自体冷血心脏停搏液对未成熟心肌细胞三磷酸腺苷及二磷酸腺苷的影响

目的通过对比自体冷血心脏停搏液与含血停搏液、St.Thomas液、HTK液对未成熟心肌细胞三磷酸腺苷(ATP)及二磷酸腺苷(ADP)含量的影响,提示自体冷血心脏停搏液对未成熟心肌细胞的保护作用。方法年龄≤12个月行体外循环室间隔缺损修补术的患儿80例,随机分成自体冷血停搏液组(A组)、冷血停搏液组(B组)、St.Thomas液组(C组)和HTK液组(D组),每组各20例。于主动脉阻断前、主动脉开放后30 min取右心耳标本50 mg,用HPLC法测定心肌ATP、ADP含量。结果主动脉阻断前各组患儿心肌ATP与ADP含量无统计学差异(P>0.05);各组患儿主动脉开放后30 min心肌ATP与ADP含量均较阻断前显著减少(P<0.01);A组患儿主动脉开放后30 min心肌ATP与ADP含量较B组显著增高(P<0.01)。结论自体冷血停搏液可显著提升体外循环心内直视手术术后未成熟心肌细胞ATP含量,效果明显优于含血停搏液、St.Thomas液以及HTK液。

热休克蛋白70对未成熟心肌细胞功能的影响

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)对未成熟心肌细胞功能的影响。方法健康新生长耳大白兔随机分为2组。对照组(C):腹腔注射生理盐水0.4ml,注射后24h取离体心脏,常规建立Langendorff离体心脏灌注模型,灌注15min转为工作心15min后停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min。实验组(E):腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素,24h后取离体心脏,方法同对照组。测定心肌细胞中HSP70含量及相关生化指标并作统计学处理比较。结果HSP70含量E组明显高于C组;E组ATP含量、SOD活性方面均优于C组(P<0.01),MDA含量、CK、LDH漏出率方面均低于C组(P<0.01),心肌线粒体Ca2+-ATPase活性、[ATP]m均优于C组(P<0.01),心肌细胞内Ca2+含量、心肌线粒体Ca2+含量低于C组(P<0.01)。结论HSP70对缺血再灌注未成熟心肌细胞功能具有明显的保护作用。

未成熟心肌细胞体外培养概要及其应用进展

未成熟心肌细胞的培养是以新生动物和胚胎的心肌组织作为实验材料,采用酶消化法在体外培养建立的一种实验模型,该模型建立的关键在于如何提高心肌细胞的存活率、搏动率和纯化率,在电生理、中药、心血管疾病研究领域已显示其重要意义。通过检索国内外相关文献,对未成熟心肌细胞的培养方法进行着重阐述,并结合心肌细胞的形态生理学、鉴定方法、培养过程中的影响因素和应用等方面进行综合分析。

缺血预处理及复合浅低温晶体停搏液保护下未成熟心肌细胞内Ca^(2+)的分布

目的 观察缺血预处理 (IP)复合 32℃浅低温及晶体停搏液保护对缺血再灌注损伤未成熟心肌细胞内Ca2 + 分布的影响。方法 应用Langendorff离体心脏灌注模型 ,IP采用 2次 5min缺血、5min再灌注 ,实验分为IP+32℃浅低温组和单纯 32℃浅低温组。心脏灌注St.ThomasⅡ停搏液 ,缺血 30min ,37℃再灌注 30min。进行血流动力学测定、焦锑酸钾沉淀Ca2 + 染色及心肌细胞体积密度 (Vvi)测定。结果 再灌注 30min ,IP组左心室发展压 (LVDP)、左心室压力最大上升及下降速率 (+dp dtmax、-dp dtmax)恢复率明显高于单纯 32℃浅低温组 (P <0 .0 5 ) ,IP组受损严重心肌细胞Vvi显著小于对照组 (P <0 .0 5 )再灌注后 ,细胞核Ca2 + 沉积随细胞损伤程度加重而增加 ,其中 32℃浅低温组细胞核Ca2 + 沉积较为明显。结论 缺血再灌注期间 ,未成熟心肌细胞内Ca2 + 分布异常与超微结构的改变有密切关系。IP

不同类型心脏停搏液对小鼠未成熟心肌细胞增殖能力的影响

目的观察不同类型心脏停搏液对离体新生小鼠未成熟心肌细胞增殖能力的影响。方法体外分离培养新生小鼠心肌细胞,随机分为5组,分别给予复方电解质液、改良圣托马斯液(STH)、HTK液以及仿del Nido液干预2 h后,继续培养24~72 h,分别采用EdU荧光染色、Ki-67荧光染色及MTT比色法观察细胞增殖情况;采用Western Blot免疫印迹法检测YAP1蛋白表达水平。结果EdU荧光染色和Ki-67免疫组织化学染色阳性细胞计数:HTK液组最高,改良STH液组次之,仿del Nido液低于复方电解质组;MTT法检测OD值:HTK液组最高,改良STH液组次之,仿del Nido液高于复方电解质组;YAP1 Western Blot灰度值:HTK液组高于其他各组。结论HTK液和改良STH液对离体小鼠未成熟心肌增殖能力具有明显的保护作用。

