朱砂七药材中重金属残留和相关元素形态价态分析

目的探索朱砂七药材中重金属残留水平及其中存在的砷形态价态。方法采用微波消解法结合电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法对朱砂七中铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)、汞(Hg)、铜(Cu)5种重金属及相关元素进行测定,并对含量水平进行分析;另外采用高效液相联用电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)对一甲基砷(MMA)、二甲基砷(DMA)、亚砷酸(AsⅢ)、砷酸(AsⅤ)、砷甜菜碱(AsB)、砷胆碱(AsC)等已知6种砷形态价态进行研究。结果参照《中华人民共和国药典》(2020年版)对于植物药限量标准,10批次朱砂七药材中,除1批次药材中的Cd以外,其他元素均未超过限度规定,整体合格率较高。HPLC-ICP-MS研究结果表明,除1批次朱砂七药材检出痕量的AsV外,其他批次朱砂七药材中无机砷与有机砷均未检出。结论朱砂七药材中相关元素安全性较好,为朱砂七重金属及相关元素限量标准制定提供了数据支持,同时通过测定元素形态价态,为未来准确评价相关元素带来的安全性风险提供参考。

朱砂七化学成分及其体外细胞毒性、抗病毒活性研究

目的研究朱砂七Fallopia multiflora var.ciliinervis(Nakai)Yonekura&H.Ohashi化学成分及其体外细胞毒性、抗病毒活性。方法朱砂七75%乙醇提取物采用硅胶柱层析、半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用MTT法测定体外细胞毒活性,CCK-8法测定体外抗病毒活性。结果从中分离得到20个化合物,分别鉴定为3-acetyl-4,5-dimethoxy-benzoic acid(1)、没食子酸甲酯(2)、没食子酸(3)、对羟基苯甲醛(4)、原儿茶酸(5)、3,4-二羟基苯甲醛(6)、丁香酸(7)、4-羟基-3-甲氧基苯甲酸(8)、p-hydroxyphenethyl-O-β-D-glucoside(9)、2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-ethyl-O-β-D-glucoside(10)、反式-白藜芦醇(11)、顺式-白藜芦醇(12)、白藜芦醇-3-O-β-D-(2′-O-反式-肉桂酰基)-葡萄糖苷(13)、白藜芦醇-3-O-β-D-(2′-O-顺式-肉桂酰基)-葡萄糖苷(14)、白藜芦醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(15)、N-反式阿魏酰-3-甲氧基酪胺(16)、poke-weed cerebroside(17)、何首乌乙素(18)、9,10,13-三羟基十八烷酸(19)、正丁基-β-D-吡喃果糖苷(20)。化合物11对HCT116、SW620细胞的IC 50值分别为(30.87±2.7)、(56.11±0.49)μmol/L,化合物12对EV-A71病毒的抑制率为50.21%。结论化合物1为新天然产物,化合物9~10为首次从蓼科植物中分离得到,化合物8、12、14、17、19为首次从何首乌属植物中分离得到,化合物2、4~7、11、18为首次从该植物中分离得到。化合物11具有细胞毒性,化合物12具有抗病毒活性。

朱砂七抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的体外实验研究

目的研究朱砂七粗提物和总蒽醌体外对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)的抑制作用。方法运用HSV-Ⅰ,以非洲绿猴肾细胞(Vero)作为宿主细胞,通过三种给药方式观察感染病毒后的细胞变性反应(CPE),MTI比色法检测不同浓度朱砂七粗提物和总蒽醌对HSV-Ⅰ的直接杀灭、预防和阻止复制作用。结果朱砂七粗提物和总蒽醌能抑制HSV-Ⅰ病毒的复制,但无预防和直接杀灭作用,朱砂七粗提物抑制HSV-Ⅰ病毒复制IC50为0.031 5g/L,治疗指数(TI)为19.84;总蒽醌抑制HSV-Ⅰ病毒复制IC50为0.004 7 g/L,治疗指数(TI)为16.62。结论朱砂七粗提物和总蒽醌在体外具有明显的保护宿主细胞抵抗HSV-Ⅰ病毒复制的作用。

