ATO,ATRA/G-CSF联合使用加速RAR α降解诱导NB4细胞末端分化

目的:探讨三氧化二砷(ATO)、全反式维甲酸(ATRA)及粒细胞集落刺激因子(G-CSF)(A/G)联合使用,诱导NB4细胞末端分化的分子机理。方法:台盼蓝染色记录细胞生长,吉姆萨染色观察细胞的形态学变化,流式细胞仪分析确定细胞分化分子标志及凋亡,Western blot观察RAR α蛋白的表达。结果:NB4细胞经过ATO+A/G处理,出现形态学末端分化特征和免疫表型的成熟。Western blot结果显示,RAR α基因是ATO特定的靶向目标。结论:ATO联合ATRA/G-CSF能够诱导NB4细胞末端分化,其机理与调节RAR α的表达有关。

MiR30b与小鼠Bach2相互作用的研究

目的研究B细胞末端分化过程中miR30b新的作用靶点。方法经生物信息学分析,利用特异性引物以及定点突变引物从小鼠c DNA中分别扩增大小为530、361和189bp三个目的片段,胶回收并对361和189bp进行拼接,获得野生型、突变型小鼠Bach2 mRNA特异性片段,分别与pmir GLO载体连接,构建野生型、突变型重组荧光素酶报告基因质粒pmir GLO-m Bach2、pmir GLO-m Bach2 mt;与miR30b共转染至HEK293 T细胞,分析其荧光素酶活性。结果重组荧光素酶报告基因质粒经双酶切及测序证实构建正确;共转染后,与pmir GLO+miR30b组相比,pmir GLO-m Bach2+miR30b组的荧光素酶活性明显降低(P<0.05),而pmir GLO-m Bach2 mt+miR30b组的荧光素酶活性则无明显改变(P>0.05)。结论小鼠Bach2 mRNA是miR30b的靶点。