金属硫蛋白对缺血/再灌注未成熟心肌细胞功能的影响

目的探讨诱导金属硫蛋白(MT)在未成熟心肌中的表达对缺血/再灌注未成熟心肌细胞功能的影响。方法采用Langendorff离体灌注模型 ,大白兔分为4组 :对照组(C ,n=9) ,腹腔注射蒸馏水0.3ml,按注射后时间12、24、和48h取离体心脏 ,灌注KH液15min转为工作心15min,全心停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min ;E12h组 (n=6)、E24h组 (n=6)、E48h组 (n=6)各组分别按腹腔注射3.6 %ZnSO4(1.5ml/kg)后12、24和48h取离体心脏 ,常规建立Langendorff灌注模型。方法同C组。以心肌细胞中MT含量、CK和LDH漏出率、ATP含量、心肌细胞内Ca2 +含量、心肌线粒体Ca2 +-ATPase活性及其Ca2 +含量、心肌线粒体合成ATP能力[ATP]m作为观察指标。结果腹腔注射ZnSO4 后12hMT开始表达 ,24h达高峰 ,48h仍在高表达水平。MT含量在E24h、E48h组与C、E12h组比较明显增高 ;E24h、E48h组ATP含量优于C组和E12h 组 (P<0.05) ,CK、LDH漏出率均低于C组和E12h组(P<0.05) ,心肌线粒体Ca2 +-ATPase活性、[ATP]m均优于C组和E12h组(P<0.01) ,心肌细胞内Ca2 +含量、心肌线粒体Ca2 +含量低于C组和E12h组(P<0.01)。结论腹腔注射ZnSO4 可诱导心肌MT长时间表达 ,MT可减轻未成熟心肌细胞缺血/再灌注损伤。

自体冷血心脏停搏液对未成熟心肌细胞ATP及三磷酸腺苷酶的影响

目的：通过对比自体冷血心脏停搏液与HTK液对未成熟心肌细胞ATP含量及三磷酸腺苷酶（ATPase）活性的影响，提示自体冷血心脏停搏液对未成熟心肌细胞的保护作用。方法：年龄≤1岁行体外循环室间隔缺损修补术的患儿40例随机分为2组，实验组20捌、对照组20例。主动脉阻断后，分别用自体冷血停搏液、HTK液根部灌注。于心脏停跳前、复跳后30min取右心耳标本50mg，测定心肌ATP含量及ATPase活性。运用统计学t检验的方法，得出研究结果。结果：主动脉阻断前两组患儿心肌ATP含量（btg／mg）与Na＋-K＋-ATPase、Ca2＋-ATPase、Ca2＋-Mg2＋-～AT-Pase活性（umol／mgoh）无统计学差异（P〉0．05）；主动脉开放后30min心肌ATP含量与ATPase活性均较阻断前显著减少（P〈0．01）；主动脉开放后30min两组患儿心肌ATP含量与ATPase活性有明显差异（P〈0．01）；对照组主动脉开放后30min心肌ATP的损耗量明显较实验组增多（P〈0．01）。结论：自体冷血停搏液可提升体外循环G内直视手术术后未成熟心肌细胞ATP含量及ATPase活性，对未成熟心肌的心肌保护效果明显优于HTK液。

HOE642对减轻缺氧/复氧致未成熟兔心肌细胞内钙超载的作用

目的 :观察Na+ H+ 交换抑制剂HOE642 (Cariporide)对缺氧 /再复氧前后未成熟兔心肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2 + ]i)的影响 ,探讨HOE642对未成熟心肌保护机制。方法 :6枚新西兰幼兔心脏 ,用酶解法分离成单个未成熟兔心肌细胞悬液 ,每份细胞悬液均随机分为基础组、对照组和实验组 ,基础组未经缺氧直接测量细胞内Ca2 + 及心肌酶含量 (CK、LDH) ,而后两组均经受缺氧 60min ,再复氧 30min后测量 ,其中实验组于缺氧时加入HOE642 (1μmol/L)。用Flou 3/AM标记 ,激光扫描共聚焦显微镜测定单个未成熟免心肌细胞内游离钙浓度。另测定三组心肌细胞悬液中心肌酶含量 (CK、LDH)。结果 :缺氧 /再复氧后对照组未成熟兔心肌细胞内 [Ca2 + ]i(2 814± 2 36 1375± 10 2 )及心肌酶漏出量明显高于缺氧前基础值 (P <0 .0 1) ;再复氧后HOE642处理组心肌细胞内 [Ca2 + ]i较缺氧前基础值增加不显著 (144 6± 12 8 1375± 10 2 ,P >0 .0 5 ) ;而较未用药对照组明显减少 (144 6± 12 8/2 814± 2 36,P <0 .0 1)。而HOE642处理组细胞悬液心肌酶漏出量较基础值有所增加 ,但其相差不显著 ,而较对照组有心肌酶漏出量明显减少 ,两者相差非常显著 (P <0 .0 1)。说明HOE642对缺氧

