杜氏利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体的比较蛋白质组学分析

目的应用蛋白质组学技术分析杜氏利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体蛋白质表达状况。方法分别提取和纯化杜氏利什曼原虫四川SC6株前鞭毛体与纯培养无鞭毛体的总蛋白,分别经pH3～10的预制胶条进行双向电泳分离,凝胶用考马斯亮蓝染色,凝胶图像以PDQuest1.0软件分析,并对主要差异表达蛋白点用电喷雾质谱法进行鉴定。结果等量的前鞭毛体与纯培养的无鞭毛体总蛋白经双向电泳分离后均可获近700个蛋白点,其中超过90%的蛋白点的分布和相对强度基本一致。与前鞭毛体比较,6个蛋白点在无鞭毛体蛋白中明显高表达,3个蛋白点低表达。6个明显高表达的蛋白点中有5个为已知功能蛋白,分别为Reiske铁硫蛋白前体、α微管蛋白、过氧化物酶1、二氢硫辛酰胺乙酰转移酶前体和甘露糖-1-磷酸瓜氨酸转移酶;3个低表达的蛋白点中有2个为已知功能蛋白,分别为热休克蛋白70和β微管蛋白。这些差异调节表达蛋白与碳水化合物/能量代谢,应激反应,细胞膜和细胞骨架形成相关。结论前鞭毛体与无鞭毛体蛋白质的表达存在差异。

双氢青蒿素对杜氏利什曼原虫前鞭毛体作用体外实验研究

观察双氢青蒿素在不同浓度、不同时间对杜氏利什曼原虫（Ｌ．ｄ）汶川株及Ｌ．ｄ山东株前鞭毛体的体外作用。采用镜下观察及胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入试验。结果：（１）镜下观察：实验组３个不同浓度（１４．１×１０－４ｍｏｌ／Ｌ、７．１×１０－４ｍｏｌ／Ｌ、３．５３×１０－４ｍｏｌ／Ｌ）的药物作用４８ｈ后，培养基颜色未变（红），虫体活动变慢以至几乎不动，虫数减少，抑制率升高（Ｌ．ｄ汶川株的抑制率由７３％升至８６％，Ｌ．ｄ山东株由６９．４％升至９７．５％），染色后见虫体变形，核、动基体不完整，胞质内出现多个空泡，鞭毛脱落。对照组的培养基颜色变黄，虫体活跃，大部分呈长梭形，并排成菊花状。染色后虫体呈长梭形，核、动基体、鞭毛、胞膜完整、清晰。（２）３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验：双氢青蒿素在３．５３×１０－４ｍｏｌ／Ｌ２４ｈ即对两株有抑制作用（Ｌ．ｄ汶川株抑制率６５．８％，山东株为９３．４％）。但随着药物浓度的升高，作用时间的延长，抑制作用没有明显变化（Ｐ＞０．０５）。对Ｌ．ｄ山东株的抑制作用较Ｌ．ｄ汶川株为强。本文为首次报道双氢青蒿素对杜氏利什曼原虫具有较强的体外抑制作用。

海藻酸钠两性霉素B对杜氏利什曼原虫前鞭毛体作用体外实验研究

目的 治疗犬利什曼病 ,消灭保虫宿主 ,达到预防黑热病的目的。方法 观察海藻酸钠两性霉素B在不同浓度对杜氏利什曼原虫 (L d)江苏株及L d四川人株前鞭毛体的体外作用。采用显微镜下观察试验。结果 实验组 3个不同浓度 ( 10 μg/ml、 5 μg/ml、 12 μg/ml)的药物作用 48h后 ,培养基颜色未变 (红 ) ,虫体活动变慢 ,虫数减少 ,抑制率升高 (L d江苏株的抑制率由 70 %升至 93% ,L d四川人株由 82 %升至 96 % )。染色后见虫体变形 ,核、动基体不完整 ,胞质内出现多个空泡 ,鞭毛脱落。对照组的培养基颜色变黄 ,虫体运动活跃 ,大部分呈长梭形 ,并排成菊花状。染色后虫体呈长梭形 ,核、动基体、胞膜及鞭毛完整、清晰。结论 海藻酸钠两性霉素B对杜氏利什曼原虫有较强的体外抑制作用。

