获IVM弃胚胎57个,各期胚胎间GDF-9的表达也无显著性差异,但IVF组胚胎中GDF-9的表达水平较IVM组高,差异有显著性。结论:GDF-9可能与人类卵母细胞的体外成熟及胚胎发育有关。

未成熟卵母细胞体外成熟培养技术研究进展

1935年,Pincus和Enzmanz[1]观察到兔的未成熟卵母细胞在体外培养条件下可以自发完成卵母细胞的成熟过程,自此在生殖领域引入了一个新的概念即卵母细胞体外成熟（in vitro maturation,IVM）。自1991年Cha[2]等报道IVM技术取得第1例妊娠以来,IVM技术已应用于治疗多囊卵巢综合征（PCOS）的不孕,

自然周期体外受精结合未成熟卵母细胞体外成熟培养是治疗不孕的潜在方法

To describe pregnancies and live births that resulted from IVF of mature oocyt es retrieved from dominant follicles in a natural cycle combined with in vitro m aturation (IVM) of immature oocytes retrieved from small follicles. Case reports . McGill Reproductive Center, Royal Victoria Hospital, McGill University. Three women with normal ovaries or polycystic ovaries who underwent infertility treatm ent. Administration of SC hCG (10,000 IU) 36 hours before oocyte retrieval in a nat ural cycle. After aspiration of all follicles, mature oocytes were inseminated i mmediately; immature oocytes were matured in vitro, inseminated by intracytoplas mic sperm injection (ICSI), and then the embryos transferred. Pregnancy and live birth. Three pregnancies (two live births and one ongoing at time of writing) w ere achieved after the combination of natural-cycle IVF with IVM after transfer of the resulting embryos. Naturalcycle IVF combined with IVM might be a new app roach to IVF treatment for women with various causes of infertility.

人卵母细胞体外成熟培养技术研究进展及临床应用现状

现有体外培养技术不足以支持人卵母细胞体外完全成熟,制约着未成熟卵子体外成熟-体外受精-胚胎移植(IVM-ET)技术在临床实践上的广泛应用。在人类辅助生殖技术的临床实践需求下,人卵母细胞体外成熟(IVM)成为生殖学、生物学和临床医学的研究热点,主要集中在卵母细胞体外成熟液改良、培养环境改善、常规人卵子IVM培养技术向双相IVM培养方案转化以及卵泡体外培养-卵母细胞培养相结合培养技术等方面的研究。随着卵母细胞IVM“瓶颈”问题的逐步解决,一个安全、高效的IVM-ET技术指日可待。

抑制Mic60在小鼠卵母细胞体外成熟过程中引起线粒体功能障碍和整合应激反应

本实验旨在探究Mic60在小鼠卵母细胞体外成熟中的作用。选取4~6周龄的雌性C57BL/6J小鼠,注射孕马血清促性腺激素(PMSG)48 h后采集卵母细胞并随机分为对照组和Mic60抑制组(包括50、100、130、150μmol/L组,Miclxin组为130μmol/L)。卵母细胞体外培养16 h后,通过免疫荧光染色检测纺锤体形态、ROS水平、线粒体分布和质量,利用qPCR检测抗氧化基因表达、线粒体呼吸链亚基的表达、整合应激反应相关基因的表达。结果表明:与对照组相比,130μmol/L Mic60抑制剂会降低卵母细胞体外成熟率(78.29%vs.21.08%,P<0.01),并显著阻碍纺锤体的组装;与对照组相比,Miclxin组卵母细胞中的ROS水平升高(P<0.05),且Sod1(0.83 vs. 0.22)和Sod2(0.84 vs. 0.27)基因表达降低(P<0.05),线粒体分布异常比例升高(0.16 vs. 0.57,P<0.05),线粒体膜电位水平降低(1.61 vs. 1.05,P<0.05),ATP产生降低(1.16 vs. 0.79,P<0.05);Miclxin组卵母细胞线粒体呼吸链复合体亚基Ndufv2和Sdha表达降低(P<0.05),Cyc1表达升高(P<0.05),卵母细胞mtDNA拷贝数降低(19 324 vs. 9 066,P<0.05);与对照组相比,Miclxin组卵母细胞Oma1、Dele1、Eif2ak1、eIF2α基因表达上调(P<0.05),触发了整合应激反应(Integrated Stress Response,ISR)并上调了ISR主要效应因子Atf4、Atf5和Chop的表达(P<0.05)。可见,抑制Mic60会通过损害线粒体功能并触发ISR影响卵母细胞体外成熟效果。

