二苯乙烯苷的雌激素样作用及其对性未成熟小鼠子宫ER表达的影响

目的:探讨二苯乙烯苷(TSG)的雌激素样作用,以及其对性未成熟小鼠子宫雌激素受体(ER)表达的影响。方法:将60只性未成熟雌性昆明种小鼠随机分为正常组,阳性对照组(戊酸雌二醇,0.18 mg/kg),TSG低、高剂量组(50、150 mg/kg),TSG低、高剂量+戊酸雌二醇组(剂量同单用组)。正常组小鼠灌胃等体积水,各给药组小鼠灌胃相应药物溶液0.2 mL/10 g,早晚各1次,连续5d。末次给药次日,测定并计算各组小鼠子宫指数和体质量增幅;采用酶联免疫吸附测定法检测其血清雌激素[雌二醇(E_2)、黄体生成素(LH)、卵泡雌激素(FSH)]含量;采用苏木精-伊红染色法观察其子宫组织形态学特征,并检测子宫管径和子宫内膜厚度;采用免疫组织化学染色法检测其子宫组织中ER(ER-α、ER-β)的表达水平。结果:正常组小鼠子宫肌层排列平行、紧密,子宫上皮呈单层柱状,ER-α、ER-β表达较少;各给药组小鼠子宫管径、内膜及上皮均不同程度地增大、增厚或增生,ER-α、ER-β表达有所变化。与正常组比较,各给药组小鼠子宫指数(阳性对照组、TSG高剂量组、TSG各剂量+戊酸雌二醇组)、体质量增幅(阳性对照组、TSG高剂量组、TSG低剂量+戊酸雌二醇组)、子宫管径及内膜厚度(阳性对照组、TSG低剂量组、TSG各剂量+戊酸雌二醇组)、ER-α的表达量(阳性对照组、TSG各剂量+戊酸雌二醇组)、ER-β的表达量(阳性对照组、TSG高剂量组+戊酸雌二醇联用组)均显著升高,血清LH(阳性对照组、TSG高剂量组)、FSH(TSG低剂量+戊酸雌二醇组)水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);TSG各剂量+戊酸雌二醇组小鼠子宫指数、子宫管径及内膜厚度、ER-α及ER-β的表达量以及TSG低剂量+戊酸雌二醇组小鼠体质量增幅、血清E_2含量均显著高于TSG同剂量单用组(P<0.05或P<0.01);TSG各剂量组小鼠子宫指数、子宫管径及内膜厚度、ER-α及ER-β的表达量,TSG各剂量+戊酸雌二醇组小鼠子宫管径、ER-β的表达量以及TSG低剂量组小鼠体质量增幅均显著低于阳性对照组,而TSG各剂量+戊酸雌二醇组小鼠血清LH水平均显著高于阳性对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:TSG可一定程度地增加性未成熟小鼠的子宫指数和体质量,并调节其体内雌激素水平,增加子宫管径及内膜厚度,上调子宫组织中ER的表达,具有一定的雌激素样作用。但这种作用弱于戊酸雌二醇,且两者联合使用可能会拮抗戊酸雌二醇的作用。

藜芦配伍白芍对未成熟小鼠雌激素样作用的影响

目的:观察藜芦配伍白芍对未成熟小鼠雌激素样作用的影响,为中药十八反藜芦反白芍配伍禁忌内涵提供实验依据。方法:取健康、出生21 d的昆明种雌性小鼠100只,随机分为正常组,白芍高,低剂量组(4,2 g·kg-1),阳性药雌二醇(E2)组(0.1 g.kg-1),白芍高、低剂量+藜芦(0.045 g·kg-1)组,E2+藜芦组,白芍高、低剂量+雌激素受体拮抗剂ICI(0.005g·kg-1)组,E2+ICI组;给药6 d后,分别计算子宫系数、检测血清中雌二醇(E2),黄体生成素(LH),促卵泡生成素(FSH)的水平,HE染色观察子宫和阴道的病理学变化。结果:与正常组比较,白芍给药组(4,2 g·kg-1)均能使未成熟小鼠的子宫系数显著增加(P<0.01),血清中E2含量明显升高(P<0.05),LH(P<0.01)和FSH(P<0.01)的水平显著降低,还能明显促进靶器官子宫、阴道的生长发育,与E2作用相似略弱;白芍给药组(4,2 g·kg-1)配伍藜芦后,子宫系数明显降低(P<0.01),血清中E2含量明显降低(P<0.01),LH(P<0.01)和FSH(P<0.01)水平明显升高,子宫和阴道的促生长发育作用减弱,与配伍ICI的作用趋势一致。同时,E2配伍藜芦后,子宫系数显著降低(P<0.01),血清中E2含量明显降低(P<0.01),LH和FSH水平明显升高(P<0.01),子宫和阴道的促生长发育作用减弱,其作用与配伍ICI组相似。结论:当藜芦与白芍配伍时,可以妨害白芍的雌激素样作用;藜芦对白芍的妨害作用可能跟藜芦的雌激素受体拮抗剂作用有关。

