未成熟同源蛋白增强基因在膀胱尿路上皮癌组织中的表达及其临床意义

目的:观察未成熟同源蛋白增强(ERH)基因在人膀胱尿路上皮癌(BUC)组织中的表达及其临床意义。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库查到ERH基因在BUC和正常膀胱组织中存在差异性表达,采用聚合酶链式反应(qPCR)检测技术验证12对在徐州市中心医院确诊为BUC并行手术治疗的癌组织和癌旁正常膀胱组织中ERH基因的表达情况,通过BUC组织芯片和免疫组化法验证ERH基因在BUC组织中的表达,分析ERH的高表达与BUC患者的年龄、性别、肿瘤大小、T分期、淋巴结转移、临床分期等指标的关系。结果:qPCR和免疫组化结果提示,ERH基因在人BUC组织中比正常膀胱组织表达增多,差异有统计学意义(P<0.05)。组织芯片的免疫组化检测结果也显示,ERH基因在BUC组织中表达明显高于正常膀胱组织(P<0.05),但ERH表达量与肿瘤的T分期、临床分期、转移、复发等指标均无相关性(均P>0.05)。结论:ERH基因在BUC中呈高表达,表达量与临床肿瘤学特征无相关性。

含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的家蚕同源重组质粒载体的构建

以含家蚕丝心蛋白重链基因同源片段的质粒pG35 0为出发质粒 ,插入增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因 ,构建成以EGFP为报告基因的同源重组质粒载体 pMD Fib IE EGFP ,通过PCR及酶切鉴定表明EGFP以正确的方式插入到原始质粒中 ,通过脂质体介导法转染胃癌细胞能发出很强的绿色荧光 ,表明该质粒能够在真核细胞中表达 。

烷基化修复蛋白B同源物5调控果蝇Zeste基因增强子人类同源物2对K562/阿霉素细胞耐药的影响

目的探讨烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)对K562/阿霉素(ADM)细胞耐药的影响及其作用机制。方法以人白血病细胞系K562和ADM抗性细胞K562/ADM细胞为研究对象,利用Lipofectamine;2000将K562/ADM细胞分为对照组、si-NC组、si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组、空载体组(转染pcDNA3.1)、ALKBH5-WT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-WT)、ALKBH5-MUT组(转染pcDNA3.1-ALKBH5-MUT)、si-ALKBH5-2+空载体组、si-ALKBH5-2+pcDNA3.1-EZH2组。采用比色法检测细胞中N6-甲基腺苷(m6A)含量;采用CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC_(50));采用荧光光度计法检测ADM外排;采用Western blot检测细胞中ALKBH5、果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)的蛋白表达;采用RNA免疫共沉淀(RIP)实验验证ALKBH5与EZH2 mRNA的相互作用;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测EZH2 m6A水平。结果与K562细胞比较,K562/ADM细胞对ADM的耐药性及细胞中ALKBH5蛋白表达水平升高,m6A含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);沉默ALKBH5可增加K562/ADM细胞中m6A含量,过表达野生型ALKBH5可减少m6A含量,而过表达突变型ALKBH5(H204A)对m6A含量无明显影响。与对照组、si-NC组比较,si-ALKBH5-1组、si-ALKBH5-2组细胞在450 nm处的光密度值(OD_(450nm)值)、P-gp、MDR1蛋白表达水平降低,细胞内荧光强度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。在K562/ADM细胞中,ALKBH5蛋白能与EZH2 mRNA相互作用;沉默ALKBH5可上调K562/ADM细胞中EZH2 m6A水平,下调EZH2蛋白表达水平,过表达野生型ALKBH5则呈相反趋势;EZH2过表达逆转了沉默ALKBH5对K562/ADM细胞活力及耐药性的影响。结论沉默ALKBH5通过促进EZH2的甲基化来下调EZH2的表达,进而降低K562/ADM的耐药性。

