电缆末端通路设计及施工方法研究

本文改变以往国内项目现场定位末端通路的传统做法,创新性地利用三维软件建模功能,结合相关图纸、规范,合理定位设备位置及末端通路支架,设计电缆托架安装路径,仪表管安装路径,建立托架、支架及护管模型,将定位信息反馈在预制方案中,实施一体化建造。此方法对比以往项目现场临时定位末端通路的做法,节省大量施工工时,施工效率明显提高,有效控制材料用量,节省项目成本,是加工设计实现“降本增效”的有效措施,值得在以后项目中推广及应用。

基于肌醇需求激酶1α/c-Jun氨基末端激酶信号通路探讨胆宁片干预非酒精性脂肪性肝病的作用及机制

目的基于肌醇需求激酶1α/c-Jun氨基末端激酶(IRE1α/JNK)信号通路,探讨胆宁片对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠的作用及机制。方法将32只SD大鼠随机分为正常饮食组(A组,等体积生理盐水,8只)和高脂饮食组(24只);高脂饮食组大鼠喂养10周复制NAFLD模型成功后,再随机分为模型组(B组,等体积生理盐水)、多烯磷脂酰胆碱组[C组,142.5 mg/(kg·d)]和胆宁片组[D组,562.5 mg/(kg·d)],各8只。各组小鼠均灌胃相应药物干预6周。测定大鼠的体质量、血糖(GLU);采用苏木精-伊红染色(HE)法观察大鼠肝组织病理形态变化,采用油红染色法观察肝组织脂质沉积;检测血清胰岛素(INS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(NEFA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;采用免疫印迹(Western blot)法检测肝组织IRE1α、JNK1、磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)的蛋白表达水平。结果与B组比较,D组大鼠血糖和TC,TG,LDL-C,NEFA,ALT,AST水平均显著降低(P<0.01),血清INS和HDL-C水平显著升高(P<0.01);脂肪变性程度及细胞肿胀明显减轻,脂滴空泡体积缩小,数量减少;肝脏IRE1α,JNK1,p-IRS1蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论胆宁片可能通过下调IRE1α/JNK信号通路,减轻肝脏脂肪变性,从而改善NAFLD。

恩格列净通过c-Jun氨基末端激酶信号通路改善2型糖尿病性骨质疏松症的机制研究

目的探讨恩格列净通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路改善2型糖尿病性骨质疏松症(T2DOP)的机制。方法将大鼠随机分为假手术组(sham组)、T2DOP组、EM组(予恩格列净干预)和EM+Anisomycin组(予EM+JNK激活剂Anisomycin干预),每组各10只。收集4组大鼠体重、血糖、血酸水平、骨代谢指标及股骨生物力学特征。采用Micro-CT测定股骨显微结构;HE染色检测股骨组织病理学变化;蛋白质印迹法(Western blot)检测骨组织中氨基末端激酶1(JNK1)、磷酸化JNK1(p-JNK1)、c-Jun、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)蛋白表达水平并分组进行比较。结果T2DOP组大鼠体重明显低于sham组,空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平均明显高于sham组;EM组大鼠体重明显高于T2DOP组,FPG、TG、TC及LDL-C水平均明显低于T2DOP组,TG、TC及LDL-C水平均明显高于sham组;EM+Anisomycin组大鼠体重明显低于EM组,FPG、TG、TC及LDL-C水平均明显高于EM组(P<0.05)。T2DOP组大鼠血清骨特异性转录因子(CBF-α1)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PⅠNP)、骨钙素(OC)及Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTXⅠ)水平、股骨最大负荷、断裂挠度、弹性模量、骨小梁骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)均明显低于sham组,骨小梁间隔(Tb.Sp)高于sham组;EM组大鼠血清CBF-α1、PⅠNP、OC及CTX-1水平、股骨最大负荷、断裂挠度、弹性模量、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th均明显高于T2DOP组,Tb.Sp低于T2DOP组;EM组大鼠血清CBF-α1、PⅠNP及OC水平、股骨最大负荷、断裂挠度、弹性模量、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th均明显低于sham组,CTX-1水平及Tb.Sp均高于sham组;EM+Anisomycin组大鼠血清CBF-α1、PⅠNP、OC及CTX-1水平、股骨最大负荷、断裂挠度、弹性模量、BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th均明显低于EM组,Tb.Sp高于EM组(P<0.05)。T2DOP组大鼠股骨组织中JNK1、p-JNK1、c-Jun、p-c-Jun蛋白表达水平均明显高于sham组;EM组大鼠股骨组织中JNK1、p-JNK1、c-Jun、p-c-Jun蛋白表达水平均明显低于T2DOP组;EM+Anisomycin组大鼠股骨组织中JNK1、p-JNK1、c-Jun、p-c-Jun蛋白表达水平均明显高于EM组(P<0.05)。结论恩格列净可改善T2DOP大鼠骨代谢量失衡和骨微结构,其作用机制可能和抑制JNK/c-Jun信号通路激活有关。

