朱红栓菌中两个吩噁嗪酮类生物碱的分离与鉴定

本文首次研究了采自广东省上川岛的野生朱红栓菌的化学成分。体外抗菌试验显示其甲醇粗提物对大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌和金黄葡萄球菌表现出有意义的抗菌活性。从该粗提物分离获得两个吩噁嗪酮类生物碱,通过波谱分析分别鉴定为朱红菌素(1)和朱红栓菌素(2)。

马钱子经朱红栓菌发酵前后毒性及镇痛、抗炎作用的实验研究

目的利用药用朱红栓菌发酵剧毒中药马钱子,使之毒性下降而镇痛和抗炎作用不受影响。方法选用菌丝生长旺盛、对马钱子药材适应性较强的药用真菌之一的朱红栓菌,在一定条件下对马钱子进行固态发酵炮制;以马钱子生品(SSRM)对照,观察发酵后的马钱子菌质(SSFS)对小鼠i.g.急性毒性(LD50)的变化情况,并比较它们对醋酸腹腔刺激所致小鼠扭体的抑制(镇痛)作用和对巴豆油所致鼠耳肿胀的减轻(抗炎)作用。结果SSFS的LD50为119.1 mg/kg,与SSRM的LD50为91.8 mg/kg相比,前者的LD50上升率为29.7%。与空白模型组相比,SSFS各剂量组和SSRM组均有不同程度的镇痛和抗炎作用(P<0.05或P<0.01);但与SSRM组相比,SSFS各剂量组对腹注醋酸引起小鼠扭体次数的抑制作用和对巴豆油引起鼠耳肿胀程度的减轻作用均未见明显改变。结论马钱子经朱红栓菌发酵后毒性明显降低,但发酵品的镇痛作用和抗炎作用与生品没有根本区别,提示利用发酵手段可达到对有毒药材马钱子"去毒"与"存效"并重的目的。

朱红栓菌原生质体制备与再生的研究

将2016年7月在黑龙江省凉水国家级自然保护区采集的朱红栓菌Trametes cinnabarina子实体接种于PDA固体培养基平皿中,30℃下培养7 d,截取菌丝体接种于液体培养基中用于原生质体制备与再生实验。通过单因素试验和正交试验,研究酶解温度、酶解时间、菌丝质量分数、酶配比对原生质体制备的影响。结果表明,以0.6 mol·L-1甘露醇溶液作为高渗缓冲液,复合酶组成为1.5%溶壁酶﹢1.0%纤维素酶﹢1.0%蜗牛酶,菌丝质量分数为20%,30℃条件下酶解3.5 h为朱红栓菌原生质体制备的最适条件,产量达1.00×107个·m L-1;以0.6 mol·L-1蔗糖溶液作为再生高渗缓冲液,原生质体再生率最高达20.6%。

朱红栓菌培养条件初探

采用锯木屑、棉子壳为主料,麸皮、玉米芯、豆粕粉等为辅料进行朱红栓菌人工栽培培养的初步试验。结果表明,麸皮培养基最适合朱红栓菌母种生长,培养温度25℃。固体原种配方木屑70%,麸皮24%,豆饼粉4%,石膏粉1%,磷酸二氢钾0.1%,硫酸镁0.05%,糖1%,培养料含水量68%,p H为7.0时较好,菌丝生长速度快、长势均匀。人工栽培,栽培料配方为木屑70%,麸皮24%,豆饼粉4%,石膏粉1%,磷酸二氢钾0.1%,硫酸镁0.05%,菌丝体及子实体生长均较好。

朱红栓菌菌丝体的化学成分研究

目的:明确朱红栓菌菌丝体的主要化学成分。方法:通过100 L发酵罐发酵培养朱红栓菌菌丝体,烘干粉碎后用乙酸乙酯提取,提取物采用硅胶和凝胶等柱色谱方法进行分离纯化,获得的单体化合物利用核磁共振波谱、质谱等技术进行结构鉴定。结果:从朱红栓菌菌丝体的乙酸乙酯提取物共分离纯化得到11个化合物,分别是1,3-二油酰甘油酯(1)、α,α'-双棕榈酰甘油酯(2)、麦角甾醇(3)、邻苯二甲酸二丁酯(4)、啤酒甾醇(5)、阿拉伯糖醇(6)、桦褐孔菌二糖(7)、尿嘧啶(8)、金雀异黄酮(9)、琥珀酸(10)、油酸(11)。结论:以上化合物均为首次从朱红栓菌菌丝体中分离得到。