未成熟卵母细胞体外成熟培养技术在多囊卵巢综合征不孕症治疗中的应用价值

目的探讨未成熟卵母细胞体外成熟培养（IVM）技术在多囊卵巢综合征（PCOS）不孕症治疗中的价值。方法回顾分析148例PCOS患者的临床资料，按治疗方法分为IVM组83例和体外受精（IVF）或单精子卵细胞胞质内注射（ICSI）组65例。另选择同期接受IVF或ICSI治疗的非PCOS不孕患者60例作为对照组。比较分析三组患者的受精成功率、应用促性腺激素（Gn）天数、Gn总量、人绒毛膜促性腺激素（HCG）注射日子宫内膜厚度、治疗总费用、尿HCG阳性率、异位妊娠率、临床妊娠率、单胎妊娠率、流产率、取消周期率、多胎妊娠率、卵巢过度刺激综合征（OHSS）发生率、早产率、新生儿体质量及低出生体质量的情况。结果IVM组及对照组受精成功率较IVF/ICSI组高，差异有统计学意义（χ^2＝4.197，P＝0.040）；IVM组与对照组比较差异未见统计学意义（χ^2＝0.014，P＝0.907）；IVM组在应用Gn天数、Gn总量、HCG注射日子宫内膜厚度及治疗总费用方面均少于IVF/ICSI组和对照组，差异有统计学意义（P〈0.05）；三组患者间尿HCG阳性率、异位妊娠率、临床妊娠率、单胎妊娠率、流产率、取消周期率、早产率、新生儿体质量及低出生体质量率比较差异均未见统计学意义（P均〉0.05）；IVM组的多胎妊娠率及OHSS发生率均低于IVF/ICSI组、对照组，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论IVM技术应用于PCOS不孕患者可以预防OHSS的发生，且获得与IVF/ICSI技术相似的妊娠结局。

生物科学专业开设卵母细胞体外成熟实验

为了使学生更好地理解减数分裂和卵母细胞成熟过程,引入卵母细胞体外成熟实验。取青春期雌性小鼠卵巢,通过机械穿刺的方法,释放皮质区卵泡内的卵母细胞,收集生发泡期(Germinal Vesicle,GV)卵母细胞,进行成熟培养16~18 h后,观察并比较GV期、生发泡破裂期(GV Breakdown,GVBD)和MⅡ各时期卵母细胞的形态特征。收集MⅡ期卵母细胞,通过核染料Hoechst33342染核观察。荧光显微镜下排出第1极体的卵母细胞可见一大核(卵母细胞核)和一小核(极体核)。该实验项目的开设可以帮助学生更好地理解减数分裂的概念以及减数分裂Ⅰ的进程。

激活素A、抑制素A对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟培养的影响

目的探讨激活素A(activin A,ACTA)、抑制素A(inhibin A,INHA)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)及早期胚胎发育的影响。方法①分别将ACTA、INHA分3个浓度水平(50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL)进行卵母细胞体外成熟培养,寻找ACTA、INHA最佳的卵母细胞体外成熟培养浓度;②比较ACTA、INHA、ACTA+INHA与对照组对卵母细胞体外成熟的影响;③比较对照组与ACTA组、INHA组和ACTA+INHA组对小鼠卵母细胞受精率及囊胚形成率的影响。结果不同浓度组之间相较,无论是ACTA还是INHA,100ng/mL和200ng/mL组的卵母细胞成熟率均比50ng/mL组高(P<0.05);100ng/mL、200ng/mL浓度间差异无统计学意义。ACTA组(100ng/mL)、INHA组(100ng/mL)和ACTA(100ng/mL)+INHA(100ng/mL)组的卵母细胞成熟率、成熟卵母细胞受精率、囊胚形成率均高于对照组(P<0.05),但各实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ACTA和INHA均对卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育潜能具有明显的促进作用。卵母细胞体外成熟培养的添加浓度以100ng/mL为宜。

未成熟卵母细胞体外培养治疗不孕症的临床研究

目的:评价未成熟卵母细胞体外培养成熟(IVM)治疗不孕症的临床价值。方法:40例不孕患者接受54个IVM周期治疗,包括26例难治性多囊卵巢综合征(PCOS)和14例月经周期正常但经其他辅助生育技术失败的患者。测定卵泡早期的性激素、抑制素-A(INH-A)、抑制素-B(INH-B)。未经任何药物刺激,于月经周期的9～12d在超声引导下经阴道对两侧卵巢内的小卵泡进行穿刺获卵。体外培养24～48h,进行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI),18h后观察受精情况,继续培养24～48h,直至胚胎移植,移植前行激光辅助孵化。结果:7个周期取消,取消率为13%(7/54)。1例生化妊娠,19例临床妊娠,每取卵周期的临床妊娠率为35.2%(19/54),每移植周期的临床妊娠率为40.4%(19/47)。47个移植周期共获得未成熟卵母细胞857个,平均每周期18.2个,体外培养48h后总成熟率为73.7%(632/857),正常受精率为75.3%(476/632),卵裂率为91.2%。妊娠组的获卵数显著多于非妊娠组[(22.4±16.2)个vs(15.2±7.1)个,P<0.05],取卵日和胚胎移植日的子宫内膜厚度显著大于非妊娠组([8.0±1.5)cmvs(6.8±0.9)cm;(9.5±1.6)cmvs(8.3±1.3)cm,P<0.05],但两组患者的年龄、不孕年限、体重指数、基础性激素、INH-A、INH-B各参数相比均无显著性差异。结论:未经药物刺激的IVM技术是治疗不孕症的一种有效方法,获卵数和子宫内膜厚度与成功率有关。

