针尖化学方法研究单壁碳纳米管末端羧基的解离性质

We have demonstrated here the dissociation behavior of carboxylic groups at the open end of Single\|Walled Carbon Nanotubes(SWNTs) by tip chemistry. SWNTs were cut into short pipes by acid oxidation and thus carboxylic groups were produced at the end of the tubes. The SWNTs can be immobilized onto AFM tips by surface condensation between amino\|terminated self\|assembled monolayers(SAMs) on AFM tips and carboxylic groups at the end of SWNTs. The p\%K\%\-\{1/2\} value of the SWNTs was then obtained from the force titration measurements of the SWNTs tips \%vs\%. hydroxyl\|terminated SAMs. The results showed a different force titration behaviour and variable p\%K\%\-\{1/2\} values among different SWNTs tips, indicating the variations in the chemistry from tube to tube.

亚低温对新生儿缺氧缺血性脑病患儿血清泛素羧基末端水解酶-L1、低氧诱导因子-1α表达水平及神经发育结局的影响

目的探讨亚低温对新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)患儿血清泛素羧基末端水解酶-L1(ubiquitin carboxy-terminal hydrolase-L1,UCH-L1)、低氧诱导因子-1a(hypoxiainducible factor-1α,HIF-1α)表达水平及预后的影响。方法选取2015年8月至2022年8月邯郸市妇幼保健院新生儿重症监护病房(neonatal intensive care unit,NICU)收治的110例中重度HIE患儿作为研究对象。根据家属是否同意患儿接受亚低温治疗,将患儿分为亚低温治疗组(n=70)和传统治疗组(n=40);亚低温治疗组患儿除常规治疗外,于出生后0~6 h实施选择性头部亚低温治疗。传统治疗组患儿给予常规治疗;治疗前和治疗后第3天,采用酶联免疫吸附实验双抗夹心法检测UCH-L1、HIF-1α表达水平。随访患儿出生后12~15个月神经发育结局。统计学方法采用独立样本t检验、配对t检验、χ^(2)检验或Fisher确切概率法。结果亚低温治疗组与传统治疗组治疗后血清UCH-L1[(1.9±0.4)与(3.1±0.3)μg/L,t=16.495,P<0.001]、HIF-1α表达水平[(1.40±0.22)与(2.75±0.19)μg/L,t=32.486,P<0.001]比较,亚低温治疗组明显低于传统治疗组;亚低温治疗组患儿治疗后血清UCH-L1表达水平低于治疗前[(1.9±0.4)与(3.3±0.5)μg/L,t'=18.293,P<0.01]。亚低温治疗组和传统治疗组在治疗3 d后,虽然两组血清中HIF-1α表达水平均出现高于治疗前[(1.40±0.22)与(1.23±0.29)μg/L,t'=3.907,P<0.001;(2.75±0.19)与(1.27±0.35)μg/L,t'=23.504,P<0.001],但是,亚低温抑制血清HIF-1α表达水平升高的效果明显优于传统治疗组。随访结果显示,亚低温治疗组患儿神经发育正常的比例高于传统治疗组[68.6%(48/70)与32.5%(13/40),χ^(2)=13.408,P<0.001];亚低温治疗组神经发育迟缓的比例低于传统治疗组[11.4%(8/70)与37.5%(15/40),χ^(2)=10.462,P<0.001]。结论亚低温治疗可以明显降低中重度HIE患儿血清UCHL1表达水平,抑制血清HIF-1a表达水平升高的作用明显优于传统治疗,这可能是低温治疗的神经保护机制之一。