凋亡信号调节激酶1通过c-Jun氨基末端激酶通路调控高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤

目的研究细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase1,ASK1)对高糖诱导的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)损伤的保护作用及其可能的机制。方法建立大鼠RGC细胞的分离培养和体外高糖(50 mmol/L葡萄糖)损伤模型。转染ASK1 siRNA沉默ASK1的表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASK1 mRNA表达水平;Western blot检测ASK1、JNK蛋白表达量和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平;MTT和CCK-8方法、Ki67染色分别检测RGC生长活力和增殖情况;Annexin-V FITC/PI方法和TUNEL检测RGC凋亡情况;试剂盒方法检测Caspase-3活性。结果 RGC高糖环境下培养4d,细胞生长活力降低明显(P<0.05);ASK1表达水平在高糖损伤的RGC中明显上升(P<0.05);ASK1 siRNA的转染实验结果显示:ASK1的表达水平明显下降(P<0.05),说明沉默表达实验成功;ASK1表达被抑制后RGC的生长活力(P<0.05)和增殖能力(P<0.05)明显上升,RGC的凋亡(P<0.01)和Caspase-3的活力(P<0.01)明显降低。沉默ASK1的表达有效地降低JNK蛋白的磷酸化水平。结论抑制ASK1的表达对RGC的高糖损伤有保护作用,其机制可能与抑制JNK通路有关。

探讨降糖消渴颗粒对高脂饮食诱导2型糖尿病肾脏氨基末端激酶信号通路的影响

目的:运用降糖消渴颗粒治疗高脂饮食诱导2型糖尿病并探讨其对肾脏氨基末端激酶信号通路的影响。方法:72只Wistar大鼠,在SPF级条件下饲养,根据随机数字表法分为干预组、对照组和正常对照组,每组24只,通过链脲佐菌素(STZ)30 mg/kg腹腔注射协同高脂饮食诱导2型糖尿病进行动物造模,造模后干预,正常对照组予标准饲料;对照组予高糖高脂饲料;干预组予高糖高脂饲料,降糖消渴颗粒根据大鼠体重9 g/kg的计算灌胃剂量,1次/d。疗程8周。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测大鼠的血糖(Glu)、三酰甘油(TG),总胆固醇(TC)、血肌酐(Scr);常规HE染色,观察各组肾脏结构变化;实时荧光聚合酶链式反应(q-PCR)检测肾组织中氨基末端激酶(JNK)和胰高血糖样肽-1(GLP-1)mRNA的表达,蛋白质印迹法(Western Blot)检测肾组织中JNK信号通路的激活情况情况,JNK、磷酸化氨基末端激酶(p-JNK)和GLP-1的蛋白表达情况。结果:1)干预组经治疗后Glu、TC、TG和Scr较对照组显著下降(P<0.05)。2)干预组较对照组明显改善肾小球结构改变的情况(P<0.05)。3)与正常对照组比较,对照组中p-JNK蛋白表达显著升高(P<0.05),GLP-1基因和蛋白显著降低(P<0.05);经治疗后干预组p-JNK蛋白较对照组降低(P<0.05),而GLP-1基因和蛋白升高(P<0.05)。结论:降糖消渴颗粒可调节糖、脂质代谢,发挥保护肾脏作用,其作用机制可能与抑制JNK信号通路,上调GLP-1有关。

c-Jun氨基末端激酶信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导腹主动脉瘤小鼠模型中的作用机制研究

