比较机械分离法和组合酶消化法分离大鼠生精细胞的差异

目的:采用机械分离法和组合酶消化法分离大鼠生精细胞,比较两者在细胞数量、细胞纯度及存活率等方面的优劣。方法:实验于2007-03/05在广东省人民医院医学研究中心进行。分别采用机械分离法和组合酶消化法分离成年SD大鼠睾丸生精细胞,即机械分离法采用锐性分离结合筛网过滤,依次将间质细胞、血细胞剔除,经过滤筛选后,获得较为纯净的生精细胞,最后经差速贴壁法获得纯度较高的生精细胞。组合酶消化法采用胶原酶和胰酶消化相结合的方法,首先用胶原酶Ⅳ将间质细胞分离出来,经胰酶消化后获得单细胞的生精细胞悬液。分析比较两者所得细胞总数及细胞纯度的差异,并检测分离培养前后细胞存活率的变化。结果:组合酶消化法分离的生精细胞数量与机械分离法相当,两者比较差异无显著性意义(P>0.05)。但机械分离法所得生精细胞的纯度高于组合酶消化法,并且分离培养前后细胞存活率也明显高于组合酶消化法,两两比较差异均有显著性意义(P<0.05)机械分离法所得生精细胞悬液中以支持细胞混杂为主,而组合酶消化法则混杂较多支持细胞和间质细胞。结论:机械分离法分离生精细胞纯度高、细胞存活率高及费用低,是一种简单、经济、有效的生精细胞分离方法。

机械分离法制备脂肪来源血管基质混合物修复大鼠膝关节软骨缺损

[目的]探究采用机械分离法制备自体脂肪组织来源的血管基质混合物(stromal vascular fraction,SVF)修复SD大鼠膝关节软骨缺损的可行性。[方法]从2周龄大鼠腹股沟部获取脂肪组织,采用机械分离法制备SVF。在36只8周龄大鼠右侧膝关节股骨滑车中央处建立直径2 mm全层软骨缺损模型,将其随机分为3组,每组12只大鼠。按照软骨缺损的处理,分为空白对照组(BC):缺损处旷置;纤维蛋白胶组(FG):缺损处植入纤维蛋白胶;SVF+纤维蛋白胶组(SVFF):缺损处植入SVF+纤维蛋白胶。术后6、12周取材,参考国际软骨修复协会软骨修复大体评分标准评价标本修复情况;标本切片后进行HE染色、天狼猩红染色,参考Wakitani评分系统评价标本修复情况。[结果]标本大体观察显示,SVFF组软骨修复效果明显优于其他两组,大体评分高于其他两组,且差异有统计学意义(P<0.05)。组织学分析显示,SVFF组缺损区修复组织以透明软骨为主,而BC和FG组缺损区修复组织以纤维组织为主,SVFF组组织学评分高于其他两组且差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]采用机械分离法制备的脂肪来源血管基质混合物可用于修复大鼠膝关节软骨缺损,是一种较有应用前景的修复关节软骨缺损的方法。

基于盲分离技术的机械噪声分离法的研究

基于互信息最小原理,详细推导了自然梯度法的盲信号处理的计算方法,并通过一个仿真实例说明运用该方法对噪音分离的可行性,从而为机械设备的故障诊断和监测提供了一个新的方法。

机械分离与胰酶消化分离对长期培养的神经干细胞神经发生能力的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）培养的分离传代技术及其在长期培养条件下的神经发生能力。方法取孕14d的Wistar胎鼠大脑皮层，消化分离后，以1×10^5／ml浓度进行NSCs原代培养。分别采用机械分离与胰酶消化法进行NSCs传代培养，台盼蓝活细胞计数测定分离后细胞存活率，计算细胞倍增时间和细胞增殖率。取第4、8、12、20、30代机械分离传代培养的NSCs球接种到24孔培养板中的盖玻片上，加入分化培养液，观察长期培养条件下NSCs的神经发生能力的变化。结果与胰酶消化法进行的NSCs球传代相比，机械分离的NSCs球为小细胞球和单细胞传代，传代后细胞存活率高，细胞倍增时间短，增殖能力强（P均〈0．05）。体外长期培养条件下，随着培养时间的延长，NSCs分化为神经元的比例逐渐降低，星形胶质细胞的比例逐渐增高；在4—12代NSCs分化为神经元的能力表现出下降的趋势，但仍较为稳定；12代后，神经元的分化比例迅速下降，星形胶质细胞的比例迅速上升。结论与胰酶消化法相比，逐步减小吸管口径的机械分离传代法，减少了传代对细胞的损伤，保证了大部分细胞间连接的完整性，显著增强了NSCs的增殖能力。体外长期扩增的NSCs，由于微环境和（或）自身基因的调控，随着传代的延续，其神经发生能力逐渐降低，分化为神经元的比例逐渐减少，分化为星形胶质细胞的比例逐渐增加。