血清总Ⅰ型前胶原氨基端前肽和β-Ⅰ型胶原交联羧基末端肽联合检测对早期预测四肢长骨骨折延迟愈合的临床价值

目的 探讨血清总Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)和β-Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(β-CTX)联合检测对早期预测长骨骨折延迟愈合的临床价值。方法 测定156例四肢长骨骨折患者术后1、4、8、12周时的血清PINP和β-CTX水平,根据骨折愈合情况将患者分为延迟愈合组(30例)和正常愈合组(126例),比较两组的血清PINP和β-CTX水平。采用logistic回归分析四肢长骨骨折延迟愈合的影响因素,并采用ROC曲线分析术后血清PINP和β-CTX联合检测对四肢长骨骨折延迟愈合的早期预测效能。结果 两组骨折术后血清PINP和β-CTX水平呈升高趋势,在治疗后8周达高峰,随后下降。骨折术后4、8、12周时,延迟愈合组血清PINP和β-CTX水平均低于正常愈合组,差异有统计学意义(P <0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,术后血清PINP和β-CTX水平是四肢长骨骨折延迟愈合的独立危险因素(P <0.05)。ROC曲线显示,术后血清PINP和β-CTX联合检测预测长骨骨折延迟愈合的ROC曲线下面积(AUC)为0.861(P <0.05)。结论 术后血清PINP和β-CTX水平与四肢长骨骨折延迟愈合密切相关,二者联合检测有助于早期预测四肢长骨骨折延迟愈合。

血清泛素羧基末端水解酶L1联合APACHEⅡ评分对一氧化碳中毒患者认知功能障碍的预测价值

目的探讨血清泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)联合急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)对急性一氧化碳(CO)中毒患者认知功能障碍的预测价值。方法选取2020年7月至2023年7月期间在本院确诊的急性CO中毒患者135例为本研究对象,根据简易精神状态评分(MMSE)分为认知功能障碍组(n=28)和无障碍组(n=107)。采用ELISA法检血清UCH-L1水平,APACHEⅡ评分评估患者病情严重程度。采用Spearson检验分析血清UCH-L1水平与APACHEⅡ评分的相关性,Logistic回归分析急性CO中毒患者认知功能障碍的影响因素,受试者工作特性(ROC)曲线评估UCH-L1、APACHEⅡ评分及UCH-L1联合APACHEⅡ评分对急性CO中毒患者认知功能障碍的预测价值。结果认知功能障碍组APACHEⅡ评分、血乳酸、白细胞计数和UCH-L1水平明显高于无障碍组(P<0.05)。UCH-L1水平与APACHEⅡ评分、血乳酸和白细胞计数呈正相关(r值分别为0.565、0.428、0.403,P<0.05)。高APACHEⅡ评分(OR=2.512,95%CI:1.582~3.989),高血乳酸(OR=2.145,95%CI:1.311~3.508),高白细胞计数(OR=1.835,95%CI:1.054~3.195),高UCH-L1水平(OR=2.898,95%CI:1.727~4.862)是急性CO中毒患者认知功能障碍的危险因素(P<0.05)。UCH-L1、APACHEⅡ评分预测急性CO中毒患者认知功能障碍的AUC分别为0.798(95%CI:0.712~0.836)、0.749(95%CI:0.632~0.798),UCH-L1联合APACHEⅡ评分预测的AUC为0.844(95%CI:0.775~0.873)。结论UCH-L1、APACHEⅡ评分在急性CO中毒认知功能障碍患者中均呈高表达,可作为预测急性CO中毒患者有无发生认知功能障碍的重要指标,且联合检测具有较高敏感度和特异度,预测效能更佳。

胶质纤维酸性蛋白、泛素羧基末端水解酶L1、白介素-6在急性缺血性脑卒中变化及与预后的关系

目的 分析胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)、白介素-6(IL-6)在急性缺血性脑卒中(AIS)患者中的变化及与疾病程度、预后的关系。方法 将我院收治的68例AIS患者作为研究组,同期健康体检者72例作为对照组。对比不同人群GFAP、UCH-L1、IL-6水平,分析与AIS疾病程度的关系以及对预后的预测价值。结果 不同人群UCH-L1、GFAP、IL-6水平比较:研究组高于对照组,重度组>中度组>轻度组,预后不良组高于预后良好组(P<0.05);GFAP、UCH-L1、IL-6水平与NIHSS评分呈正相关(P<0.05);UCH-L1、GFAP、IL-6联合预测AIS患者预后的AUC=0.975,大于三者单独检测(P<0.05)。结论 AIS患者GFAP、UCH-L1、IL-6异常升高,三者与疾病程度呈正相关,对患者预后的预测有重要作用。