光照强度和光照时间对性未成熟小鼠雌二醇的影响

目的研究不同光照强度和光照时间对性未成熟小鼠体内雌二醇浓度的影响,为进一步探讨高强度光照和长时间光照与儿童性早熟之间的关系提供理论基础和实验依据。方法 100只20日龄的雌性昆明小鼠随机分为10组,在20W光照组、60W光照组、100W光照组的条件下各分为3h光照组、6h光照组、12h光照组,并设立1个对照组,每组5只。对照组小鼠置于自然状态下,持续1周。应用ELISA法检测不同光照强度和光照时间小鼠体内雌二醇的变化。结果采用SPSS 16.0统计软件进行处理。结果各实验组小鼠体内雌二醇浓度均高于对照组小鼠,差异均有统计学意义(P<0.05);在相同光照强度的条件下,随着光照时间的延长,各实验组小鼠体内雌二醇的浓度逐渐升高,且组间相比差异均有统计学意义(P<0.05)。在相同光照时间的条件下,随着光照强度的增强,各实验组小鼠体内雌二醇的浓度逐渐升高,且组间相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在相同的光照强度下,延长对性未成熟小鼠的光照时间可以促进其体内雌二醇的分泌;而在相同的光照时间下,加强对性未成熟小鼠的光照强度亦可以促进其体内雌二醇的分泌。提示高强度照射与长时间光照均有可能通过增加儿童体内雌二醇的分泌而促进儿童的性早熟。

藜芦配伍人参对未成熟小鼠雌激素样作用的影响

目的:观察藜芦配伍人参对未成熟小鼠子宫系数、性激素水平、靶器官子宫和阴道的病理学变化的影响。方法:昆明种雌性小鼠120只,随机分为正常组、特异性雌激素受体拮抗剂ICI组(5 mg·kg-1)、藜芦组(0.045 g·kg-1)、人参低、中、高剂量组(12,18,24 g·kg-1)、ICI和人参低剂量混合组(混合低剂量组)、ICI和人参中剂量混合组(混合中剂量组)、ICI和人参高剂量混合组(混合高剂量组)、藜芦和人参低剂量配伍组(配伍低剂量组)、藜芦和人参中剂量配伍组(配伍中剂量组)、藜芦和人参高剂量配伍组(配伍高剂量组),每组10只,给药5 d后分别观察小鼠子宫系数,血清中雌二醇(E2),黄体生成素(LH),促卵泡生成素(FSH)的水平及子宫、阴道的病理学变化。结果:与正常组比较,人参各剂量组能使未成熟小鼠的子宫系数显著增加(P<0.05),E2含量明显升高(P<0.05,P<0.01),LH,FSH的水平显著降低(P<0.05,P<0.01),还能明显促进靶器官子宫、阴道的生长发育。配伍藜芦后,人参各剂量组的子宫系数明显降低(P<0.05,P<0.01),血清E2,LH和FSH水平明显升高(P<0.05,P<0.01),子宫和阴道的促生长发育作用减弱。结论:藜芦与特定剂量的人参配伍能够妨害人参的雌激素样作用。