酸碱度对不同来源杜氏利什曼原虫前鞭毛体生长情况的影响

酸碱度对杜氏利什曼原虫鞭毛体 (以下简称鞭毛体 )生长情况的影响 ,前人做过许多实验 ,但对不同来源鞭毛体生长情况的对比观查 ,尚未见报道。本文阐述了酸碱度对不同来源鞭毛体生长情况的影响。值得注意的是在 pH值 4 6 ,8 6时 ,鞭毛体的生长受到抑制 ,以球型形态多见。鞭毛体是利什曼原虫的体外培养形态 ,了解酸碱度对鞭毛体生长情况的影响 ,尤其是对抗锑种株生长情况的影响 ,进一步了解鞭毛体在体外培养时的生长特性及各种株间的生长差异 ,为黑热病的防治提供一些基础资料。

利什曼原虫前鞭毛体体外生长动力学研究

目的观察不同种株利什曼原虫前鞭毛体在体外培养条件下的生长增殖情况,确定其最适体外培养条件。方法分别使用RPMI1640和M199复合培养液,观察温度、pH及新生小牛血清对硕大利什曼原虫、热带利什曼原虫、婴儿利什曼原虫、墨西哥利什曼原虫、杜氏利什曼原虫前鞭毛体体外增殖速度与增殖周期的影响。结果当培养温度为26℃时,杜氏利什曼原虫前鞭毛体在含和不含新生小牛血清、pH中性、偏碱和偏酸的PMI1640或M199复合培养基中,早期均能生长,且生长周期相对较长,其他种株利什曼原虫前鞭毛体在无血清或偏碱培养基中生长缓慢,增殖周期缩短;培养温度为37℃时,各种株利什曼原虫前鞭毛体均发生沉积,增殖停滞,不同程度地向无鞭毛体转化并发生死亡。结论使用复合培养液培养利什曼原虫前鞭毛体,温度、pH和新生小牛血清均可显著影响增殖速度和生长周期。各种株利什曼原虫前鞭毛体在相同培养条件下增殖速度和生长周期存在差异,可能与其遗传背景不同有关。

杜氏利什曼原虫前鞭毛体三种不同染色方法的比较

黑热病的主要诊断依据是检出患者体内存在无鞭毛体,但有时由于所得的材料含虫量较少,骨髓等涂片检查往往为阴性,给诊断带来一定困难。为提高病原体检出率和诊断率,常采用体外培养法培养出前鞭毛体后再进行涂片,染色。所以杜氏利什曼原虫前鞭毛体标本是人体寄生虫学实验课程中必须观察的重点内容。杜氏利什曼原虫前鞭毛体标本通常用姬氏染色,鞭毛着色需要较长时间,课上操作费时。本文比较了3种不同的染色方法,其介绍如下。

恰氏利什曼原虫毒性株及减毒株前鞭毛体GP63 mRNA稳定性的调控

通常,利什曼原虫属表面都表达一种分子量为63 kDa的糖蛋白。该蛋白与原虫毒力及前鞭毛体感染宿主的起始阶段有关。恰氏利什曼原虫(L.chagasi,L.c.)至少有18种编码GP63的基因,称为主要蛋白酶(msp)基因。根据基因3′端非翻译序列及表达水平的差异性可将之分为 3类:mspL、mspS、mspC。作者研究了msp mRNA稳定性的调控机制。

哈密沙虎体内蜥蜴利什曼原虫前鞭毛体的超微结构观察

对内蒙古额济纳旗从哈密沙虎（Ｔｅｒａｔｏｓｃｉｎｃｕｓｐｒｚｅｗａｌｓｋｉｉ）肝组织内培养分离的蜥蜴利什曼原虫前鞭毛体进行了超微结构观察。前鞭毛体多为柳叶状，其膜下微管数平均为５７±８（４７～８２），微管直径为２４ｎｍ，微管间距为１８～２２ｎｍ，质膜厚度为７～８ｎｍ。该原虫的膜下微管数和微管间距均较Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａａｇａｍａｅ和Ｌ．ａｄｌｅｒｉ两种蜥蜴利什曼原虫为少和窄。线粒体发达，在胞质内可见到内质网和高尔基体。在鞭毛基体上方有基板１和基板２．

