自身肿瘤杀伤活性及其临床意义

自身肿瘤杀伤活性(ATK)主要指肿瘤病人末稍血中的淋巴细胞对自身肿瘤的杀伤活性。这种特异性杀伤在机体抗肿瘤过程中起着十分重要的作用。近年来,国外一些学者对ATK活性进行了深入研究。结果表明,ATK活性与肿瘤病人的临床过程密切相关,其活性高低能够代表机体免疫抗肿瘤的实际效果。因此,在免疫疗法抗肿瘤中,应该对肿瘤病人的ATK活性及其变化给予足够重视。通过对肿瘤病人ATK活性的检测,可以减少肿瘤免疫治疗过程中的盲目性,这对今后进一步提高免疫疗法抗肿瘤的效果将会起到积极作用。

IL-2和IL-15协同调节T细胞的增殖和LAK细胞的杀伤活性

目的 探讨IL 2和IL 1 5在免疫调控和应答中的协同作用。方法 IL 2、IL 1 5和IL 2 +IL 1 5组刺激CTLL细胞的增殖 ,3 H TdR掺入法测cpm值 ;IL 2、IL 1 5和IL 2 +IL 1 5组诱导PBMC中NK和LAK细胞的发育 ,4h51 Cr释放实验检测对K5 6 2和LiBr细胞的杀伤活性。结果 IL 2和IL 1 5都能诱导CTLL细胞的增殖和NK、LAK细胞的杀伤活性 ,IL 2和IL 1 5可明显协同上调CTLL的增殖和LAK细胞的杀伤活性。结论 IL 2和IL 1 5在免疫调控和应答中有一定的协同作用 。

不同来源CIK细胞的体外扩增和杀伤活性的比较

目的:比较两种不同来源的CK细胞的体外扩增速度、杀伤活性和机制. 方法:脐血和正常人外周血各16例,经单个核细胞,以抗CD3mAb、重组人白细胞介素2和干扰素γ为诱导剂制备CIK细胞,直接活细胞计数法比较二者的细胞动力学效应,MTT法比较二者对胃癌细胞株BGC823的杀伤活性,透射电镜下观察肿瘤细胞的变化.结果:脐血CIK细胞的扩增速度、杀伤活性均显著优于外周血CIK细胞,CMNCCIKvsMNCCIK,P<0. 05;脐血CIK细胞以诱导肿瘤细胞坏死为主,外周血CIK细胞以诱导肿瘤细胞凋亡为主,二者的差异有统计学意义. 结论:脐血CIK细胞体外扩增快,杀伤活性强,对肿瘤细胞的作用优于外周血CIK细胞,不同来源的CIK细胞杀伤肿瘤细胞的机制不同.

黄芪苷对人外周血自然杀伤活性影响因素的研究

应用^(51)Cr释放法研究黄芪苷ASI和SK对人外周血NK活性的影响。结果表明,高浓度(250 μg/ml)有抑制作用,在适当浓度范围内(5μg/～0.05μg/ml)有较显著的促进作用(P<0.05),当与PHA、rIFN α或rIL-2联合作用时对NK活性有明显的增强作用。本文还证明了黄芪苷对地塞米松抑制NK活性有一定的恢复作用。本研究证实黄芪苷是增强机体免疫功能的一种有效成分。它是一种免疫调变剂,其作用强弱与机体的免疫水平有关。本研究也为临床使用黄芪制剂提供一些依据。

CD3AK杀伤机理及其杀伤活性调控效应的初步研究

应用抗CD3单抗和人rIL-2共同诱导人外周血单个核细胞制备人CD3AK细胞(CDAK).采用LDH释放法、ABC-CELISA法、流式细胞术等方法观察了CD3AK杀伤癌细胞的机理及人rIFN-α、rIFN-γ、rTNF细胞因子、化疗药顺氨氯铂(CDDP)和阿霉素(ADM)对CD3AK杀伤活性的调控效应.结果表明,①粘附分子ICAM-1/LFA-1参与CD3AK的杀瘤过程,并且rIFN-α、rTNF的促CD3AK杀伤效应亦是通过上述途径实现的.③CD3AK通过分泌可溶性杀伤因子间接杀伤癌细胞.③CD3AK通过膜相关TNF参与杀伤效应.④CD3AK介导癌细胞凋亡.⑤化疗药CDDP和ADM处理癌细胞后,提高其对CD3AK杀伤活性的敏感性,CDDP促杀伤效应与其上调癌细胞表面ICAM-1、HLA-ABC抗原表达有关.