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)小鼠模型中的作用机制。方法将C57BL/6 ApoE-/-(ApoE knock out,ApoE KO)雄性小鼠随机分为3组,假性手术组、模型组和抑制剂组;假性手术组背部肩胛间皮下手术植入预装生理盐水微量缓释泵,模型组、抑制剂组小鼠背部肩胛间皮下手术植入AngⅡ的痕量缓释泵(1000 ng/(min·kg)),造模周期为28 d,抑制剂组术前48 h腹腔注射JNK抑制剂SP600125(2 mg/kg)1 mL/d进行预处理,假性手术组和模型组给予等体积的生理盐水。苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察小鼠炎性反应指标,双氯荧光素(2′,7′-dichlorfluorescein-diacetate,DCFH-DA)染色检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的荧光强度,蛋白免疫印迹检测p-JNK、p-c-Jun蛋白表达。结果与假性手术组相比,模型组小鼠AAA病理症状明显,AAA组织中绿色荧光明显增强,ROS含量明显升高,p-JNK及p-c-Jun的表达出现了明显的增强,差异均具有统计学意义(均P<0.05);与模型组相比,抑制剂组小鼠AAA病理症状相对好转,AAA组织中荧光强度明显减弱,ROS含量明显降低,p-JNK及p-c-Jun的表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论JNK信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导小鼠腹主动脉瘤模型中起着重要的调控作用,抑制该通路能抑制氧化应激反应,改善AAA症状。

冠心宁通过TNFAIP3-ASK1/JNK通路对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞表型转换的调控作用

目的探讨冠心宁(GXN)调控动脉粥样硬化(AS)斑块稳定性的分子机制。方法制备含有GXN药物的血清,利用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)构建AS体外模型,Western blot和qPCR检测VSMC表型转换情况。通过沉默肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3),检测GXN对VSMC表型转换的影响。构建凋亡信号调节激酶1(ASK1)过表达载体,并利用Lip3000转染进细胞,检测GXN是否通过凋亡信号调节激酶1/c-Jun氨基末端激酶(ASK1/JNK)通路发挥作用。结果与对照组比较,ox-LDL组的细胞表型转换,表现为I型胶原蛋白(COLIA1和COLIA2)、TNFAIP3和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平降低(均P<0.01),基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、MMP13、骨桥蛋白(OPN)、ASK1磷酸化与ASK1比值(p-ASK1/ASK1)、JNK磷酸化与JNK比值(p-JNK/JNK)升高(均P<0.01);GXN处理后VSMC表型转换为收缩型,表现为与ox-LDL组相比COLIA1、COLIA2和α-SMA水平增高(均P<0.01),MMP2、MMP9、MMP13、OPN、TNFAIP3的表达水平、p-ASK1/ASK1以及p-JNK/JNK都降低(均P<0.01)。沉默TNFAIP3后,与ox-LDL+10%GXN+sh-NC组相比,COLIA1、COLIA2、TNFAIP3和α-SMA水平降低(均P<0.01),MMP2、MMP9、MMP13、OPN、p-ASK1/ASK1以及p-JNK/JNK都升高(均P<0.01)。过表达ASK1后,与ox-LDL+10%GXN+oe-NC组相比,COLIA1、COLIA2和α-SMA的表达水平降低(均P<0.01),MMP2、MMP9、MMP13、OPN、p-ASK1/ASK1以及p-JNK/JNK都升高(均P<0.01)。结论GXN可能通过TNFAIP3调控ASK1/JNK通路介导VSMC表型转换,从而起到稳定动脉硬化斑块的作用。

c-Jun氨基末端激酶信号通路对肥胖诱导的大鼠胰岛β细胞凋亡的调控作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路对肥胖诱导的大鼠胰岛B细胞凋亡的调控作用。方法采用高脂饲料喂养雄性SD大鼠建立肥胖模型。造模成功后，取对照组和肥胖组大鼠各10只，检测其空腹血糖、游离脂肪酸及血清胰岛素水平，计算胰岛素抵抗指数。观察其胰腺组织病理学变化，并检测其胰腺组织中胰岛素、胰岛细胞凋亡指数及胰腺组织肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、磷酸化JNK（p-JNK）、B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达水平。结果肥胖组大鼠胰腺组织出现腺泡结构破坏、脂质块状沉积等病理学改变。肥胖组大鼠空腹血糖、游离脂肪酸、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数、B细胞凋亡指数、TNF-β、IL-1β、胰腺组织中胰岛素、P-JNK、Bax的表达水平显著高于对照组（P均〈0．05）；而Bcl-2表达水平显著低于对照组（P〈0．05）。结论JNK信号通路在肥胖大鼠被激活，进而发挥促肥胖诱导的大鼠胰岛β细胞凋亡的作用。