不同培养液及不同培养时间对犬卵母细胞体外成熟的影响

试验采集犬卵巢,用切割法回收卵泡中的卵母细胞,选取胞质均匀、2层或2层以上颗粒细胞、直径≥110μm的卵母细胞移入不同的培养液中:(A)M199+10%FBS+0.5μg/mL FSH+10 IU/mL hCG,(B)M199+0.1%PVA进行体外成熟培养。在培养不同时间(0,48,72 h)用1%醋酸地衣红染色,在显微镜下观察卵母细胞核成熟情况,探索适宜犬卵母细胞体外成熟的培养体系。结果表明:卵母细胞在A液中培养48 h MII期比例(7.84%)高于B液中的比例(P<0.01);在培养72 h MII期比例也是A液中(8.00%)高于B液,虽然二者差异不显著(P>0.05),但72 h卵母细胞退化比例高于48 h(P<0.01)。因此培养液中添加FBS,FSH和hCG有利于犬卵母细胞体外成熟,且在此培养液中培养48 h为最佳成熟时间。

保存温度对卵母细胞体外成熟率的影响及牦牛卵母细胞体外成熟培养方式初探

【目的】探索不同卵巢保存温度对卵母细胞体外成熟的影响以及两种培养方式对牦牛卵母细胞体外成熟的影响。【方法】通过对绵羊、山羊、牦牛、蒙古牛和奶牛卵母细胞进行体外成熟培养,比较两种保存温度对5种卵母细胞成熟率的影响,并以牦牛卵母细胞为研究对象比较两种培养方式对牦牛卵母细胞成熟率的影响。【结果】卵巢保存温度为20～25℃时,山羊卵母细胞体外成熟率显著高于卵巢保存温度26～30℃(P=0.021)。蒙古牛卵巢保存于20～25℃时,其卵母细胞成熟率极显著高于卵巢保存在26～30℃(P=0.001)。保存温度为20～25℃时,绵羊、牦牛和奶牛的卵母细胞体外成熟率都较高于卵巢保存温度为26～30℃时的成熟率。另外,牦牛卵母细胞在四孔板中成熟培养的成熟率与在35 mm培养皿中成熟率并没有显著差异(P=0.65)。【结论】绵羊、山羊、牦牛、蒙古牛和奶牛的卵巢保存于20～25℃为宜,该卵巢保存温度可提高卵母细胞体外成熟率。牦牛卵母细胞在四孔板中培养的成熟率高于在35 mm培养皿中成熟率。

体外培养成熟技术对未成熟卵母细胞冻融的影响

目的:探索影响未成熟卵母细胞冻融技术的关键因素。方法:A组:来源于体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中自愿捐献的多余的成熟卵母细胞(MⅡ期),共56个;B组:来源于手术切除的卵巢组织中的未成熟卵母细胞(GV或MⅠ),共67个。不同成熟时期卵母细胞经慢冻快融后培养和体外受精,观察其体外成熟、受精及胚胎发育情况。结果:A组与B组相比,两组冻融后的存活率有显著性差异(60.71%vs 77.61%,P<0.05);A组受精率高于B组,但两组比较无显著性差异(61.76%vs 50.00%,P>0.05);A组与B组相比,两组冻融后的卵裂率和优质胚胎率有显著性差异(76.19%vs 37.50%,47.62%vs 12.50%,P<0.05)。A组获2枚囊胚,而B组没有囊胚培养成功。结论:体外成熟培养技术可能是影响冻融后未成熟卵母细胞发育的关键因素。