二氮嗪预处理在培养的未成熟鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的保护作用

目的 研究线粒体ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪预处理对培养的未成熟心肌细胞的保护作用。方法 传代培养的未成熟S -D大鼠心肌细胞 ,随机分为对照组、缺氧 /复氧组 (缺氧 3h、复氧 3h)、二氮嗪 (30 μmol/L)组、格列本脲 (10 μmol/L)组、超氧化物歧化酶 (SOD ,3× 10 5U/L) /过氧化氢酶 (CAT ,4 .5× 10 5U/L)组、N - 2乙酰丙酰基甘氨酸 (MPG ,10 0 μmol/L)组。实验结束时全自动生化仪检测培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)活性、台盼蓝染色法计算细胞死亡率、硫代巴比妥酸法测定细胞内丙二醛 (MDA)含量、铈化学染色法观察细胞线粒体结构。结果二氮嗪预处理后细胞死亡率、细胞内MDA含量、培养液中LDH活性较缺氧 /复氧组降低 (P <0 .0 1) ,铈 -氧自由基 (Ce -ROS)形成减少 ;格列本脲、SOD/CAT和MPG可以阻断此保护作用。结论 二氮嗪预处理对未成熟心肌有保护作用 。

自体冷血心脏停搏液对未成熟心肌CK-MB、cTnI及细胞线粒体的影响

目的通过对比自体冷血心脏停搏液与HTK液对未成熟心肌释放CK-MB、cTnI及细胞线粒体的影响,提示自体冷血心脏停搏液对未成熟心肌细胞的保护作用。方法年龄≤1岁行体外循环室间隔缺损修补术的患儿40例随机分为两组,实验组20例、对照组20例。主动脉阻断后,分别用自体冷血停搏液、HTK液根部灌注。于心脏停跳前、复跳后30min取右心耳标本1mm×1mm×1mm电镜观察细胞线粒体形态,并用Flameng法评价线粒体损伤程度。另外于术前、术毕、术后24、48h经桡动脉采血检测cTnI及CK-MB。研究上述两组各项指标的差异,运用统计学t检验的方法,得出研究结果。结果术后cTnI和CK-MB均明显升高,其中对照组cTnI和CK-MB升高较多(P<0.01)。主动脉阻断前心肌线粒体基本完好,偶见基质颗粒丢失或线粒体肿胀。主动脉开放后,线粒体出现不同程度损伤样改变,如颗粒丢失或嵴断裂。主动脉开放后两组患儿心肌线粒体Flameng评分显著增高(P<0.01),开放后对照组评分比自体冷血停搏液组明显增高(P<0.05)。结论自体冷血停搏液可减少未成熟心肌释放CK-MB与cTnI。能减轻缺血再灌注对未成熟心肌细胞线粒体的损伤。自体冷血心脏停搏液对未成熟心肌的心肌保护效果明显优于HTK液。

二氮嗪介导的延迟预处理对未成熟心肌的保护机制研究

目的研究二氮嗪(DZX)介导的延迟预处理对缺血缺氧环境中未成熟心肌的保护作用机制。方法分离培养新生鼠心肌细胞随机分为:①缺氧组;②DZX组:细胞缺氧培养前24 h放入含100μmol/L的DZX的培养液15 min;③DZX+PDTC组:细胞缺氧培养前24 h放入含100μmol/L DZX和500μmol/L二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的培养液15 min;④对照组。前3组细胞在缺氧模型中培养16 h,对照组一直有氧培养。采用Hoechst染色、Annexin V/PI流式检测凋亡细胞,Western Blot检测心肌细胞Bax和Bcl-2的表达。结果①流式检测示DZX组较缺氧组细胞凋亡明显降低(P<0.01),Hoechst染色心肌凋亡细胞也减少;②与DZX组比较,加入PDTC后,流式检测显示细胞凋亡显著增多(P<0.01),Hoechst染色心肌细胞凋亡增多,Western blot检测显示Bcl-2表达减少,Bax表达增加。结论线粒体钾通道开放剂二氮嗪介导的延迟预处理对心肌有明显的保护作用;位于下游的NF-κB通过调控促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的的表达在未成熟心肌的延迟预处理中起着关键作用。

成熟与未成熟心肌雌激素受体α和β的表达及其意义

目的研究大鼠成熟与未成熟心肌雌激素受体(ER)α和β的表达及其意义。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应和免疫荧光组织化学方法,测定新生和成年大鼠心脏各部的ERα和ERβmRNA及其蛋白质的表达。结果半定量RT-PCR分析显示ERαmRNA在未成熟心肌表达较低,但在成熟心肌ERαmRNA的表达水平显著提高。相反,未成熟心肌ERβmRNA表达水平较高,而成熟心肌ERβmRNA表达水平明显降低。免疫荧光组织化学图像分析证实这种差别也体现在雌激素受体α和β的蛋白质表达上。结论在成熟和未成熟心肌雌激素受本α和β并存,但存在明显的表达差异;ERα是雌激素调控成熟心肌的优势受体,在稳定成熟心肌的基因表达型发挥重要作用;而ERβ在未成熟心肌细胞的生长发育过程中起主导作用。