朱砂七多糖对雏鸡肠道组织发育的试验研究

植物多糖的提取一般多采用水提取法,此外,还有超声提取法、通过稀酸和稀碱浸提、乙醇浸提及热水浸提等,许多研究者陆续进行了在饲料中添加多糖的试验,发现大多植物多糖具有低毒和低耐药性,在抗病毒,并且抑制肿瘤的生长,改善机体免疫功能等方面均有重要作用,尤其是水溶性多糖。本文采用水煎法提取朱砂七多糖,探究该多糖对雏鸡肠道生长发育、肠黏膜的免疫功能以及肠壁组织IL-2分布的影响,为朱砂七资源的开发和综合利用提供依据。

朱砂七总蒽醌抗肿瘤的实验研究

目的:研究朱砂七总蒽醌的体内外抗肿瘤作用。方法:通过朱砂七总蒽醌对S180、和H22荷瘤小鼠瘤重的研究,观察朱砂七总蒽醌的体内抗肿瘤作用。应用MTT法检测朱砂七总蒽醌对HL-60细胞的生长抑制作用,Giemsa染色法从形态上观察朱砂七总蒽醌对HL-60细胞凋亡的影响。结果:朱砂七总蒽醌具有抑制小鼠肿瘤S180和H22的作用,抑制率在40%以上,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01);朱砂七总蒽醌能明显抑制HL-60细胞的增殖,半数抑制浓度(IC50)为3.2mg/mL;形态学观察显示朱砂七总蒽醌作用HL-60细胞后,可见典型的凋亡细胞的形态学特征。结论:朱砂七总蒽醌在体内对小鼠肿瘤S180和H22均有抑制作用;体外试验证实:能抑制HL-60细胞的增殖,诱导细胞凋亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。

朱砂七抑制流感病毒A的试验研究

目的:观察朱砂七中总蒽醌和朱砂七大黄素对流感病毒A的作用;方法:采用细胞培养技术,以利巴韦林和双黄连粉针为阳性对照药,观察以上两成分对流感病毒的作用;结果:朱砂七中总蒽醌无论治疗还是预防给药方式均有抗流感病毒作用(P<0.05),而朱砂七大黄素则无抗流感病毒作用(P>0.05),且朱砂七中总蒽醌的TCD50在治疗方式为5.3,在预防给药方式为5;结论:朱砂七中总蒽醌对流感病毒A有抑制作用。

朱砂七总蒽醌对S_(180)荷瘤小鼠凋亡基因表达的影响

[目的]观察朱砂七总蒽醌对S180荷瘤小鼠凋亡基因c-myc、Bcl-2和突变型p53表达的影响。[方法]建立S180荷瘤小鼠模型,分成4组:模型对照组,阳性对照环磷酰胺组和朱砂七总蒽醌大、小剂量组,灌胃给药第11天,取各组小鼠的瘤组织,采用实时定量PCR法检测各组小鼠肿瘤组织c-myc、Bcl-2和突变型p53基因的表达。[结果]朱砂七总蒽醌1.2 g/kg和0.3 g/kg剂量组c-myc、Bcl-2和突变型p53mRNA表达量较模型组均显著降低,与模型组比较有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。[结论]朱砂七总蒽醌对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用可能是通过下调小鼠S180瘤组织c-myc、Bcl-2和突变型p53mRNA的表达而实现的。

朱砂七总蒽醌对H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤作用和对糖代谢的影响

目的观察朱砂七总蒽醌对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用和对其糖代谢的影响。方法朱砂七总蒽醌(1.2、0.6、0.3 g/kg)灌胃给药,考察对小鼠肝癌H22的抑瘤作用,并检测各组小鼠血清中碱性磷酸酶(AKP)和乳酸脱氢酶(LDH)活性。运用RT-PCR及Western blot法检测大、小剂量组小鼠肿瘤组织突变型p53基因、蛋白的表达。结果朱砂七总蒽醌各剂量组对H22荷瘤小鼠的肿瘤生长抑制率分别为45.90%,43.77%和41.95%;各剂量组能明显降低荷瘤小鼠血清AKP和LDH酶活性,与荷瘤组相比,大剂量和中剂量组有显著统计学意义(P<0.01,P<0.05)。朱砂七总蒽醌1.2和0.3 g/kg剂量组突变型p53mRNA和蛋白表达量较模型组均显著降低,与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。结论朱砂七总蒽醌具有抑制H22荷瘤小鼠瘤组织生长的作用,影响荷瘤小鼠糖代谢可能是其抗肿瘤途径之一。