果蝇zeste基因增强子的人类同源物2促进小细胞肺癌化疗耐药的作用及其分子机制

目的:观察果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(Enhancer of zeste homologue 2,EZH2)对小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)化疗耐药的影响并研究其潜在分子机制。方法:首先使用RT-PCR和蛋白印迹方法检测SCLC初治和耐药患者组织标本、敏感细胞株(H446)和耐药细胞株(H446DDP)的EZH2表达差异;再通过CCK8方法检测敲低EZH2后的耐药SCLC细胞株对化疗药物半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)值变化;最后通过RNA测序和验证方法筛查EZH2的下游靶基因以及CHIP-qPCR方法检测EZH2敲低后其靶基因启动子区的EZH2表达变化。结果:SCLC化疗耐药患者EZH2阳性表达水平(80%)高于化疗敏感患者,耐药细胞株(H446DDP)的EZH2 mRNA和蛋白表达水平均高于敏感细胞株(H446)(P<0.01,P<0.001);敲低EZH2表达后,耐药SCLC细胞株对化疗药物IC50值降低;细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-1A(Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor 1A,CDKN1A)表达增加,且CDKN1A基因启动子EZH2蛋白沉积显著减少。结论:EZH2促进SCLC化疗耐药,其分子机制与EZH2靶向调控CDKN1A基因表达相关。

前列腺腺癌组织中果蝇Zeste基因增强因子2、磷酸酶与张力蛋白同源蛋白表达及对Ki67增殖指数的影响

目的检测前列腺腺癌中果蝇Zeste基因增强因子(EZH)2、磷酸酶与张力蛋白同源蛋白(PTEN)的表达,关注二者对Ki67增殖指数的影响及其临床意义。方法 64例前列腺腺癌术后蜡块组织作为观察组,54例前列腺增生术后蜡块组织作为对照组。应用免疫组化SP法检测两组中EZH2、PTEN和Ki67的表达。结果两组中EZH2、PTEN阳性率、Ki67增殖指数表达的差别显著。观察组中EZH2、PTEN阳性率、Ki67增殖指数均与组织病理学分级密切相关。相关分析显示观察组中EZH2和Ki67的表达呈正相关性,PTEN和Ki67的表达呈负相关性。结论前列腺腺癌中EZH2高表达、PTEN低表达对肿瘤的形成和进展可能有一定作用,EZH2、PTEN均可以通过调节Ki67的增殖起而发挥生物学作用。

果蝇zeste基因增强子同源基因2蛋白与p16蛋白在卵巢癌中的表达及其临床意义

目的探讨果蝇zeste基因增强子同源基因2(EZH2)蛋白与p16蛋白在卵巢癌中的表达情况及临床意义。方法采用免疫组化法分别检测20例正常卵巢组织及50例卵巢癌组织中EZH2与p16蛋白表达情况,并分析两者的表达与卵巢癌患者临床特征的关系。结果与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织EZH2蛋白的表达阳性率显著升高,而p16蛋白的表达阳性率明显下降(P<0.05)。卵巢癌组织FZH2蛋白的表达阳性率随着肿瘤组织分级及国际妇产科协会(FIGO)分期的增加而升高(P<0.05),存在淋巴结转移者EZH2蛋白的表达阳性率较高(P<0.05);p16蛋白的表达阳性率随着肿瘤组织分级及FIGO分期的增加而降低(P<0.05),存在淋巴结转移者p16蛋白的表达阳性率较低(P<0.05)。卵巢癌组织中EZH2与p16表达呈负相关(P<0.01)。结论在卵巢癌组织中EZH2蛋白呈高表达,而p16蛋白表达降低,两者与肿瘤组织分级、FIGO分期及淋巴结转移有关,提示EZH2与p16可能参与卵巢癌的发生发展。