长期抑制泛素羧基末端水解酶L1在自发性高血压大鼠视网膜病变中的作用及其机制研究

目的探讨泛素羧基末端水解酶L1(UCHL1)在自发性高血压(SHR)大鼠高血压及视网膜病变中的作用及机制。方法选取1个月龄清洁级京都维斯特(WKY)和SHR大鼠各16只,随机分为WKY对照组、WKY+LDN57444组、SHR对照组和SHR+LDN57444组,每组8只。WKY+LDN67444组、SHR+LDN57444组连续给予UCHL1抑制剂LDN67444[20μg/(kg·d)]灌胃治疗4个月。采用苏木精和伊红染色检测视网膜病理变化,二氢乙锭(DHE)荧光法检测视网膜活性氧(ROS)水平,同工凝集素(Isolectin B4)/DAPI染色检测视网膜内皮细胞增殖情况,实时荧光定量PCR检测UCHL1、炎症因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶(NOX)1、NOX2、NOX4 mRNA水平,蛋白质印迹法检测UCHL1、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、抗血管内皮生长因子(VEGF)、抗磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化人核转录因子-κB(p-NF-κB)和磷酸化κB抑制蛋白激酶α/β(p-IKKα/β)蛋白水平。结果与WKY大鼠比较,SHR大鼠视网膜表现出中央厚度、ROS生成和内皮细胞增殖能力增加等病理损伤;自2个月龄起,SHR大鼠视网膜UCHL1水平和收缩压均逐渐升高;IL-1β、IL-6、TNF-α、NOX1、NOX2、NOX4水平升高;p-AKT、p-IKKα/β、p-NF-κB、HIF-1α、VEGF蛋白水平明显升高(均P<0.05)。与SHR对照组比较,SHR+LDN57444组大鼠血压降低,视网膜中央厚度、ROS生成和内皮细胞增殖能力增加等病理损伤有所减轻;视网膜炎症和NOX1、NOX2、NOX4水平降低,p-AKT、p-IKKα/β、p-NF-κB、HIF-1α、VEGF蛋白水平降低(均P<0.05)。结论UCHL1参与高血压视网膜病变的发生发展,UCHL1的抑制机制可能是通过抑制AKT、HIF-1α和下游相关信号介质(IKKα/β、NF-κB和VEGF)的激活实现的,抑制UCHL1可降低血压,改善视网膜中央厚度、抑制炎症和氧化应激水平。

血清高速泳动族蛋白B1、泛素羧基末端水解酶-Ll水平与心肺复苏术后神经功能预后不良的关系

目的探讨血清高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、泛素羧基末端水解酶-L1(UCH-L1)与心肺复苏术后神经功能预后不良的关系。方法选取2019年1月至2022年10月海南医学院第一附属医院收治的心脏骤停体外心肺复苏后自主循环恢复患者175例为研究对象。依据患者神经功能预后情况分为预后不良组(75例)、预后良好组(100例)。比较两组血清HMGB1、UCH-L1水平及临床资料[性别、年龄、体重指数、机械通气时间、吸烟史、饮酒史、既往基础疾病史、心脏骤停病因、自主循环恢复时间、院前急救时间、肾脏替代治疗、格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、急性生理与慢性健康Ⅱ(APACHEⅡ)评分]的差异,采用logistic多因素回归分析影响患者神经功能预后的因素,受试者操作特征(ROC)曲线分析血清HMGB1、UCH-L1对神经功能预后不良的预测价值。结果预后不良组APACHEⅡ评分、机械通气时间、血清HMGB1、UCH-L1高于预后良好组,而GCS评分低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。logistic多因素回归分析显示,HMGB1、UCH-L1、APACHEⅡ评分是心肺复苏后神经功能预后不良的独立危险因素(OR>1,P<0.05)。ROC曲线分析显示,HMGB1联合UCH-L1对患者神经功能预后不良的预测效能高于HMGB1、UCH-L1单独预测(P<0.05)。结论心肺复苏后神经功能预后不良患者血清HMGB1、UCH-L1水平显著升高,二者是患者神经功能预后不良的独立危险因素,联合检测有助于患者神经功能预后不良的早期评估。