大鼠海马神经元急性分离法

作者设计和使用的海马神经元细胞分离法是一种结合酶消化和机械分离的方法 ,既不损伤神经元的形态 ,又保留了神经元细胞膜的电学特征。形态上有差异的细胞易于分辨。用内面向外式膜片钳和全细胞膜片钳技术证实 ,约 95

分离培养骨巨细胞瘤破骨样细胞的方法学研究

本文通过组织块贴壁法、机械分离法和酶消化法对骨巨细胞瘤的破骨样细胞进行分离、培养。通过比较，结果显示：酶消化法提纯程度最高，收获量较多；机械分离法居中，但操作简单，对原位杂交、免疫组织化学和骨吸收功能检测具有一定的应用价值；组织块培养法需要时间长，各细胞成分混杂，对研究各细胞成分之间的关系。

诱导法与机械法体外培养破骨细胞的比较研究

目的探讨不同方法培养的破骨细胞(OC)在形态学及骨吸收功能的差异,为体外培养OC提供方法学实验依据.方法采用机械分离的方法,即从1 d龄SD大鼠四肢长骨机械分离获得成熟OC;诱导法,即利用RANKL(100 ng/mL)和M-CSF(100 ng/mL)诱导RAW264.7细胞形成破骨样细胞(OLC).对获得的OC和OLC进行形态学和骨吸收功能观察比较.结果 OC和OLC均为TRAP染色阳性的多核巨细胞,与细胞共培养骨片上可形成骨吸收陷窝;与机械分离法比较,诱导法培养出的OLC数目较多,但骨吸收陷窝较小而浅.结论直接分离培养法可获得骨吸收功能较活跃的OC,但数目较少,适合骨吸收功能分析、破骨迁移黏附、凋亡研究及单细胞分子生物学研究.诱导形成的OLC数量较多,但骨吸收功能较差,适合用于OC分化发育过程的研究.

人脑胶质瘤细胞两种分离方法的对比研究

目的对比人脑胶质瘤细胞的分离纯化方法,并观察其形态学特征。方法取术后人脑胶质瘤新鲜组织,采用冷胰酶消化法和机械分离法分离后结合速差贴壁法纯化处理进行原代培养。采用吉姆萨染色对培养细胞进行形态学观察。结果在细胞产量方面冷胰酶消化法优于机械分离法。结论采用冷胰酶消化法,可以显著降低胰酶对人脑胶质瘤细胞的损害,是可靠的人脑胶质瘤细胞的分离纯化方法。

铜和塑料分离设备的设计

铜是工业生产中的一种重要材料,但是世界上的铜资源有限,因此,对于废铜的回收利用至关重要。铜米机就是现代生产中解决废铜回收利用的一种重要工具,它是用于对废旧铜线粉碎将铜和塑料分离的机械。

神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤

背景:近年来,神经干细胞移植已成为治疗神经退行性疾病和中枢神经系统损伤的研究热点。目的:探讨神经干细的定向分化调控机制和神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的研究进展。方法:以"neural stem cells,stem cell transplantation,ischemic brain injury"为检索词,检索Pubmed数据库1990至2012年相关文献;以"神经干细胞,干细胞移植,缺血性脑损伤"为检索词,检索CNKI数据库2005至2012年相关文献。分析神经干细的定向分化调控机制和神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤的内容,排除重复研究。结果与结论:①体外分离培养的神经干细胞有胚胎来源、脐血来源和成体来源,主要采用机械分离法和胰酶消化法进行分离。②目前体外培养的神经干细胞分离鉴定的标记物有巢蛋白、波形蛋白1、5-溴脱氧尿嘧啶核苷、神经元特异性烯醇化酶等。③神经干细胞的分化调节是通过正负双重作用实现的,负性调节是通过对称性的分裂来增加神经干细胞数量,包括Notch信号途径和一些生长因子等。正性调节诱导神经干细胞分化,包括参与细胞合成的骨形态发生蛋白信号途径等。④神经干细胞移植的时间窗选择在实验动物脑缺血两三周后,时间过早和过晚均不适合细胞的存活。神经干细胞通过脑立体定位仪直接进行脑内移植治疗大鼠局灶性脑缺血损伤,移植后可见细胞在局灶性脑缺血大鼠脑室内和梗死中心均可长期存活,并可广泛迁移,移植神经干细胞后观察到其运动行为学评分有明显提高。缺血性脑卒中的神经干细胞移植治疗还存在一些问题需要解决,未来的临床应用前景广阔,是缺血性脑卒中患者的新希望。