JNK通路相关磷酸酶水平变化在儿童炎症性肠病中的临床意义

本研究旨在探讨血清C-Jun N-末端激酶通路相关磷酸酶(C-Jun N-terminal kinase pathway-associated phosphatase, JKAP)水平在儿童炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease, IBD)中的表达及其与炎症轻重程度、疾病活动度、Th17细胞水平的相关性。方法:选取140例IBD患儿(包括60例克罗恩病(Crohn’s Disease, CD)儿童和80例溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis, UC)儿童)作为实验组,采用ELISA法检测其血清JKAP、TNF-α、IL-23、IFN-γ和IL-17A水平。同时,选取10名健康儿童作为对照者,ELISA法检测血清JKAP水平。结果:① 与健康对照组相比,CD儿童和UC儿童的血清JKAP水平降低(均p α呈负相关(均 p 0.05)。⑤ 在CD或UC儿童中,JKAP与IFN-γ (Th1分泌细胞因子)无相关性(均为p > 0.05)。⑥ 在CD和UC儿童中,JKAP与IL-17A (Th17分泌细胞因子)呈负相关(均为p < 0.05)。结论:血清JKAP水平在IBD儿童中呈低表达,与炎症轻重程度、疾病活动度和Th17细胞分泌的细胞因子水平呈负相关。

黄连碱预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠JNK/p38MAPK信号通路的影响

目的:探讨黄连碱预处理对心肌缺血再灌注(MI/RI)大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)/促分裂素原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响。方法:将60只大鼠随机分为MI/RI组、假手术组、黄连碱低剂量组(黄连碱-L组,50 mg/kg黄连碱)、黄连碱中剂量组(黄连碱-M组,100 mg/kg黄连碱)、黄连碱高剂量组(黄连碱-H组,200 mg/kg黄连碱)及黄连碱-H+激活剂组(50 mg/kg黄连碱+25 mg/L JNK/p38MAPK通路激活剂茴香霉素),每组10只。除假手术组外,其余各组均进行冠状动脉结扎构建MI/RI大鼠模型,造模后,观察血流动力学参数左室内压最大上升(LVdp/dt_(max))、左室内压最大下降速率(LVdp/dt_(min))、收缩压以及舒张末压变化;采集大鼠腹部主动脉血,评估心肌损伤程度指标肌酸激酶同工酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)含量;分离心肌组织,检测心肌组织病理学变化、细胞凋亡、炎性因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)]水平及JNK/p38MAPK通路相关蛋白表达。结果:与假手术组比较,MI/RI组存在大量炎性细胞浸润、组织结构紊乱,病理损伤严重,LVdp/dt_(max)、LVdp/dt_(min)、收缩压均降低,但凋亡率、舒张压、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6含量、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK表达增加(P<0.05);与MI/RI组比较,黄连碱-L组、黄连碱-M组、黄连碱-H组病理损伤得到改善,LVdp/dt_(max)、LVdp/dt_(min)、收缩压均增加,凋亡率、舒张压、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6含量、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK表达降低(P<0.05);与黄连碱-H组比较,黄连碱-H+激活剂组病理损伤进一步加剧,LVdp/dt_(max)、LVdp/dt_(min)、收缩压均降低,但凋亡率、舒张压、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6含量、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK表达增加(P<0.05)。结论:黄连碱预处理可通过抑制JNK/p38MAPK通路减轻MI/RI大鼠心肌损伤。