朱砂七多糖对雏鸡十二指肠组织形态的影响

通过在雏鸡饮水中每天添加低(0.3g/kg)、中(0.5g/kg)、高(0.7g/kg)剂量的朱砂七多糖(Polygonum cillinerve polysaccharide,PCP),运用常规组织学制片技术和染色方法分别观察了给药后7、14、21d鸡十二指肠的组织学特点,肠壁黏膜层上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocytes,IEL)、柱状上皮细胞间杯状细胞(goblet cells,GC)和肠壁结缔组织内肥大细胞(mast cells MC)的数量差异,研究了朱砂七多糖对雏鸡十二指肠组织形态的影响。结果表明,PCP可使雏鸡十二指肠的绒毛高度增加、隐窝深度降低、绒毛高度与隐窝深度比值加大;并可增加黏膜上皮内淋巴细胞和杯状细胞以及肠壁肥大细胞的数量,表明PCP具有促进雏鸡十二指肠组织发育及增强肠道黏膜免疫的作用。

高效液相色谱法同时测定朱砂七中5种成分的含量

目的建立HPLC法同时测定朱砂七中虎杖苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素和大黄素甲醚的含量。方法采用Agilent 5 TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为290 nm。结果虎杖苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黄素和大黄素甲醚分别在0.0185~0.7402、0.0023~0.0900、0.0368~1.4720、0.0290~1.1600、0.0158~0.6322μg与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.9991)。5种成分的平均加样回收率均在97.7%~103.0%,RSD均在1.5%~2.9%。结论该方法简便、准确,分离效果好,重复性好,可用于朱砂七的质量评价。

朱砂七多糖的抗氧化作用研究

[目的]考察朱砂七多糖的抗氧化作用。[方法]分别以Fenton反应、邻苯三酚自氧化反应为产生羟自由基(.OH)和超氧阴离子自由基(O2-)模型,模拟人体胃液为亚硝化反应的环境,用分光光度法测试反应体系中活性氧和亚硝胺类的生成情况。[结果]朱砂七多糖浓度为5 mg/ml时,O2-和.OH清除率最高,分别为63%和48%,此浓度下其对亚硝酸铵合成的阻断率为41.27%;当朱砂七多糖浓度为0.09 mg/ml时,其对亚硝酸盐的清除率最高,为67.03%。[结论]朱砂七多糖具有较强的抗氧化活性。

朱砂七粗多糖的提取及生物活性的研究

首次从朱砂七中提取粗多糖(PCCP),研究了PCCP对.OH自由基、O2-.自由基和DPPH.自由基的清除能力以及抗脂质过氧化能力,选用人肝癌细胞HepG2,经MTT染色法研究其体外抗肿瘤活性。结果显示,PC-CP的浓度在8.48 mg/mL时,对.OH、O2-.和DPPH.的清除率分别达到了52.3%、54.7%和38.3%;PCCP的浓度在8.48 mg/mL时,对脂质过氧化的抑制率达到了62.0%;PCCP的浓度在277.78μg/mL时,对人肝癌细胞HepG2的抑制率达到了42.6%,表明PCCP具有一定的体外抗氧化能力和体外抗肿瘤活性。

朱砂七及其提取物的抗炎作用研究

目的观察朱砂七及其提取物的抗炎作用。方法采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法、鸡蛋清致小鼠足跖肿胀法和醋酸致小鼠毛细血管通透性增高法制成炎症模型,观察朱砂七及朱砂七蒽醌对动物急性炎症的影响。结果朱砂七及其蒽醌对急性炎症渗出及白细胞总数的升高均有一定的抑制作用。结论 朱砂七及朱砂七蒽醌具有较好的抗炎作用。