金属硫蛋白表达对未成熟心肌间质保护作用的研究

目的 :探讨诱导金属硫蛋白 (MT)在未成熟心肌中的表达对缺血 再灌注未成熟心肌间质的影响。方法 :采用Langendorff离体灌注模型 ,分为 4组 :对照组 (C ,n =9) ,腹腔注射蒸馏水 0 3mL ,按注射后时间 12h、2 4h和 4 8h取离体心脏 ,灌注KH液 15min转为工作心 15min ,全心停灌注 4 5min ,恢复灌注 15min改为工作心 30min ;E1 2h组 (n =6 )、E2 4h 组 (n =6 )、E4 8h 组 (n =6 )各组分别按腹腔注射 3 6 %ZnSO4 (1 5mL kg)后 12h、2 4h和 4 8h取离体心脏 ,常规建立Langendorff灌注模型 ,方法同C组。以心肌细胞中MT含量、血流动力学指标、心肌组织羟脯氨酸 (HP)含量、内皮素 (ET)含量作为观察指标。结果 :腹腔注射ZnSO4 后 12hMT开始表达 ,2 4h达高峰 ,4 8h仍在高表达水平。MT含量在E2 4h、E4 8h组与C、E1 2h组比较明显增高 ;E2 4h、E4 8h组在心功能恢复方面均优于C组和E1 2h组 (P <0 0 5 ) ,在HP含量优于C组和E1 2h组 (P <0 0 1) ,在ET含量低于C组和E1 2h组 (P <0 0 1)。结论 :腹腔注射ZnSO4 可诱导心肌MT长时间表达 ,MT可减轻未成熟心肌间质的缺血 再灌注损伤。

羊未发育成熟颅骨micro-RNA的表达谱及靶基因

目的小儿颅骨修补既是临床常见问题,也是难题。骨桥蛋白(OPN)在颅骨发育中起重要作用,参与骨的修复与再生。研究发现miRNA与骨代谢关系密切,可调控多种基因及信号通路蛋白参与成骨细胞代谢。课题组采用山羊未发育成熟颅骨缺损模型,利用分子生物学技术和生物信息学方法,深入研究miRNA在未发育成熟颅骨缺损修复过程中的作用机制,继而为临床小儿露骨修补提供理论支持,并指导临床工作。方法遴选出生2月龄小羊,共10只。5只实验组,5只对照组。制作颅骨缺损模型。2月后从缺损模型处取出未发育成熟颅骨标本,利用基因芯片技术,做统计学分析,是否miRNA作用于OPN来调控成骨细胞的分化。结果 OPN是成骨细胞分化过程中miRNA重要的靶基因,以此丰富miRNA分子在成骨分化过程中的功能及其机制,同时在未发育成熟山羊颅骨模型中发现许多新的miRNA。结论 miRNA可以通过调控OPN来影响未发育成熟颅骨缺损后成骨细胞的增殖与分化,抑制miRNA的表达可以发挥增强骨重建和促进骨基质成熟的功能。为临床小儿颅骨缺损的诊断与治疗提供新思路和理论依据。

禽巴氏杆菌C_(48-3)株成熟黏附蛋白基因cpm39的克隆及序列分析

目的:对禽巴氏杆菌C48-3株编码成熟黏附蛋白的基因cpm39进行克隆和序列分析。方法:通过PCR从禽巴氏杆菌C48-3基因组DNA中扩增出cpm39基因,克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,并对目的基因进行核苷酸序列测定;用Clustal X和Mega 2.1软件将测定的序列与GenBank中已登录的16种血清型巴氏杆菌株核苷酸序列进行同源性分析。结果:测序结果表明cpm39基因大小为1002 bp,与已知的16个血清型巴氏杆菌cpm39基因核苷酸序列的同源性为81.5%～100%。结论:克隆得到禽巴氏杆菌C48-3株编码成熟黏附蛋白的cpm39基因,该基因在不同血清型巴氏杆菌中具有很高的同源性,该蛋白可以作为研制预防巴氏杆菌病亚单位疫苗的候选抗原。