木犀草素对慢性肾衰竭大鼠c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路及肾小球基膜增生的影响

目的探讨木犀草素对慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾小球基膜(GBM)增生及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响。方法将50只SD大鼠分为模型组、木犀草素低、中、高剂量组、阳性对照组,每组各10只,建立CRF大鼠模型。造模结束后,木犀草素低、中、高剂量组大鼠分别以50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg木犀草素灌胃,阳性对照组大鼠以2 mg/kg贝那普利灌胃。另取10只大鼠作为正常组,正常组和模型组大鼠以生理盐水灌胃,6组均连续灌胃28 d。记录6组大鼠实验前后体质量、24 h尿量、24 h尿蛋白并比较,采用HE染色、Masson染色观察6组大鼠肾脏组织结构变化。检测各组大鼠实验后SCr、BUN、UA、FN、ColⅣ水平并比较。采用蛋白质免疫印迹法检测肾脏组织中JNK、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK水平并比较。结果实验后,模型组大鼠精神状态较差,体质量低于同期正常组,24 h尿量、24 h尿蛋白水平均高于同期正常组(P<0.05);木犀草素中、高剂量组、阳性对照组大鼠精神状态较同期模型组均有一定程度改善,体质量较同期模型组均升高,24 h尿量、24 h尿蛋白较同期模型组均降低(P<0.05)。光镜下可见模型组肾脏组织GBM增生,肾小管萎缩,局部灶紊乱明显,肾小球和肾小管纤维化明显;木犀草素低、中、高剂量组、阳性对照组大鼠精神状态、病理情况均有一定程度改善。与正常组比较,模型组SCr、BUN、UA、FN、ColⅣ水平均升高(P<0.05);与模型组比较,木犀草素中、高剂量组、阳性对照组SCr、BUN、UA、FN、ColⅣ及肾脏组织中p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK水平均降低(P<0.05)。与正常组比较,模型组肾脏组织中p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK水平均升高(P<0.05)。结论木犀草素可缓解CRF导致的GBM增生现象,可能是通过抑制JNK/MAPK信号通路实现的。

阿托伐他汀钙对甲状腺功能减退大鼠甲状腺功能、免疫应答及JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的探讨阿托伐他汀钙对甲状腺功能减退大鼠甲状腺功能、免疫应答及c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38 MAPK)信号通路的影响。方法将30只健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组(control组)、甲状腺功能减退组(PTU组)以及阿托伐他汀钙治疗组(ACT组),每组10只。PTU组及ACT组大鼠每天颈背皮下注射PTU,连续28 d;control组每只大鼠皮下注射0.3 mL生理盐水代替PTU。PTU处理2周后,ACT组大鼠灌胃阿托伐他汀钙生理盐水溶液3 mL(含阿托伐他汀钙5 mg/kg),每天给药1次;对照组按相同方法灌胃等量生理盐水。每周测量大鼠体质量、进食及饮水量的变化。通过组织病理切片观察各组大鼠甲状腺组织病理变化。酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)、干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IFN-γ、IL-10、Foxp3和IL-4的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测p-JNK/JNK和p-p38/p38 MAPK水平。结果与control相比,PTU诱导的甲状腺功能减退大鼠体质量降低,食物和水消耗减少,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗2周后,PTU大鼠体质量损失受到抑制,食物和水的消耗改善,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙可提高甲状腺功能减退大鼠血清T3、T4水平,降低血清TSH水平,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗可减轻PTU诱导的滤泡细胞增生及相关肥厚变化等组织病理学改变,增加卵泡大小,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗后增加了PTU大鼠的脾脏质量,降低了甲减大鼠IFN-γmRNA的表达,但增加了IL-10 mRNA、Foxp3 mRNA和IL-4 mRNA的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托伐他汀钙治疗后,甲状腺功能减退大鼠甲状腺组织中p-JNK/JNK和p-p38/p38 MAPK水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿托伐他汀钙治疗甲状腺功能减退症具有促使甲状腺激素失衡正常化、平衡Th1/Th2细胞因子、抑制JNK/p38 MAPK信号通路活化的功能。