超临界CO_2萃取朱砂七游离蒽醌的研究

以醋酸镁比色法测定游离蒽醌含量并以其作为评价指标,研究了超临界CO2萃取朱砂七游离蒽醌的提取工艺,探讨了萃取温度、萃取压力、萃取时间、夹带剂种类和用量、提取次数和浸泡对游离蒽醌得率的影响.结果表明,超临界萃取之前,用10 mL水浸泡朱砂七(200 mg)24h,萃取温度45℃,萃取压力35 MPa,静萃取时间35 min,夹带剂(无水乙醇)15 mL和动萃取时间30min,连续提取3次,游离蒽醌得率达3.98%,其中大黄素和大黄素甲醚分别为3.44%和0.38%.与超声法相比,超临界CO2提取工艺具有得率高、对环境友好和溶剂残留少等优点.

复方朱砂七汤治疗慢性胃炎180例

采用自拟复方朱砂七汤(朱砂七、太白来、红石耳、老龙皮、黄芪等)为主,辨证加减治疗慢性胃炎180例,总有效率95.6％。提示本方有健胃补脾、消积除满、清热解毒、理气活血作用。

酶法提取朱砂七中总大黄素的工艺

研究了酶解预处理法提取朱砂七中总大黄素的工艺,在单因素试验的基础上经过正交试验确定最佳酶处理提取参数为酶量10U.g-1,酶解温度45℃,酶解时间3 h和酶解液初始pH值4.0。在此优化条件下酶解预处理,与传统直接有机溶剂提取相比,总大黄素产率提高了近40%,工艺稳定可行。

超声波辅助法提取朱砂七鞣质的工艺

通过单因素实验及正交实验对超声波辅助法提取朱砂七鞣质的工艺条件进行优化。确定最佳提取条件为:乙醇体积分数60%、料液比1∶15(g∶mL)、提取温度70℃、提取时间50 min,在此条件下提取2次,提取率为2.00%。超声波辅助法提取朱砂七鞣质工艺简单、省时、节能、提取率高。

朱砂七质量标准研究

目的:建立朱砂七的质量标准。方法:建立朱砂七的薄层色谱定性方法,并对其主要成分大黄素进行定量控制,色谱条件为HypersilC18柱(4.6mm×250mm,5μm),甲醇-水-磷酸(85:15:0.01)为流动相,流速1.0ml.min-1,柱温30℃,检测波长254nm。结果:薄层鉴别检出虎杖苷,含量测定中大黄素峰与其它峰分离良好,在0.0226～0.2825μg范围内呈良好的线性关系,加样回收率为99.8%,RSD=1.8%(n=5)。结论:通过薄层色谱法对朱砂七进行鉴别,高效液相色谱法测定主成分大黄素的含量,建立朱砂七完善的质量标准,作为对朱砂七质量控制的依据。

朱砂七提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

分别提取朱砂七鞣质和朱砂七多糖,以对硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)为底物,考察朱砂七提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响。结果发现,两种提取物对α-葡萄糖苷酶均具有抑制作用,其中朱砂七鞣质的抑制作用较朱砂七多糖更强;朱砂七鞣质和朱砂七多糖对α-葡萄糖苷酶活性的最大抑制率分别为91.3%和41.18%,IC50值分别为1.6μg.mL-1和1.3μg.mL-1。朱砂七鞣质和朱砂七多糖对α-葡萄糖苷酶活性的抑制机理分别属于非竞争性抑制类型和综合性抑制类型。

朱砂七总蒽醌对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的研究朱砂七总蒽醌对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测朱砂七总蒽醌对SMMC-7721细胞生长的抑制作用,HE染色法和末端缺失原位标记(TUNEL)法观察朱砂七总蒽醌对SMMC-7721细胞凋亡的影响。结果朱砂七总蒽醌能明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖;HE染色和TUNEL法显示:朱砂七总蒽醌作用SMMC-7721细胞后,可见典型的凋亡细胞的形态学特征。结论朱砂七总蒽醌能抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导细胞调亡可能是其发挥抗肿瘤作用的机制之一。