清毒栓提取物通过调节Zeste基因增强子同源物2抑制SiHa细胞活性的研究

目的研究清毒栓提取物对人子宫颈鳞癌(SiHa)细胞活性的影响,并基于Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)探讨其可能的作用机制。方法取稳定并进入对数生长期的SiHa细胞,采用血清药理学方法制备的清毒栓含药血清和EZH2抑制剂GSK126进行干预,使用八肽胆囊收缩素、实时荧光定量PCR法、蛋白免疫印迹法、染色质免疫沉淀技术等技术,研究清毒栓含药血清对SiHa细胞活性、增殖与凋亡、叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Forkhead box P3,Foxp3)表达与其组蛋白甲基化水平、β-连环蛋白通路、EZH2表达影响。结果清毒栓含药血清促进Foxp3启动子区组蛋白甲基化水平,并可增加EZH2含量;而Foxp3过表达质粒和EZH2抑制剂GSK126可以逆转清毒栓含药血清诱导的Foxp3表达下调,增殖凋亡相关蛋白表达改变以及SiHa细胞活性下调。结论清毒栓对SiHa细胞的抑制作用是通过增加EZH2含量促进Foxp3启动子组蛋白甲基化来改变Foxp3表达,从而抑制SiHa细胞中β-连环蛋白通路实现的。

优质小麦体细胞杂种中一种新的HMW麦谷蛋白亚基基因cDNA的克隆和测序

研究了在小麦(Triticun acetivum L.)与高冰草(Agropyron elongatum(Host) Neviski)不对称体细胞杂种优质株系Ⅱ-1-3中出现的迁移率与优质小麦高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)一致的1By16亚基,通过Western blot 杂交证明了该亚基与普通小麦的1By16亚基有很强的杂交信号.依据Ⅱ-1-3中类似16亚基N端15个氨基酸序列设计简并引物,通过RT-PCR扩增Ⅱ-1-3 F4中未成熟胚种子总RNA,得到三条特异带(2.3、2.2、2.1kb),对其中分子量最大的一条2.3kb带谱进行了克隆、测序.该序列(p16BL-1,测序编号为473)长2298bp,包括2137bp的编码区和161bp的3'非编码区.同源性分析发现,该片段与普通小麦HMW Glu-IR、Glu1BY9同源性较高.利用RNA二级结构预测软件对该片段、Glu1R和Glu1By9进行预测表明,所分离的基因片段为一新的HMW-麦谷蛋白基因.该片段所编码的氨基酸序列中,N端的99个氨基酸和C端的42个氨基酸均为典型的HMW麦谷蛋白保守区.中间重复区中6肽重复22个,9肽重复7个.通过对其蛋白质二级结构的预测发现,在460～470氨基酸附近比Glu1R和Glu1By9多一个α螺旋区和一个转角.该片段在 Genbank中的编号为AY249141,所翻译的蛋白序列编号为AA074630.本文揭示了体细胞杂交引起小麦基因序列变化及与体细胞杂种小麦优良品质的相关性,为小麦品质育种研究提供了新途径.