具有活性羧基末端的长循环脂质体的制备和分布

目的 研究长循环免疫脂质体 (immunoliposomes,IML)的制备方法 ,体外靶细胞杀伤活性和在小鼠体内的组织分布。方法 合成和纯化了 1个带末端羧基的磷脂酰乙醇胺 (PE)的聚乙二醇衍生物 (DPPE PEG30 0 0 COOH) ,掺入脂质体中制成长循环脂质体 ;通过羧基活泼酯化 ,将膀胱癌单克隆抗体BDI 1或小鼠IgG共价连接到该脂质体表面制成免疫脂质体 ,体外肿瘤细胞杀伤实验检测载阿霉素免疫脂质体 (ADM BDI 1 IML)特异杀伤靶细胞的能力。用同位素氚示踪法测量免疫脂质体在小鼠的组织分布。结果 抗体在脂质体上的结合率可达 30 %。体外肿瘤细胞杀伤实验证明载阿霉素免疫脂质体有选择性杀伤靶细胞人膀胱癌细胞EJ的能力。和普通脂质体相比 ,免疫脂质体在血中的滞留时间明显延长 ,并减少了在肝、脾的聚集。结论 长循环免疫脂质体在血中有较长的滞留时间 ,在体外有特异寻靶活性 ,载阿霉素免疫脂质体有选择性杀伤靶细胞的活性 。

急性脑梗死患者血清泛素羧基末端水解酶-1和胶质纤维酸性蛋白的表达及其临床意义

目的:观察急性脑梗死患者血清泛素羧基末端水解酶-1(ubiquitin C-terminal hydrolase-L1,UCH-L1)和血清胶质纤维酸性蛋白(serum glial fibrillary acidic protein,GFAP)的临床表达水平,并探讨二者对脑梗死患者的临床意义。方法:选取重庆市肿瘤医院在2014年1月至2016年2月期间收治的80例急性脑梗死患者作为观察组,另选取同时段来院做体格检查的80例健康者作为对照组。分别检测两组研究对象的血清UCH-L1和GFAP的表达水平。结果:UCH-L1诊断脑梗死的敏感度为75.0%,特异度为87.5%;GFAP诊断脑梗死的敏感度为81.3%,特异度为90.0%。UCH-L1和GFAP的受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线下面积分别为0.670及0.757。两组研究对象在年龄、性别、饮酒、吸烟、糖尿病、高脂血症等一般情况中比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者患高血压的比例明显高于对照组(P<0.05);经Spearson/Pearson分析显示血清UCH-L1与GFAP水平与高血压呈正比,与性别、年龄、糖尿病、高血脂、饮酒、吸烟等因素无相关性;观察组患者不同发病时间一般资料的比较,差异无统计学意义(P>0.05),血清UCH-L1和GFAP表达水平明显高于对照组(P<0.05);在不同发病时间两组患者血清UCH-L1和GFAP表达水平差异无统计学意义(P>0.05);轻、中、重型3组患者的血清UCH-L1和GFAP表达水平高于对照组(P<0.05);中、重型患者血清UCH-L1和GFAP表达水平高于轻型(P<0.05);观察组患者在不同发病时间里血清UCH-L1和GFAP表达水平与梗死灶大小差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析结果示血清UCH-L1和GFAP表达水平呈正相关(r=0.634,P=0.001)。结论:在急性脑梗死患者中早期血清UCH-L1和GFAP的表达水平明显升高,与脑梗死的病情严重程度有一定的相关性,可为临床上早期诊断及治疗提供依据。

冠心病患者血清Ⅰ型胶原羧基末端肽的表达变化及临床意义

目的：检测冠心病患者血清中Ⅰ型胶原羧基末端肽（ICTP）的水平变化，探讨其与MMP-2、MMP-9相关性，及在冠心病中的临床意义。方法纳入2013年10月-2014年03月在我院门诊和住院的冠心病患者103例，其中稳定型心绞痛（SAP）患者39例，不稳定型心绞痛（UA）患者39例，急性心梗（AMI）患者25例，选取38名非冠心病患者为对照组（Control, C）。留取研究对象5 ml静脉血，用夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测静脉血清（基质金属蛋白-2）、MMP-9、ICTP水平，组间比较采用单因素方差分析。结果 SAP与C组比较，血清MMP-2，MMP-9，ICTP水平稍增高，P〈0.05。UA组与SAP组、C组比较血清MMP-2、MMP-9、ICTP水平升高，P〈0.05。AMI组与SAP组及C组比较，血清MMP-2、MMP-9、ICTP升高，P〈0.05。AMI组与UA组比较，血清MMP-2、MMP-9、ICTP均无显著差异，P〈0.05。ICTP与MMP-2、MMP-9都具有正相关性（P〈0.05）；与斑块纤维组成比例呈负相关，与脂质比例呈正相关（P〈0.05）。结论冠心病患者血清ICTP水平升高可提示粥样斑块的不稳定性，与MMP-2水平相关，可作为无创性的ACS的预测指标。