SP600125抑制UVA激活皮肤成纤维细胞JNK通路的最佳浓度

【目的】研究抑制UVA激活的皮肤成纤维细胞JNK通路的最佳SP600125浓度,为研究JNK信号通路在光老化中的作用机制奠定基础。【方法】原代培养取自儿童包皮的皮肤成纤维细胞。用CCK-8法结合荧光倒置显微镜研究不同剂量UVA和不同浓度SP600125及两者联合对皮肤成纤维细胞活性和形态的影响,以选择非细胞毒性的UVA剂量和SP600125浓度。再用Western-blot检测UVA辐照后不同时间点皮肤成纤维细胞中磷酸化c-Jun(P-c-Jun)表达以确定其被诱导表达的时间点。最后用Western-blot检测不同浓度SP600125对UVA上调的P-c-Jun表达的抑制。【结果】UVA和SP600125分别辐照细胞和孵育细胞时,UVA≤10 J/cm2和SP600125≤2μmol/L均能保持细胞活性在90%以上。10 J/cm2的UVA辐照不同浓度SP600125孵育的细胞时,≤800 nmol/L的SP600125孵育的细胞活性在90%以上;1μmol/L的SP600125使细胞活性明显下降至67.1%,镜下见部分细胞皱缩、碎裂、死亡;2μmol/L的SP600125使细胞活性进一步下降至7.6%,镜下见绝大部分细胞变形、碎裂、死亡。Western-blot结果显示P-c-Jun在UVA辐照后0.75 h、1.5 h均较0 h升高,3 h后恢复至0 h水平。200~800 nmol/L SP600125呈剂量依赖性地抑制UVA上调的P-c-Jun表达,差异有统计学意义。【结论】低于常用浓度的200~800 nmol/L SP600125即可抑制UVA激活的皮肤成纤维细胞的JNK通路。JNK通路可能在UVA辐照的皮肤成纤维细胞中起抗凋亡作用。

Delta-catenin蛋白通过抑制JNK通路活性而减少肺癌细胞的凋亡

背景与目的:作为黏附蛋白catenin家族中的一员,Delta-catenin蛋白可以促进肿瘤细胞的增殖和侵袭,然而其提高肿瘤细胞增殖能力的机制并不清楚。本研究检测了Delta-catenin对肺癌细胞凋亡的影响及其与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein hinase,MAPK)信号通路蛋白的关系,并初步探索了Delta-catenin促进肿瘤细胞侵袭增殖的可能机制。方法:采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测肺癌细胞过表达Delta-catenin前后p38、c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase,JNK)蛋白活性的变化,同时利用流式细胞术检测了肿瘤细胞凋亡数量的改变,还通过Matrigel基质胶侵袭实验检测了肿瘤细胞侵袭数量的变化。结果:与未处理组和空载体对照组相比,过表达Delta-catenin后肺癌细胞的p38蛋白活性没有变化(P>0.05),但JNK的蛋白活性却显著减少(P<0.05),与此同时,肿瘤细胞的凋亡比例显著下降(P<0.05),而肿瘤细胞的侵袭能力却明显增强(P<0.05)。结论:Delta-catenin可能通过抑制肺癌细胞JNK通路的活性而减少肿瘤细胞的凋亡,进而促进肿瘤细胞的侵袭。

丝胶对高糖所致足细胞损伤和JNK信号通路的影响

目的:探讨丝胶对高糖所致足细胞损伤时c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路相关蛋白的表达及足细胞凋亡的影响,阐明丝胶的保护作用及其可能机制。方法:分化成熟的条件永生化小鼠足细胞随机分为正常对照组(含5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基)、高渗对照组(含5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖+24.5 mmol·L^(-1)甘露醇的培养基)、高糖组(含30.0 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基)、低浓度丝胶组(含30.0 mmol·L^(-1)葡萄糖+150.0 mg·L^(-1)丝胶的培养基)、中浓度丝胶组(含30.0 mmol·L^(-1)葡萄糖+300.0 mg·L^(-1)丝胶的培养基)和高浓度丝胶组(含30.0 mmol·L^(-1)葡萄糖+600.0 mg·L^(-1)丝胶的培养基)。采用光学倒置显微镜观察各组足细胞形态表现,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组足细胞中裂孔膜蛋白(Nephrin)、丝裂原活化蛋白激酶激酶1(MEKK1)、丝裂原活化蛋白激酶激酶4(MKK4)、c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)和c-Jun mRNA表达水平,Western blotting法检测各组足细胞中Nephrin、MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun蛋白表达水平,AnnexinⅤ/PI双染法检测各组足细胞凋亡率。结果:正常对照组足细胞胞体较大,并延伸生出树枝状突起;与正常对照组比较,高糖组足细胞胞体回缩变小,细胞间隔增大,脱落和悬浮的足细胞数目增多;与高糖组比较,不同浓度丝胶组足细胞形态逐渐趋于正常。高糖组足细胞中Nephrin mRNA和蛋白表达水平较正常对照组均明显降低(P<0.05),表明高糖致足细胞损伤模型建立成功。高糖组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1、c-Jun mRNA和蛋白表达水平较正常对照组明显升高(P<0.05);不同浓度丝胶组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun mRNA及蛋白表达水平较高糖组明显降低(P<0.05),且高浓度丝胶组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun mRNA及蛋白表达水平较中浓度丝胶组明显降低(P<0.05),中浓度丝胶组足细胞中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun mRNA及蛋白表达水平较低浓度丝胶组明显降低(P<0.05)。高糖组和高渗对照组足细胞凋亡率较正常对照组明显升高(P<0.05);不同浓度丝胶组足细胞凋亡率较高糖组明显降低(P<0.05),且高浓度丝胶组足细胞凋亡率较中浓度丝胶组明显降低(P<0.05),中浓度丝胶组足细胞凋亡率较低浓度丝胶组明显降低(P<0.05)。结论:丝胶对高糖所致足细胞损伤发挥保护作用,其机制可能与抑制JNK信号通路中MEKK1、MKK4、JNK1和c-Jun的表达及抑制足细胞凋亡有关联。