油烟污染及其排放控制技术

介绍了烹调油烟的组成、分析方法和主要危害,阐述了各类油烟净化技术的特点,分析了油烟净化的国内外研究动态,指出催化燃烧技术是油烟污染控制技术的发展趋势。

影响喉癌组织原代培养成功率因素的研究

目的研究不同组织分离方法、肿瘤TNM分期、细胞分化程度等因素对喉癌组织原代培养细胞生长率的影响。方法对17例喉癌组织分别应用组织块、胶原酶和机械分离法进行原代培养,观察以上3种组织分离法、肿瘤细胞分化程度以及TNM分期对喉癌原代培养细胞生长情况的影响,并用统计学分析其结果。结果组织块、胶原酶及机械分离法的细胞生长率分别为64.7%、58.8%和11.8%,其中组织块法和胶原酶法比较差异无统计学意义(P=1.000),而织块法和胶原酶法与机械分离法比较差异均有统计学意义(P=0.004和0.008)。鳞癌细胞高分化组细胞生长率为33.3%,中/低分化组为90.9%,2组比较差异有统计学意义(P=0.028)。结论细胞培养的生长率与肿瘤组织的分化程度和组织分离方法有关。在喉癌的原代培养中应尽量选取细胞分化程度差的标本并且选用组织块分离法进行培养。

不同浓度补肾健脾方对卵巢颗粒细胞增殖作用的影响

目的:观察不同浓度补肾健脾方含药血清对原代培养的卵巢颗粒细胞增殖作用的影响以及不同浓度补肾健脾方对小鼠卵巢组织卵泡颗粒细胞层增殖的影响。方法:采用机械分离法结合胰蛋白酶消化法体外原代培养大鼠卵巢颗粒细胞,通过HE染色法进行细胞形态鉴定。采用MTT法检测,分别观察含质量分数5%、10%、20%补肾健脾方含药血清对卵巢颗粒细胞增殖作用的影响。体内实验通过给雌性小鼠灌胃不同浓度的补肾健脾方,连续灌胃4周,取卵巢组织做病理形态学观察。结果:质量分数20%、10%、5%的补肾健脾方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖作用各不相同,质量分数20%、10%的含药血清、20%的空白血清对卵巢颗粒细胞的增殖作用最明显,与正常组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。补肾健脾方大剂量、中剂量、小剂量对卵巢卵泡颗粒细胞层的厚度呈现一定的增高趋势。结论:补肾健脾方对小鼠的卵巢颗粒细胞具有一定的增殖作用。

兔结膜成纤维细胞的体外培养

目的:探索兔眼结膜成纤维细胞体外培养的方法。方法:分别采用组织块培养法、机械分离法、消化培养法、细胞悬液法和混合消化组织块培养法培养兔结膜成纤维细胞,观察细胞形态和生长特性。结果:单纯机械分离和消化培养法都可以得到单层贴壁细胞,细胞消化后再培养可缩短生长周期。结论:混合酶充分消化的组织块连同细胞悬液一同培养的方法,步骤简便且周期短。通过差别消化法和多次传代可以得到较纯的成纤维细胞。

人肾癌细胞原代培养方法比较及其生长特性观察

目的:分析比较三种方法分离人肾癌组织原代培养肾癌细胞及其传代能力,探讨建立理想的人肾癌细胞体外实验模型。方法:分别采用组织块贴壁法、机械分散法及差速贴壁分离法、混合酶消化法及差速贴壁分离法进行人肾癌细胞的体外培养,并从细胞形态学、表型、增殖生长曲线和细胞活力曲线等方面进行对比研究。结果:三种方法均可获得原代肾癌细胞,采用组织块贴壁法可获得较多数量的肾癌细胞,采用混合酶消化加分步贴壁后培养情况最好,数量较多,形态完整,第4代后肿瘤细胞状态稳定,增殖活跃,有明显的对数生长期,且与肾癌细胞系769-P细胞具有相似的表面抗原表达。结论:采用混合酶消化加分步贴壁法可获得较纯的肿瘤细胞,培养生长时间短,成功率高,适宜体外原代培养。

关于石墨稀材料在未来应用的前景及其制作工艺的研讨

石墨烯被认为是目前世界上最薄、几乎完全透光、强度也最大的材料。"过去认为钻石热导率最高,但是石墨烯是它的2倍"值得一提的是,石墨烯还具备很好的柔性,也即是说,它在一定程度上可以弯曲折叠,不会造成损害。从这些优点来看,石墨烯的应用前景极其广泛,可以说石墨烯广泛应用,又将会带来一场大规模的工业革命,又将对人类社会的发展推到一个新的高度。

金属氧化物和硫化物还原过程中的热力学分析

冶炼金属的方法通常有机械分离法、热分解法、电解法和化学还原法等。其中用得较多的是化学还原法,即在高温条件下,利用还原剂(如碳、一氧化碳、氢气、金属等)还原金属氧化物、硫化物或卤化物以制得相应的金属,如下列反应所示:

石墨烯:异军突起的新材料

习近平主席访问英国时,曾专门到曼彻斯特大学石墨烯研究院参观。他指出:'在当前新一轮产业升级和科技革命大背景下,新材料产业必将成为未来高新技术产业发展的基石和先导,对全球经济、科技、环境等各个领域产生深刻影响。'石墨烯(Graphene),也许你现在还对它相当陌生,但过不了多久,它就会像虚拟现实、基因编辑、人工智能一样,成为人们耳熟能详、津津乐道的热门科技话题。