自然周期未成熟卵体外培养卵母细胞成熟率与临床结局的关系

目的探讨在自然周期未成熟卵体外培养后行体外受精与胚胎移植（IVF—ET），所获卵母细胞的成熟比例与胚胎发育及妊娠结局的关系。方法2008年1月至2011年4月接受自然周期未成熟卵体外培养治疗的PCOS患者183个周期，按卵母细胞成熟比例分为70％～100％（Ⅰ组）、55％～69％（Ⅲ组）、40％～54％（Ⅲ组）、〈40％（Ⅳ组），分析4组的胚胎发育情况及妊娠结局。结果4组的平均获卵数、受精率、卵裂率、平均胚胎移植数差异均无统计学意义（均P〉0．05）。Ⅳ组的胚胎种植率（7．14％）和妊娠率（13.51％）明显低于前3组（24．53％、22．93％、16.77％）和（48．65％、44．64％、33．96％），均P〈0．05，而其流产率（60％）则明显高于前3组（27．78％、20％、33．33％），均P〈0．05。结论卵母细胞成熟比例低组，胚胎的发育潜能及最终的妊娠结局也偏弱，流产率增加。

体外受精联合未成熟卵母细胞体外培养技术在辅助生殖中的应用价值

近年来卵母细胞体外培养成熟(IVM)技术的应用得到迅速拓展。IVM技术可用于治疗难治 性多囊卵巢综合征(PCOS)的不孕;在常规COH中可以预防卵巢过度刺激综合征(OHSS),拯救在 控制促排卵周期中卵巢的反应不良;自然周期下联合IVM技术可以进一步提高IVF的妊娠率。人 卵母细胞IVM的培养体系的改善提高了IVM的妊娠率。IVM技术因本身价廉、避免药物副作用 以及防止发生OHSS的优点,将会在临床上得到日益广泛的应用。

颗粒细胞在未成熟卵体外培养时对未成熟卵母细胞发育的影响

目的研究颗粒细胞在未成熟卵母细胞体外培养时对卵母细胞的成熟有何影响。方法实验分实验组和对照组。将拆除颗粒细胞的未成熟卵母细胞作为对照组,不拆除颗粒细胞的未成熟卵母细胞为实验组,观察它们在卵母细胞成熟时间、核成熟率、卵细胞受精率和优质胚胎的生成率等方面是否存在差异。结果实验组在卵母细胞成熟时间和卵细胞受精率上和对照组无明显差别,但是在卵母细胞核成熟率、优质胚胎的生成率等方面与对照组相比有显著性差异。结论颗粒细胞对卵母细胞的核成熟、胞浆成熟和保护其发育潜能有重要的作用。

培养液中添加物对牛卵母细胞体外成熟、受精和胚胎早期发育的影响

1951年Chang和Austin首次发现哺乳动物精子获能现象，开创了哺乳动物体外受精（IVF）研究的新时代。白Brackett于1982年获得世界上第一头试管犊牛以来，IVF技术得到迅速发展。但牛胚胎体外化生产技术是一个复杂的过程，不仅受各种人为因素的影响，还受到培养液等环境条件的制约，使体外受精胚胎发育率较低。本文就培养液中添加不同物质研究其对牛卵母细胞体外成熟、受精的影响，及培养液中添加不同蛋白质对受精后胚胎继续发育至囊胚的影响，从而筛选出牛卵母细胞体外成熟、体外发育的培养液中最佳添加物质，对优化牛体外胚胎的生产提供参考。

早卵泡期FSH和LH水平预测未成熟卵母细胞体外成熟治疗结局

目的 通过部分影响未成熟卵母细胞体外成熟(IVM )治疗多囊卵巢综合征 (PCOS)的相关因素分析 ,预测IVM技术治疗PCOS的成功率。方法 32个PCOS患者 35个周期 ,月经第 3天测性激素 ,设计促排卵方案 ,采用IVM技术治疗。结果 35个周期共获未成熟卵母细胞 36 8个 ,每个患者平均 10 (1～ 31)个 ,卵母细胞的成熟率、受精率、卵裂率、移植后妊娠率分别是 75 %、6 8%、80 %、2 3% ,早卵泡期FSH水平与未成熟卵数的获得数显著相关 ,早卵泡期E2≥ 2 0 0 pmol/l可能预示高妊娠率。 结论 早卵泡期FSH和E2 水平能预测多囊卵巢综合征患者未成熟卵母细胞体外成熟治疗结局。

生长分化因子-9和卵母细胞体外成熟培养

人卵母细胞体外成熟培养(IVM)在辅助生殖技术中逐渐显示出重要的临床价值。但胚胎发育潜能差,妊娠率低,阻碍了其在临床上的广泛应用。某些细胞因子可能是卵母细胞体外培养的新研究途径,为研究生长分化因子-9(QDF-9)的现状及其在IVM中的作用,参考国内外近年来的研究,发现GDF-9能促进卵母细胞的正常生长及减数分裂,促进初级卵泡颗粒细胞继续生长、增殖,对卵泡的生长和分化起着重要作用,可能是卵母细胞体外培养研究的新途径。