膀胱癌100例血清Zeste基因增强子同源物2和信号传导蛋白3表达水平及诊断价值分析

目的探讨膀胱癌病人血清Zeste基因增强子同源物2(EZH2)和信号传导蛋白3(SMAD3)表达水平及临床意义。方法纳入江苏省人民医院宿迁医院于2021年1月至2022年12月收治的膀胱癌病人进行研究(100例),另选取同期于该院就诊的泌尿系统良性疾病病人作为良性疾病组(93例)以及健康体检者作为对照(100例)。采用Pearson相关性分析法分析膀胱癌病人血清中EZH2和SMAD3表达水平的相关性;采用logistic多因素回归分析法分析膀胱癌发生的影响因素;采用ROC曲线分析EZH2和SMAD3对膀胱癌的诊断效能。结果膀胱癌病人血清中EZH2(101.34±15.09)ng/L和SMAD3(226.53±25.94)ng/L表达水平均高于良性疾病组(85.96±11.23)ng/L、(203.11±22.18)ng/L和对照组(83.91±9.14)ng/L、(198.03±20.30)ng/L(均P<0.001);膀胱癌病人血清EZH2和SMAD3表达水平呈正相关(r=0.72,P<0.001);膀胱癌组年龄≥60岁(74/187)、有吸烟史的病人(76/166)所占比例均高于良性疾病组(65/187、55/166)及对照组(48/187、35/166)(均P<0.05);年龄、吸烟史、EZH2、SMAD3为发生膀胱癌的危险因素(P<0.05);以良性疾病组为对照,血清EZH2和SMAD3单独检测诊断膀胱癌的曲线下面积(AUC)分别为0.78、0.78,二者联合检测的AUC为0.85,优于各自单独检测(Z_(二者联合-EZH2)=2.81、Z_(二者联合-SMAD3)=2.68,P=0.009、0.007)。结论血清EZH2和SMAD3与膀胱癌的发生有关,二者联合对膀胱癌具有一定的诊断价值。

不同发生时期的增生性瘢痕中基质金属蛋白酶及其抑制因子基因表达的变化

目的:研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2),基质金属蛋白酶-9(MMF-9)及其抑制因子(TIMP-2)在不同形成时期的增生性瘢痕中的基因表达变化。方法:提取16例不同发生时期的增生性瘢痕和8例正常皮肤的总RNA后,分离mRNA,用RT-PCR方法检测MMP-2,MMP-9和TIMP-2基因在不同组织中的表达。结果: MMP-2,MMP-9和TIMP-2基因在正常皮肤和增生性瘢痕中都有表达。在增殖期的瘢痕中,这3种基因转录产物的灰度比值分别为(13．5±4．5),(18．4±4．7),(13．6±2．4),与正常皮肤相比明显升高(P<0．05)。在成熟期的瘢痕中这三种基因表达量恢复到正常皮肤水平。结论:MMP-2,MMP-9和TIMP-2基因表达增强可能是增生性瘢痕形成的机制之一,而MMP-2和MMP-9基因表达降低可能与增生性瘢痕达到相对稳定的成熟状态有关。

胰腺十二指肠同源盒基因-1/神经生成素3信号通路在胰岛β细胞分化中的作用机制研究进展

胰岛β细胞数量的绝对不足或相对减少可导致糖尿病的发生发展。胰腺十二指肠同源盒基因-1(Pdx-1)是胰腺发育和胰岛素基因转录的重要调控基因,在胰腺发育和胰腺各种细胞的分化中发挥重要作用。神经生成素3(Ngn3)是对胰岛发育有重要影响的转录因子,可始动内分泌祖细胞,促进胰内胚层细胞向内分泌细胞分化,同时维持成熟胰岛细胞的功能。Pdx-1/Ngn3信号通路可促进干细胞向胰岛β细胞的分化和增殖,Pdx-1是Ngn3的上游调控因子,对胰干细胞的作用在于激活Ngn3的表达,Ngn3可通过调控神经细胞分化因子1、胰岛素瘤相关蛋白1(Insm1)、胰岛素基因增强结合蛋白1及Insm2、桩蛋白6、Nkx2同源框2、NK6 Homeobox 1等直接靶基因,影响胰内分泌细胞的分化和形成。