沙鼠利什曼原虫前鞭毛体蛋白质组成与抗原特性的分析

对沙鼠利什曼原虫及其他5种寄生于人体内常见的利什曼原虫(杜氏利什曼原虫、大型利什曼原虫、热带利什曼原虫、墨西哥利什曼原虫及巴西利什曼原虫)前鞭毛体的可溶性抗原进行SDS-PAGE,并用抗沙鼠利什曼原虫免疫兔血清进行免疫印渍。结果表明:尽管沙鼠利什曼原虫与其它人体利什曼原虫间的蛋白质及抗原组成存在广泛交叉,但也存在明显差异。于沙鼠利什曼原虫中65KD、33KD及31.5KD蛋白质含量较丰富,并寻找到68KD、65KD、43KD及33KD4条种特异性抗原成分,从生化特性上进一步说明了该原虫是一种独立的虫种。

克拉玛依地区的利什曼病Ⅶ.大沙鼠体内利什曼原虫前鞭毛体的超微结构观察

在新疆克拉玛依小拐农场,从大沙鼠耳组织内查见的利什曼原虫,经NNN基培养11天,对原虫的前鞭毛体作超微结构观察。前鞭毛体多为柳叶状。其膜下微管数平均为80±9(68～111)个,微管直径为24nm,间距为15～28nm,质膜厚度为8nm,与吴传芬等和王捷等报道的甘肃沙鼠利什曼原虫的前鞭毛体有明显差别;在胞质内广泛分布着内质网,线粒体发达,高尔基体常见于线粒体一动基体复合体附近。在鞭毛基体上部有基板1和基板2。在胞质内还可看到脂滴和空泡。

金黄仓鼠实验感染杜氏利什曼原虫的观察

经连续培养传代5次后的杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani),人工感染金黄仓鼠,观察不同数量的前鞭毛体及不同接种方法对金黄仓鼠的易感性。材料与方法一、动物:金黄仓鼠,体重5.5g/只,分6组,每组6只,♀♂各半。由上海计划生育研究所提供。

杜氏利什曼原虫人工感染家犬血清中IgG动态观察

本文采用杜氏利什曼原虫四川人分离株前出毛体人工感染家犬１１只，按不同感染剂量（１×１０４～１×１０８／只）分组并设未感染对照犬２只，骨髓涂片法感染组均查见利什曼原虫无鞭毛体，感染成功。感染前犬血清ＩｇＧ含量均数为１２６．５９Ｉｕ／ｍｌ，１５周时达１９２．５４Ｉｕ／ｍｌ，（Ｐ＜０．０５）。说明本试验人工感染Ｌ．ｄ前毛体导致了犬ＩｇＧ的上升。

新疆不同地区杜氏利什曼原虫抗原制备及应用研究

目的用从新疆不同地区分离得到的利什曼原虫前鞭毛体提取抗原,观察ELISA法检测黑热病病人和疫区健康人血清抗体时的敏感性和特异性,为制备ELISA诊断试剂盒和进一步提高这种检测方法的敏感性和特异性,提高黑热病现场流行病学调查结果的准确性和可靠性提供实验依据。方法(1)抗原提取:收集新疆不同地区分离得到的利什曼原虫前鞭毛体,常规方法提取抗原,滴定出抗原工作浓度。(2)检测:用提取的3株抗原,测定黑热病病人和疫区健康人血清抗体。结果3株抗原检测24份肺结核病人血清,均为阴性;3株抗原分别检测60份非疫区健康人血清801株和951株的检测结果均为阴性,901株检测出1份阳性(临界值);3株抗原分别检测131份黑热病病人血清,阳性率分别为:901株(80.9%)、801株(92.3%)、951株(89.9%)。801株明显高于901株。3株抗原分别检测334份疫区健康人血清,901株(10.5%)明显高于801株(6.0%)和951株(5.1%),有显著差异。按不同地区人群阳性率比较,3株抗原检测巴楚县人群阳性率有显著差异,901株(18.8%)与951株(8.5%)有显著差异,乌什县人群阳性率无显著差异;按不同年龄组的人群阳性率比较,3株抗原在每个年龄组的阳性率无显著差异。结论利什曼原虫前鞭毛体抗原有较好的稳定性,耐热性极好;901株、801株抗原的敏感性、特异性较好,可做为新疆血清流行病学调查所用的抗原株;801株的特异性更好,可用于黑热病的特异性抗体的检测及研究。