α-苦瓜素经LRP1受体介导的JNK信号通路诱导肝细胞L02早期凋亡的机制研究

目的:探讨α-苦瓜素诱导肝细胞L02(简称"L02细胞")早期凋亡的信号通路。方法:制备并纯化α-苦瓜素。采用流式细胞术检测0(阴性对照)、160、80μg/mLα-苦瓜素作用L02细胞2～8 h后的细胞凋亡率。小干扰RNA(siRNA)沉默低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)得到LRP1-siRNA细胞,然后采用液相芯片分析术检测α-苦瓜素(160μg/mL)分别作用L02细胞(正常组)和LRP1-siRNA细胞(沉默组)0、0.25、0.5、1、2 h后c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路中促调蛋白磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化凋亡前体蛋白(p-Bad)、胱天蛋白酶9(Caspase-9)及抑调蛋白磷酸化蛋白53(p-p53)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化B淋巴细胞瘤2(p-Bcl-2)、Caspase-8的表达情况,分析α-苦瓜素对L02细胞JNK信号通路的作用。结果:制备并纯化得到α-苦瓜素(纯度>97%);与阴性对照组比较,160μg/mLα-苦瓜素作用8 h时,可显著诱导细胞早期凋亡(P<0.05),80μg/mLα-苦瓜素诱导的早期凋亡不明显(P>0.05);与0 h比较,作用后0.25 h促调蛋白p-JNK、p-Bad和Caspase-9表达量显著增加(P<0.05),而抑调蛋白pp53、p-Akt、p-Bcl-2和Caspase-8表达量无变化;与正常组相比,沉默组各时间点的p-JNK、p-Bad和Caspase-9的表达均显著减少(P<0.05)。结论:α-苦瓜素可能通过LRP1受体介导JNK信号通路诱导肝细胞凋亡,为揭示其肝毒性提供了参考。