转录因子CEBPB激活FJX1促进结肠癌细胞的增殖、侵袭、迁移和血管生成能力的研究

目的 探究CCAAT增强子结合蛋白B(CCAATenhancerbindingproteinbeta,CEBPB)与四连接同源基因(four-jointed box kinase 1,FJX1)在结肠癌(colon cancer,CC)中的调控关系及其对CC恶性进展及血管生成的影响。方法 通过生物信息学分析FJX1和CEBPB在CC中的表达情况及二者之间的调控关系。利用实时荧光定量核酸扩增检测系统(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)验证FJX1与CEBPB在CC细胞中的表达情况,利用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,CHIP)与双荧光素酶实验验证FJX1与CEBPB之间的结合关系。利用细胞计数试剂-8(cellcountingkit-8,CCK-8)、划痕试验、Transwell和血管形成实验检测FJX1与CEBPB对CC细胞增殖、迁移、侵袭及血管形成能力的影响。结果 本研究发现FJX1在CC中高表达,抑制FJX1的表达会显著抑制结肠癌细胞的细胞增殖、迁移、侵袭及血管形成能力。CEBPB是FJX1的上游调控基因,且CEBPB在结肠癌中高表达。CHIP与双荧光素酶实验结果显示,CEBPB可与FJX1相结合。细胞实验结果表明,转录因子CEBPB可通过激活FJX1的表达,从而促进CC细胞的增殖、迁移、侵袭及血管生成。结论 CEBPB/FJX1轴在CC的进展中发挥促癌作用,提示CEBPB和FJX1可能是CC的潜在治疗靶点。

乳腺癌组织中EZH2、SOX4蛋白表达变化及其意义

目的探讨乳腺癌组织中果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(EZH2)、Y染色体性别决定区相关高迁移率盒蛋白4(SOX4)蛋白表达变化及其临床意义。方法选择97例乳腺癌患者的乳腺癌组织标本为观察组,癌旁正常组织标本为对照组,采用免疫组化SP法检测两组标本中的EZH2、SOX4蛋白,分析乳腺癌组织EZH2、SOX4蛋白表达与乳腺癌患者临床病理参数的关系。用Kaplan-Meier法绘制患者生存曲线,比较EZH2蛋白阳性、阴性表达者及SOX4蛋白阳性、阴性表达者的累积生存率和总生存时间。结果观察组、对照组EZH2蛋白表达阳性率分别为80.41%(78/97)、48.45%(47/97),两组相比,P<0.05;SOX4蛋白阳性表达率分别为82.47%(80/97)、57.73%(56/97),两组相比,P<0.05。乳腺癌组织中EZH2蛋白表达与患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期均无关(P均>0.05),与淋巴结转移和分化程度相关(P均<0.05);乳腺癌组织中SOX4蛋白表达与患者的年龄、肿瘤大小、TNM分期、分化程度均无关(P均>0.05),与淋巴结转移相关(P<0.05)。Spearman秩相关检验结果显示乳腺癌组织EZH2、SOX4蛋白表达呈显著正相关(γs=0.251,P=0.013)。患者随访13~71个月,中位随访时间44个月。EZH2蛋白表达阴性、阳性者累积生存率分别为89.47%(17/19)、65.38%(51/78),总生存时间分别为(67.14±2.62)、(54.30±2.30)个月,EZH2蛋白表达阴性、阳性者累积生存率和总生存时间相比,P均<0.05。SOX4蛋白表达阴性、阳性者累积生存率分别为94.41%(16/17)、65.00%(52/80),总生存时间分别为(68.75±2.15)、(54.35±2.27)个月,SOX4蛋白表达阴性、阳性者累积生存率和总生存时间相比,P均<0.05。结论乳腺癌组织EZH2、SOX4蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织。检测乳腺癌组织EZH2、SOX4蛋白有助于判断患者病情和预后。