朱红栓菌发酵工艺优化研究

本文通过朱红栓菌不同碳源、氮源的培养基,及其不同浓度比的碳氮源培养基,以及在不同培养条件下的干重菌丝量研究最适碳源、氮源、碳氮源浓度和最佳发酵条件,从而为大规模生产提供技术依据。

朱红栓菌提取物抗氧化、抗肿瘤活性评价及相关化学成分分析

采用石油醚、乙酸乙酯、乙醇浸提朱红栓菌Trametes cinnabarina子实体干粉,得到不同极性提取物;采用清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基能力,测定提取物的体外抗氧化活性;MTT法检测提取物对人肝癌细胞株Hep G2细胞增殖的抑制作用。结果表明,朱红栓菌石油醚、乙酸乙酯、乙醇提取物均具有一定的抗氧化、抗肿瘤活性;各提取物在浓度为4–5mg/m L时,对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基清除能力大小依次为乙酸乙酯提取物>乙醇提取物>石油醚提取物;乙酸乙酯提取物对3种自由基的最高清除率分别为60.23%、74.49%、63.84%。各提取物对人肝癌细胞株Hep G2细胞增殖抑制作用大小依次为乙酸乙酯提取物>乙醇提取物>石油醚提取物;乙酸乙酯提取物的抑制率最高达55.93%。采用硅胶和凝胶等柱色谱方法结合核磁、波谱和质谱等技术对乙酸乙酯提取物的化学组分进行分析,共分离纯化出11种化合物,分别鉴定为:麦角甾醇(1),邻苯二甲酸二丁酯(2),对羟基苯甲酸甲酯(3),麦角甾-7,22,二烯-3-酮(4),1-[(12E,16E)-12,16-二十碳二烯酰基]-2-[(E,E)-7,11-十八碳二烯酰基]-3-硬脂酰基甘油(5),cinnabarin(6),过氧麦角甾醇(7),尿嘧啶(8),甘露醇(9),腺嘌呤核苷(10),豆甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇(11)。除化合物6外均为首次从朱红栓菌子实体中分离得到。研究结果为开发利用朱红栓菌子实体提供了科学依据。

三种白腐菌及其组合菌种木质素降解酶比较研究

朱红栓菌Trametes cinnabarina、糙皮侧耳Pleurotus ostreatus、黄孢原毛平革菌Phanerochaete chrysosporium是产生木质素降解酶能力强的菌株。对三种白腐菌及其组合菌种产生木质素降解酶能力和行为进行了比较分析和研究。结果表明,最佳培养方式为液体振荡培养;最佳培养基为酵母膏液体培养基。在产漆酶(laccases,lacs)方面,Pleurotus ostreatus和Phanerochaete chrysosporium的组合菌种的酶活最强,在第6天出现峰值,酶活达到450U/L;在产锰过氧化物酶(manganese peroxidases,mnps)方面,Trametes cinnabarina和Pleurotus ostreatus的组合菌种的酶活最强,在第10天出现峰值,酶活达到1050U/L;在产木质素过氧化物酶(lignin peroxidases,lips)方面,Trametes cinnabarina和Phanerochaete chrysosporium的组合菌种的酶活最强,在第8天出现产酶峰值,酶活达到2990U/L。筛选结果表明,组合菌种比单菌种产生的三种主要木质素降解酶的活性强,这为白腐菌高效产酶提供了一条新的途径,并为白腐菌研究领域的后续工作奠定基础。

马钱子发酵品中生物碱化学成分研究

目的研究马钱子经朱红栓菌固体发酵产物(发酵品)的生物碱成分。方法采用溶剂提取、硅胶柱色谱等方法对马钱子发酵品的生物碱成分进行分离纯化,根据化合物的理化常数和波谱数据鉴定其结构。结果从马钱子发酵品中共分离得到10个生物碱成分,分别鉴定为士的宁(1)、马钱子碱(2)、伪士的宁(3)、16-甲氧基士的宁(4)、番木鳖次碱(5)、士的宁氮氧化物(6)、马钱子碱氮氧化物(7)、士的宁氯甲氯化物(8)、马钱子碱氯甲氯化物(9)和喜树次碱(10)。结论马钱子发酵品的大部分化学成分仍然是吲哚类生物碱,其中仅有10是单萜吡啶生物碱,为首次从该种植物中分离得到;化合物4是首次从该植物的种子中分离得到;化合物8和9可能为氯仿提取过程中产生的人工加合物。迄今未见朱红栓菌中含有上述生物碱的报道。与生品相比,马钱子发酵品中生物碱成分发生了一定的变化,其中化合物4、6、7和10可能为发酵品新增成分,这些生物碱成分的鉴定为马钱子发酵"去毒存效"原理提供了理论依据。