四川汶川的杜氏利什曼原虫人及犬分离株培养观察

本文报道了从四川汶川地区分离的两株杜氏利什曼原虫(人分离株和犬分离株)前鞭毛体在培养中的生物学特征。犬株的生长迟缓期较长,为6～7天,人株仅2天。人株和犬株前鞭毛体达到增殖高峰的时间分别在培养6天和10天。人株梭状前鞭毛体大小(长×宽)为6.68～10.02×1.17～1.84μm(平均8.77×1.59μm),成熟前鞭毛体为11.69～18.37×1.17～1.67μm(平均14.41×1.59μm)。犬株梭状前鞭毛体为8.35～11.69×1.67～2.00μm(平均10.25×1.93μm),成熟前鞭毛体为13.36～21.71×1.50～2.17μm(平均15.97×1.85μm)。两株原虫前鞭毛体的大小差异有显著的统计学意义,两者的生长曲线亦有差别。

都兰利什曼原虫(Leishmania turanica)在我国的发现和研究

1984年,新疆克拉玛依地区发现有酷似皮肤利什曼病的皮肤病患者,继而在当地一农场捕获的三种白蛉体内查见有前鞭毛体的自然感染,但感染来源不明。1988年。

RT-PCR检测亚马孙利什曼原虫P-4和GP-46基因表达

目的证明亚马孙利什曼原虫前鞭毛体和无鞭毛体的基因表达水平。方法用RNA分离试剂盒,分别提取3种不同来源的无鞭毛体(由小鼠模型皮损组织获得的无鞭毛体、由前鞭毛体培养转化而来的无鞭毛体,以及来自J774.G8巨噬细胞株的无鞭毛体)的总RNA,以及前鞭毛体总RNA,然后用SuperScripⅡ逆转录聚合酶将其逆转录为cD-NA,再经PCR扩增无鞭毛体特异核酸酶(P-4)和前鞭毛体特异膜糖蛋白(GP-46)的特异片段,经1.5%琼脂糖凝胶电泳分析。结果3种不同来源的无鞭毛体均观察到P-4特异性条带(273bp),且密度相似,但在前鞭毛体中未观察到;在前鞭毛体中观察到高表达的GP-46特异性条带(325bp),但在3种无鞭毛体中弱表达。结论由前鞭毛体转化的无鞭毛体能高水平表达亚马孙利什曼原虫无鞭毛体P-4特异基因,可为其生物化学及免疫学研究提供无鞭毛体来源。

田鼠脾内接种原鞭毛体后利什曼原虫向各器官的散布

试验用的利什曼原虫有以色列的热带利什曼(LT)、以色列大砂鼠的利什曼(LM)、印度黑热病患者的杜氏利什曼(LD)及埃塞俄比亚弥漫性皮肤利什曼病的利什曼(LE)等4株。以洛克氏血琼脂培养基中生长的原鞭毛体3×10~6～4×10~6(0.1毫升)

利什曼原虫与巨噬细胞的相互作用及相关抗原

本文对利什曼原虫前鞭毛体表面的巨噬细胞相关抗原的性质、结构、分布状况、种内差异作了综述。并也论及在血清调理和非血清调理环境下,此种抗原与巨噬细胞表面相关受体的作用关系。阐明了利什曼原虫入侵哺乳动物巨噬细胞是确定原虫胞内寄生生活的基础。