pH值、乳酸、神经烯醇化酶及泛素羧基末端水解酶L1在早产儿脑损伤中的意义

目的探讨动脉血气pH值、乳酸、神经烯醇化酶(NSE)及泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)水平在早产儿脑损伤中的意义。方法选择符合早产儿脑损伤诊断标准的45例作为观察组,50例无脑损伤早产儿为对照组,所有病例均在生后第1、7天取动脉血查血气分析,并留取静脉血标本检测NSE和UCH-L1。结果生后第1天和第7天两组间pH值的异常率差异有统计学意义(P<0.05),观察组第1天与第7天pH值异常比例比较,差异有统计学意义(P<0.05),对照组第1天与第7天pH值异常比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组第1天乳酸值比较差异有统计学意义(P<0.05),两组第7天乳酸值比较差异无统计学意义(P>0.05),观察组第1天和第7天乳酸值比较,差异有统计学意义(P<0.01)。生后第1天和第7天两组间NSE和UCH-L1差异有统计学意义(P<0.01),观察组第1天NSE、UCH-L1和第7天比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论检测动脉血气、NSE及UCH-L1能够反映早产儿脑损伤,为早期干预提供理论依据。

脑梗死患者急性期血清泛素羧基末端水解酶-1及神经胶质原纤维酸性蛋白水平的变化

目的探讨泛素羧基末端水解酶-1（UCH-L1）、神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）在脑梗死急性期水平的变化。方法回顾性纳入2011年3月至2012年6月于首都医科大学宣武医院神经内科门诊、急诊和卒中筛查工程基地及北京市仁和医院神经内科病房就诊的早期脑梗死患者95例作为脑梗死组,并选择同期在体检中心接受体检的61名非卒中对象作为对照组。测定脑梗死组及脑梗死发病不同时间组（发病〈12 h组和发病12-24 h组）及美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）不同评分组（NIHSS 0-4分组和NIHSS 5-19分组）和对照组人群的血清UCH-L1、GFAP水平并进行各组间比较。构建受试者工作特征（ROC）曲线,获取相关参数在脑梗死诊断中的阳性与阴性的临界值及诊断敏感度与特异度。结果脑梗死组血清UCH-L1、GFAP均高于对照组[0.13（0.09,0.21）μg/L比0.05（0.02,0.13）μg/L,0.030（0.008,0.130）μg/L比0.004（0.004,0.020）μg/L;Z值分别为3.62、4.95,均P〈0.01];NIHSS评分5-19分组血清UCH-L1、GFAP水平高于NIHSS评分0-4分组[0.12（0.08,0.21）比0.09（0.08,0.18）,0.07（0.01,0.11）比0.04（0.01,0.10）;均P〈0.05]。发病12-24 h组血清UCH-L1、GFAP水平与发病〈12 h组差异无统计学意义[0.12（0.08,0.21）μg/L比0.09（0.08,0.18）μg/L,0.030（0.010,0.110）μg/L比0.040（0.008,0.100）μg/L;均P〉0.05]。UCH-L1、GFAP诊断急性脑梗死的ROC曲线分析结果显示,当血清UCH-L1≥0.18μg/L时,UCH-L1的敏感度、特异度分别为68%、74%;当血清GFAP≥0.11μg/L时,GFAP的敏感度和特异度分别为70%、86%;UCH-L1、GFAP诊断脑梗死的ROC曲线下面积分别为0.64及0.71。结论血清UCH-L1、GFAP水平在脑梗死急性期时有明显变化。血清UCH-L1、GFAP水平与卒中的严重程度可能具有一定相关性。

羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白反式激活作用的研究

0引言 乙型肝炎病毒(HBV)的感染,不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化、肝细胞癌的发生、发展过程密切相关[1-5].

