椎间盘髓核细胞应力模型中Piezo1蛋白的表达

目的探讨新型机械激活性离子通道Piezo1蛋白在人椎间盘髓核细胞应力模型中的表达。方法将人椎间盘髓核细胞分成牵张应力组和牵张应力+Piezo1蛋白抑制剂组,构建人椎间盘髓核细胞体外培养-应力刺激模型,采用多通道细胞牵张应力加载系统FX-4000T处理髓核细胞,两组均加载0、2、12、24、48h的周期性牵张应力。采用RT-PCR、Western-blot技术检测两组Piezo1的表达水平,应用激光共聚焦显微镜检测Piezo1蛋白荧光的强弱。结果 RT-PCR结果显示,牵张应力组给予2h周期性牵张应力时,Piezo1 mRNA表达较给予0h周期性牵张应力时增加,给予24h周期性牵张应力时Piezo1mRNA表达高于其他牵张应力作用时,而给予48h周期性牵张应力时较给予24h周期性牵张应力时降低,差异有显著性(F=13.917,P<0.05)。Western-blot结果显示,牵张应力组给予2h周期性牵张应力时Piezo1蛋白表达较给予0h周期性牵张应力时略有增加,给予24h周期性牵张应力时Piezo1蛋白表达高于其他各组,而给予48h周期性牵张应力时Piezo1蛋白表达较给予24h周期性牵张应力时降低,差异有显著性(F=12.781,P<0.05)。牵张应力+Piezo1蛋白抑制剂组Piezo1mRNA及其蛋白表达均明显小于牵张应力组。Piezo1蛋白表达于髓核细胞的细胞质与细胞核,荧光较强。结论人椎间盘髓核细胞中Piezo1蛋白稳定表达,并且与应力加载时间相关。

用于针刺穴位研究的结缔组织片模型

目的:先前研究发现,穴区功能与穴区结缔组织结构有密切关系,本文旨在建立基于穴区原位组织上的膜片钳研究方法。方法:急性分离出SD大鼠"后三里"穴皮下结缔组织,并安置在含有孵育液的浴槽内。组织片内肥大细胞可用甲苯胺蓝或中性红进行标记。在膜片钳实验中,通过记录电极对组织片内原位肥大细胞施加-30、-60和-90 cmH2O的负压刺激,并记录细胞上机械激活性全细胞电流。结果:制备的皮下结缔组织片标本经甲苯胺蓝或中性红染色显示,肥大细胞散在分布于组织片中的基质中。肥大细胞脱颗粒现象也能通过染色清晰可见。膜片钳记录表明穴区组织片肥大细胞的全细胞电流随着机械负压的施加而增大。结论:大鼠穴区皮下结缔组织片原位肥大细胞全细胞电流能被机械刺激激活。结合显微技术和电生理技术,大鼠"后三里"穴区皮下结缔组织片可以做为研究针刺效应外周机制的一种模型,并提示穴位肥大细胞可能参与针刺过程中机械信号的转导。该模型也可为今后进一步在细胞水平上研究穴位中细胞、胶原纤维、蛋白多糖等各成分的特性及其之间的相互作用提供基础。