硫氧还蛋白-1通过调控IRE1-JNK信号通路改善血管性痴呆大鼠认知功能和神经损伤

目的研究慢病毒介导的硫氧还蛋白(Trx)-1过表达对血管性痴呆(VD)大鼠认知功能和神经损伤的改善作用及机制。方法按体重将SD大鼠随机分成假手术组(Sham组)、模型组(VD组)、Trx-1过表达空载慢病毒干预组(VD/Lv-NC组)、Trx-1过表达慢病毒干预组(VD/Lv-Trx-1组)及肌醇酶(IRE)-1抑制剂KIRA6干预组(VD/KIRA6组)各10只。各干预组及模型组以双侧颈总动脉夹闭再通法建立VD模型。VD/Lv-NC及VD/Lv-Trx-1组在造模前24 h侧脑注射对应慢病毒溶液0.2 ml;VD/KIRA6组在造模前2 h侧脑注射KIRA6溶液(剂量10 mg/kg);Sham及VD组则注射等量生理盐水。在造模24 h后,采用Morris水迷宫测试认知能力;取海马组织,原位末端标记技术(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况;Western印迹检测磷酸化肌醇酶(p-IRE)1及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白的表达水平。结果造模24 h后,VD组较Sham组逃避潜伏期显著延长、跨越原平台次数显著减少(均P<0.01);与VD组比较,VD/Lv-Trx-1组及VD/KIRA6组逃避潜伏期显著缩短、跨越原平台次数显著增多(均P<0.01)。与Sham组比较,VD组Trx-1显著降低、p-IRE1和p-JNK显著增多(均P<0.01);与VD组比较VD/Lv-Trx-1组、VD/KIRA6组Trx-显著增多、p-IRE1和p-JNK显著降低(均P<0.05)。结论过表达Trx-1可能通过抑制IRE1-JNK信号通路的激活发挥抗神经元凋亡作用,从而改善VD大鼠海马区损伤及认知能力。

解毒通利方对肺癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用及ASK1/JNK通路的调节作用

目的研究解毒通利方对肺癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用及对凋亡信号调节激酶(ASK)1/c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路的调节作用。方法采用接种NCI-H358细胞法建立肺癌荷瘤小鼠模型,小鼠随机分为生理盐水组、解毒通利方低、中、高剂量组及顺铂组各6只,解毒通利方低、中、高剂量组分别按照10、20、40 g/kg(以生药含量计)灌胃给予小鼠解毒通利方,顺铂组按照5 mg/kg腹腔注射给予顺铂,生理盐水组灌胃给予生理盐水,1次/d,连续30 d,末次给药24 h后,分离肿瘤组织,测定肿瘤体积及重量,苏木素-伊红(HE)染色法检查肿瘤组织病理学,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色测定肿瘤组织细胞凋亡率,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及Western印迹测定肿瘤组织ASK1、JNK mRNA及蛋白水平,免疫组化法测定肿瘤组织ASK1及JNK的平均积分光密度(IOD)值。结果与生理盐水组比较,解毒通利方低、中、高剂量组及顺铂组肿瘤体积及重量显著降低,而肿瘤组织细胞凋亡率、肿瘤组织ASK1及JNK mRNA及蛋白水平、肿瘤组织ASK1及JNK免疫组化水平均显著升高(均P<0.05),小鼠肿瘤组织病理学改变明显。结论解毒通利方能够显著抑制肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织生长,促进肿瘤细胞凋亡,其机制可能与调节ASK1/JNK通路有关。

白藜芦醇抑制JNK通路磷酸化对新生乳鼠全身炎症反应相关肺损伤的保护作用

目的研究RSV对LPS诱导的新生乳鼠全身炎症反应相关性急性肺损伤的保护作用和分子机制。方法将出生3日龄的C57BL/6J乳鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+RSV组(均n=20)。对照组予生理盐水20μL腹腔注射(3、4、5日龄);LPS组予20μL生理盐水腹腔注射(3、4日龄),再予LPS 5 mg/kg腹腔注射(5日龄)诱导全身炎症反应综合征;LPS+RSV组预先予RSV 50 mg/kg腹腔注射(3、4日龄),再予LPS 5 mg/kg腹腔注射(5日龄)诱导全身炎症反应综合征。处理后0~24 h内动态观察乳鼠生存率、乳鼠活力,酶联免疫吸附试验检测乳鼠血清TNF-α、IL-1β水平;苏木素-伊红染色观察各组小鼠肺组织病理变化,蛋白免疫印迹法检测肺组织内IL-1β、TNF-α以及p-JNK蛋白表达水平。结果与对照组比较,LPS组和LPS+RVS组血清TNF-α、IL-1β水平均升高,其中LPS+RVS组低于LPS组(P<0.05);LPS组和LPS+RVS组肺组织损伤病理学评分高于对照组,LPS+RVS组低于LPS组(P<0.05);LPS组和LPS+RVS组肺组织中TNF-α、IL-1β、p-JNK蛋白相对表达量高于对照组,LPS+RVS组低于LPS组(P<0.05)。结论RVS可通过减轻全身炎症反应以及抑制JNK通路活化对腹腔注射LPS诱导全身炎症反应综合征相关的乳鼠急性肺损伤起保护作用。