羧基末端结合蛋白1对肝癌细胞HepG2增殖的影响

目的研究羧基末端结合蛋白1(C-terminal binding protein1,CtBP1)对人肝癌细胞HepG2增殖的影响及机制。方法采用CtBP1 siRNA转染HepG2细胞,实验分为4个组:空白对照组、转染试剂对照组、阴性序列对照组与干扰组。于转染后不同的时间收集细胞,用MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况。结果 CtBP1 siRNA转染有效抑制了HepG2细胞中CtBP1蛋白表达,与空白对照组比较,转染后72 h后,CtBP1蛋白下调了57.80%。CtBP1沉默后细胞生长受到抑制(P<0.05),转染后24、48、72、96 h生长抑制率分别为22.34%、52.15%、53.97%和54.77%;而对细胞周期分布无明显影响(P>0.05);但CtBP1表达下调有促凋亡作用,与对照组相比,干扰组的细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论 CtBP1沉默能抑制HepG2细胞增殖,其机制是通过促凋亡来实现的。CtBP1能促进肿瘤生长和抑制凋亡,是潜在的肿瘤治疗靶点。

放射性核素骨显像联合骨生化标志物Ⅰ型胶原羧基末端肽早期诊断乳腺癌骨转移

目的放射性核素骨显像联合I型胶原羧基末端肽（ICTP）在乳腺癌骨转移中的作用。方法应用Uni Q ICTP定量放射免疫分析技术（RIA）,对252例乳腺癌术后患者进行血清ICTP测定,并与SPECT核素骨显像比较。术后每6个月-12个月对骨转移患者、非骨转移患者和正常对照组定量测定ICTP,观察骨转移患者的病情严重程度。结果乳腺癌术后SPECT骨转移率为19.4%（48/252）;正常对照组、SPECT阴性组（非骨转移组）和SPECT阳性组（骨转移组）的ICTP分别为3.5±1.4!g/L、4.4±1.9!g/L和7.8±2.6!g/L。ICTP骨转移组与非骨转移组和正常对照组比较,差异均有统计学意义（t=8.543,P〈0.01;t=9.188,P〈0.01）。31例广泛骨转移与17例单发骨转移ICTP分别为9.5±3.5!g/L和5.1±2.8!g/L,差异有统计学意义（t=4.757,P〈0.01）。血清ICTP水平与骨转移数目多少呈显著正相关关系（df=48-2=46,χ=0.362,P〈0.01）。结论核素骨显像联合ICTP在早期诊断乳腺癌骨转移方面可以相互补充,核素骨显像在及时发现骨转移上的优势以及与ICTP在及时观察骨质破坏程度上的优势互补,对乳腺癌骨转移的早期诊断、危险度分层、判断疗效以及预后有较大的临床价值。

泛素羧基末端水解酶在肝阳化风证中的表达

目的比较泛素羧基末端水解酶在不同证中的表达及其意义。方法SD大鼠分为正常组,肝阳上亢组,肝阳化风组(包括出血性中风肝阳化风和缺血性肝阳化风)正常组不做处理,肝阳上亢组大鼠加灌附子汤4周复制肝阳上亢证动物模型,脑出血肝阳化风组大鼠加灌附子汤4周后用Ⅶ胶原酶诱导脑出血模型,复制成脑出血肝阳化风模型。脑缺血肝阳化风组大鼠加灌附子汤4周后用线栓法造成脑缺血模型,复制成缺血性肝阳化风模型。PCR法检测正常组,肝阳上亢组,肝阳化风组泛素羧基末端水解酶的基因表达情况。结果与正常组与肝阳上亢组比较,肝阳化风组泛素羧基末端水解酶表达显著下降(P<0.01)。结论泛素羧基末端水解酶在生理情况下降解突变、损伤和错误折叠蛋白质的主要途径,肝阳化风证泛素羧基末端水解酶的下降明显,提示肝阳化风证的泛素的再利用受阻,导致蛋白质异常聚积,泛素羧基末端水解酶可能成为判断疾病发展到某一阶段的标志。

