龙眼体胚相关未知蛋白基因DlUP-4的克隆与表达分析

以龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性培养物为材料,采用简并引物结合RACE方法分离得到龙眼体胚相关未知蛋白基因DlUP-4的cDNA全长序列,全长为1 061 bp,由735个核苷酸组成的开放阅读框,编码244个氨基酸(GenBank登录号为GQ443758)。采用生物信息学方法分析,发现该基因推导的蛋白分子量为28 576 ku,pI为9.96;该蛋白为60S Ribosomal protein L30蛋白质家族成员中的L7蛋白,是一个具有核糖体蛋白L30信号位点和1个典型的Ribosomal L30 like superfamily组件,无典型信号肽结构,无跨膜螺旋的亲水性蛋白;α螺旋是该蛋白最大量的结构元件,散布于整个蛋白质中。实时荧光定量PCR分析结果显示,DlUP-4基因在龙眼体胚发生过程中均有表达,其表达水平的趋势呈"M"形,其中2个高峰出现在不完全胚性紧实结构阶段和鱼雷形胚阶段,而球形胚阶段最低。该研究结果对DlUP-4基因在龙眼体胚发生过程中的作用有了一个初步的认识,其在龙眼体胚发生过程中,在调控体胚发生的启动、细胞的极化、细胞的增殖等方面可能有重要的功能,这为进一步研究该基因在龙眼体胚发生过程中的功能奠定了基础。

酵母双杂交技术筛选人白细胞cDNA文库中HCV NS4B结合蛋白

目的筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白4B(HCVNS4B)在人白细胞cDNA文库中的相互作用蛋白。方法应用酵母双杂交技术筛选人白细胞文库中与HCVNS4B相互作用的蛋白,对筛选结果中目的蛋白的编码基因进行克隆,并构建其酵母表达载体,在酵母细胞中进行回交验证。结果共筛选出人白细胞cDNA文库中与能够与HCVNS4B相互作用的蛋白5种(溶菌酶前体、推测的人翻译起始因子、人选择素P配体、人HC7371基因和TNF-alpha转换酶)以及一个未知功能基因。对新基因成功克隆,在酵母细胞中回交验证了HCVNS4B与该基因的相互作用。结论在人白细胞cDNA文库中存在一些能够与HCVNS4B相互作用的蛋白,它们均与细胞的生长和代谢状态有着密切的关系,其具体作用机制尚有待进一步研究。

静注人免疫球蛋白(pH4)中未知组分的生物质谱分析

采用分子排阻色谱(SEC)法测定静注人免疫球蛋白(pH 4)分子大小分布时,在Ig G二聚体和多聚体峰之间发现一未知组分。本研究采用质谱技术分析该未知组分的蛋白质信息。以SEC法分离收集来自4个厂家样品中的该未知组分,经除盐、浓缩和酶解,将获得的肽段采用nano-LC-MS/MS法鉴定蛋白质。结果显示,3个企业样品中的未知组分除含有Ig G外还含有其他杂蛋白,另1企业样品中的未知组分主要为Ig G亚类。将nano-LC-MS/MS获得的未知组分蛋白质信息建立杂蛋白谱数据库,可为药品监管服务。