二至丸对未成熟小鼠雌激素样作用分析

目的：观察二至丸对未成熟小鼠子宫系数、血清中雌二醇（estrodiol,E2）,子宫阴道形态学变化及雌激素受体（estrogen receptor,ER）α和ERβ表达的影响,探讨其发挥雌激素样作用机制。方法：取健康,出生21 d的昆明种雌性小鼠40只,随机分成4组,分别为空白组,阳性药戊酸雌二醇（EV）组（0.154 mg·kg^-1）,二至丸1.365,2.73 g·kg^-1组,每组10只,连续给药7 d后观察小鼠子宫系数;分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中E2的水平;苏木素-伊红（HE）染色法观察未成熟小鼠子宫阴道形态改变;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测子宫、阴道ERα和ERβ的蛋白表达水平。结果：与空白组比较,二至丸1.365 g·kg^-1组能使未成熟小鼠子宫系数显著增加（P〈0.05）,血清中E2含量明显升高（P〈0.05）,能明显促进靶器官子宫、阴道的生长发育,还能显著上调阴道ERα和ERβ表达（P〈0.05）,与EV作用相似。结论：二至丸通过上调血中雌二醇含量和靶器官雌激素受体表达发挥雌激素样作用。

CD40配体诱导小鼠B淋巴瘤细胞分化抑制因子3下调表达的研究

目的：研究CD40配体（CD40L）对小鼠未成熟B淋巴瘤细胞（WEHI-231细胞）分化抑制因子3（Id3）表达的影响。方法：用RT-PCR技术从WEHI-231细胞总RNA中扩增小鼠Id3（mid3）cDNA，将其亚克隆至p3FLAG-CMV-10载体；以p3FLAG-Id3-CMV-10为模板，用PCR扩增3FLAG—Id3融合基因，将其亚克隆至逆转录病毒载体pMX—CITE／IRES—EGFP中；通过脂质体转染技术将重组逆转录病毒载体（pMX-3FLAG—Id3-EGFP）转染Phoenix-ecotropic包装细胞系；将pMX-3FLAG-Id3-EGFP逆转录病毒转导WEHI-231细胞，转导48h后的WEHI-231细胞与CD40L／NIH333和NIH333细胞共培养24～48h。转导细胞经有限稀释法建立ndd3基因稳定转染细胞系。mlar3基因稳定转染细胞与CD40L／NIH333和NIH333细胞共培养24h后，用Western blot法检测3FLAG-mid3融合蛋白的表达。结果：pMX-3FLAG-Id3-EGFP转导WEHI-231细胞后，EGFP阳性细胞比例随时间呈下降趋势；单独用培养液培养或与NIH333细胞共培养的pMX-3FLAG-Id3-EGFP／WEH1-231细胞，24～48h后，EGFP阳性细胞率呈逐渐下降趋势；而与CD40L／NIH333细胞共培养的pMX-3FLAG-Id3-EGFP／WEHI231细胞，EGFP阳性细胞率基本保持不变。稳定表达3FLAG-Id3融合蛋白的WEHI-231细胞与CD40L／NIH313和NIH333细胞共培养24h后，Western blot结果显示，CD40L刺激可明显抑制3FLAG—Id3-EGFP／WEHI-231中Id3的表达。结论：CD40L可能通过对Id3的降解而缓解Id3诱导的细胞生长抑制作用。

怀地黄雌激素样活性筛选的实验研究

目的对鲜地黄、生地黄、熟地黄和地黄叶进行了雌激素样活性筛选。方法首先通过小鼠子宫增重实验和MCF-7细胞增殖实验对选定的四种药材进行雌激素样活性筛选;接着采用ICI182,780拮抗实验及以pERE-TAL-luc、pβgal-Control、pCXN2-hERα或pCXN2-hERβ共转染的HEK293细胞,以ERE调控的报告基因luc瞬时表达检测进行了雌激素样作用机制初探。结果鲜地黄水提物和生地黄水提物能够诱导性未成熟雌性小鼠子宫系数的增加,且两者均能够促进MCF-7细胞的增殖,当与雌激素受体阻断剂ICI182,780同时干预时两者对细胞的促增殖作用被抑制;ERE调控的报告基因瞬时表达结果显示,由ERβ介导时,鲜地黄水提物与生地黄水提物的荧光素酶活性均显著高于正常组。结论鲜地黄水提物和生地黄水提物体内、体外均具有雌激素样活性,且都主要通过ERβ介导发挥。不同炮制品中鲜地黄的雌激素样作用最强,生地黄其次,熟地黄没有雌激素样作用,提示地黄炮制后会使其雌激素样作用发生改变。