Src羧基末端激酶结合蛋白过表达及棕榈酰化对裸鼠T系白血病Jurkat细胞增殖作用影响的研究

目的:建立Src羧基末端激酶结合蛋白(Cbp)过表达及棕榈酰化的T系白血病Jurkat细胞裸鼠模型,研究Cbp过表达及棕榈酰化对Jurkat细胞增殖作用的影响。方法:利用neg-EGFP、Cbp-EGFP、Cbp-m-EGFP融合蛋白慢病毒载体转染的Jurkat细胞构建动物模型,24只5周龄雌性BALB/c-nu小鼠随机分为空白对照组、空病毒对照组、Cbp过表达组和Cbp棕榈酰化位点突变组,每组6只。接种前和接种后0、1、2、3、4、5周裸鼠称重,取外周血计数白细胞总数。利用病毒本身携带的EGFP绿色荧光蛋白在激光共聚焦显微镜下观察Jurkat细胞在外周血中的增殖情况;HE染色观察肝脏的病理变化;流式细胞仪检测Jurkat细胞在小鼠骨髓和外周血中的增殖水平。结果:Cbp过表达组小鼠体重低于空白对照组,高于空病毒对照组和Cbp棕榈酰化位点突变组,Cbp棕榈酰化位点突变组小鼠体重低于空白对照组、空病毒对照组和Cbp过表达组。Cbp过表达组小鼠外周血白细胞总数和肝脏、骨髓、外周血中Jurkat细胞增殖水平高于空白对照组、低于空病毒对照组和Cbp棕榈酰化位点突变组。Cbp棕榈酰化位点突变组小鼠外周血白细胞总数和肝脏、骨髓、外周血中Jurkat细胞增殖水平高于空白对照组、空病毒对照组和Cbp过表达组。结论:成功建立了Cbp过表达及棕榈酰化的T系白血病Jurkat细胞动物模型,Cbp过表达可抑制Jurkat细胞增殖,Cbp棕榈酰化位点突变可促进Jurkat细胞增殖。

人巨细胞病毒大外膜磷蛋白pp150羧基末端的高效表达及初步应用

以基因工程抗原取代天然抗原用于人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的诊断，具有广阔的前景。为此，分离ＨＣＭＶ大外膜磷蛋白ｐｐ１５０基因ＯＲＦ３端４３４ｂｐ（编码羧基末端ａａ９４３～ａａ１０４８）的ＤＮＡ片段，导入带有高水平转录启动子Ｐｔｒｃ和六个串联组氨酸的原核表达载体ｐＴｒｃＨｉｓ，在大肠杆菌中得到高效表达，ＳＤＳＰＡＧＥ显示一明显的分子量为１５６ｋＤ的融合蛋白条带，ＬＫＢ激光扫描占菌体总蛋白的５１％以上，并且以可溶性形式存在。表达产物经高效特异性纯化后，ＥＬＩＳＡ结果表明其能够与ＨＣＭＶＩｇＭ阳性血清呈特异反应，为建立新一代ＨＣＭＶＩｇＭ检测试剂盒打下了基础。

羧基末端截短型乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白反式激活基因1的克隆化研究

目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)羧基末端截短型表面抗原中蛋白(MHBst)的反式激活作用,利用差异显示技术,筛选克隆MHBst蛋白的反式激活作用的靶基因,发现新型基因,为阐明MHBst对于肝细胞表达基因谱的影响,探索新的研究方向。方法:利用多聚酶链反应技术(PCR)扩增MHBst的编码基因片段,构建真核表达载体pcDNA3.1-MHBst,转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,与仅转染空白载体pcDNA3.1的HepG2细胞进行差异显示,利用抑制性消减杂交技术(SSH)克隆鉴定MHBst的反式激活作用的靶基因,通过生物信息学技术,确定新基因的序列,设计序列特异性引物,利用HepG2细胞来源的mRNA进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,克隆新基因,并对于新基因的序列以及编码基因产物序列进行分析。利用生物信息学技术确定TTP1基因是新基因。结果:构建表达载体pcDNA3.1-MHBst,经过序列分析和酶切鉴定正确。转染HepG2细胞系,利用SSH技术获得差异表达的基因片段。经对于美国生物工程信息学中心(NCBI)建立的核苷酸序列的数据库(GenBank)检索,证实这是一个新型基因片段。通过对于同源基因序列的比对,根据Kozak规则和终止密码子下游的多聚腺苷酸信号序列,确定新基因的序列,将这种MHBst反式激活的新基因命名为TTP1,并在GenBank中注册登录。结论:克隆并鉴定了乙型肝炎病毒羧基末端截短型表面抗原中蛋白反式激活作用的新型靶基因TTP1,为今后研究MHBst的反式激活作用,开辟了新的研究方向和可能。

神经型一氧化氮合酶羧基末端结合配体CAPON的研究进展

内皮衍生小分子气体一氧化氮（nitric oxide,NO）因阐明了NO在心血管系统中是具有重要调节作用。随后的研究揭示了NO参与多种病理生理过程,包括血管舒张、神经传递、巨噬细胞街道的细胞毒性、胃肠道平滑肌舒张及支气管扩张。在生物体内,NO的生成过程需要关键酶一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）的参与,将L-精氨酸（L-arginine,L-Arg）和分子氧作为底物,