结直肠腺癌组织中EZH2、Caspase-3蛋白的表达变化及意义

目的观察果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白在结直肠腺癌组织中的表达变化,并进一步探索其意义。方法收集结直肠腺癌组织100例份,同时收集相应癌旁(距癌组织边缘>10 cm)正常组织100例份作为对照。分别采用免疫组化法、Western blotting法检测癌及癌旁组织中EZH2及Caspase-3蛋白表达。结果结直肠腺癌组织中EZH2蛋白表达高于癌旁正常组织(P<0.05),EZH2蛋白表达与肿瘤发生部位、分化程度、临床TNM分期及淋巴结转移相关(P均<0.05),与年龄、性别无关(P均>0.05)。结直肠腺癌组织中Caspase-3蛋白表达低于癌旁正常组织(P<0.05)。Caspase-3蛋白阳性表达与结直肠癌患者性别、发病年龄、患病部位无关(P均>0.05),与组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。结直肠腺癌组织中EZH2和Caspase-3蛋白表达呈负相关(r=-0.64,P<0.05)。结论结直肠腺癌组织中EZH2蛋白呈高表达,Caspase-3蛋白呈低表达;EZH2可能通过下调Caspase-3表达,参与结直肠腺癌的发生发展。

EZH2蛋白在非小细胞肺癌顺铂耐药中的作用及其机制研究

目的探讨Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)蛋白在非小细胞肺癌对顺铂耐药中的作用及其调控机制。方法采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测人肺腺癌细胞株A549及其顺铂耐药株A549/DDP中EZH2、P21、Puma和Bad的mRNA表达差异。采用RNA干扰技术抑制细胞中的EZH2蛋白表达。通过细胞毒性实验检测细胞耐药性的改变。qRT-PCR检测抑制EZH2蛋白表达后A549/DDP细胞中P21、Puma和Bad的表达变化。流式细胞仪检测细胞周期的分布和变化。结果EZH2在A549/DDP中呈高表达。抑制EZH2蛋白表达后,顺铂对A549/DDP的IC50由(34.57±3.70)μmol/L降低至(18.91±2.07)μmol/L(P<0.05);抑制EZH2蛋白表达后,A549/DDP中P21、Puma和Bad的mRNA表达均上调;抑制A549/DDP细胞EZH2蛋白表达后,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞增多(P<0.05),细胞发生G2/M期阻滞。结论EZH2蛋白参与介导了A549/DDP对顺铂的耐药;EZH2蛋白可能通过调控与细胞凋亡相关基因相关的凋亡通路诱导A549/DDP对顺铂的耐药;EZH2蛋白可能通过抑制P21表达、促进细胞周期进展及肿瘤增殖能力,诱导非小细胞肺癌对顺铂产生耐药。

zeste基因增强子同源物2在血液系统肿瘤中的研究进展

zeste基因增强子同源物2(EZH2)是一种组蛋白甲基转移酶,在组蛋白甲基化修饰中研究较为广泛,其可促进基因的表观遗传学基因沉默,并通过多种调控机制介导肿瘤的发生。EZH2的功能获得和丧失突变在许多癌症中已被证实。目前,随着EZH2在表观遗传机制中的调控作用得到广泛重视,EZH2失调影响血液系统恶性肿瘤发病机制的确切方式仍有待阐明。文章对EZH2在血液系统肿瘤中的致病作用进行综述,以期为血液系统肿瘤的防治寻找新的靶点。

小鼠Bpi条件基因打靶载体的构建和鉴定

目的构建小鼠Bpi条件基因打靶载体,为建立Bpi条件基因打靶小鼠模型和深入研究Bpi基因功能奠定基础。方法采用Cre/LoxP系统,选择小鼠Bpi基因第2、3外显子作为条件性敲除的目的片段,并在其两侧插入LoxP位点;运用LA-PCR技术,以129品系小鼠ES细胞基因组DNA为模板分步扩增包括Bpi第2、3外显子(中间同源臂)和上游同源臂在内的3.1 kb基因片段以及下游同源臂4.9 kb基因片段;构建pBSKⅡ-5SLoxP和ploxPFRTNeo-3L重组质粒,将前者酶切产物(3.1 kb)与酶切后的ploxPFRTNeo-3L质粒相连获得Bpi条件基因打靶载体。结果经多个限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的pBSKⅡ-5SLoxP、ploxPFRTNeo-3L重组质粒和Bpi条件基因打靶载体结构正确,与设计相符。结论成功构建了小鼠Bpi条件基因打靶载体。