流式细胞术检测CIK的免疫表型和体外杀伤活性

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)的免疫表型和体外杀伤活性。方法:从健康人外周血分离淋巴细胞,经过IFNγ、CD3McAb、IL-2诱导并培养,获得大量的CIK。采用流式细胞术检测CIK的表型;以CFSE标记靶细胞来区分效应细胞,再以PI染色,用FACS检测靶细胞的死亡率。结果:CIK于第22天达到增殖高峰,并高度表达CD3、CD11a、CD54和HLA-DR;中度表达CD3/CD56、CD25、CD28、CD69和FasL;CD16表达不增加。CIK对肿瘤细胞K562、HL-60、Hela、SMMC7721和A375均表现出杀伤活性,其中对K562、HL-60、Hela 3种细胞的杀伤作用较强;而对SMMC7721、A375的作用不明显。结论:细胞因子IFNγ、CD3McAb和IL-2体外诱导的单个核细胞具有强大的增殖力和杀伤活性。

限制进食刺激对肠上皮淋巴细胞数量和杀伤活性的影响

通过对限制进食刺激影响消化道肠上皮淋巴细胞及细胞亚群数量和杀伤活性的研究，发现限制小鼠进食２ｄ后，ＩＥＬ总数明显下降，并随限制进食时间的延长其总数下降更为明显。流式细胞分析仪检测结果显示，在给予刺激２ｄ，αβ－ＩＥＬ百分比明显下降，而γδ－ＩＥＬ百分比却有所上升；限制进食５ｄ后，二种细胞亚群百分比均较对照组降低。ＩＥＬ杀伤活性在限制进食２ｄ时略有升高，以后下降，限制进食５ｄ实验组ＩＥＬ杀伤活性明显低于对照组。

TNF基因转染的肿瘤细胞体内诱导免疫细胞杀伤活性的研究

本文观察了小鼠接种高分泌ＴＮＦ－ａ的Ｂ１６黑色素瘤细胞（Ｂ１６－ＴＮＦ－ａ￣＋）后体内免疫细胞（包括ＣＴＬ、ＮＫ细胞、ＬＡＫ细胞以及腹腔ＭΦ）杀伤活性的变化。实验结果发现：接种Ｂ１６－ＴＮＦ－ａ￣＋后第１５天，小鼠脾细胞ＮＫ活性和诱导后的ＬＡＫ活性显著高于对照组，而经诱导后的ＣＴＬ杀伤活性则无显著变化；腹腔内巨噬细胞吞噬功能及杀伤活性也显著提高，但其Ｉａ抗原表达与对照组无显著差异。本实验的结果表明：高分泌ＴＮＦ－ａ的黑色素瘤细胞主要诱导并增强机体非特异性免疫细胞的抗肿瘤作用。

口蹄疫重组鸡痘病毒诱导猪特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性检测

目的:评价口蹄疫重组鸡痘病毒vUTAL3CP1诱导猪产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的能力。方法:用PCR方法亚克隆O型FMDVVP1基因C末端部分片段(第1 30～2 1 3AA)。将其插入真核表达载体pDisplay中,构建质粒pDisplay- mVP1。将pDisplay -mVP1转染PK 1 5细胞,经3次G41 8加压筛选,并用RT- PCR和IFA鉴定,证明获得表达目的基因的PK 1 5 /pDisplay- mVP1细胞。最后,利用该细胞作为靶细胞,用LDH法检测口蹄疫重组鸡痘病毒vUTAL3CP1免疫猪的特异性CTL杀伤活性。结果:vUTAL3CP1免疫组在效靶比2 5∶1和5 0∶1时,CTL裂解活性分别达到42 . 84%±3 2. 1 %和61 . 94%±4 2. 8% ,显著高于灭活疫苗组与其它对照组(p <0 . 0 1 )。结论:vUTAL3CP1可以诱导猪产生高水平的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性,为进一步的FMDV基因工程疫苗的研究奠定了基础。

MTT法检测鸡脾脏和外周血NK细胞杀伤活性的条件优化

选取不同日龄的SPF鸡和肉鸡，用贴壁法从血液和脾脏分离出NK细胞作为效应细胞，选择瘤细胞MDCCMSB1和MDCC-MSBCU147分别作为靶细胞，二者按比例混合，孵育，利用MTT法检测靶细胞的活力反映效应细胞对靶细胞的杀伤活性，并对效靶比、作用时间进行比较。结果显示，MSB-1和CU147均可作为NK细胞良好的靶细胞，但CU147更稳定；效靶比为20：1-50：1，作用时间8-16h杀伤效果稳定；50％DMF20％SDS混合物作为裂解液能够对结晶彻底溶解，优于其他溶解试剂。

重度子痫前期患者血清对外周血NK细胞杀伤活性的影响

目的研究重度子痫前期患者血清对NK细胞杀伤活性影响。方法重度子痫前期患者组(病例组)、正常妊娠妇女组(对照组)各15例,采用1∶1配比的病历对照研究。采用Percoll不连续密度梯度方法分离健康非孕妇女NK细胞,用10%、20%、40%浓度重度子痫前期患者血清及20%正常妊娠妇女血清孵育NK细胞20 h,。采用MTT法检测不同血清对NK细胞杀伤活性影响。结果在用20%重度子痫前期患者血清及正常妊娠血清孵育20 h后,重度子痫前期组NK细胞杀伤活性为(48.68±8.47)%,正常妊娠组为(35.21±8.24)%。与正常妊娠组相比,重度子痫前期组NK细胞杀伤活性增强,差异有统计学意义(P<0.01)。在重度子痫前期组,用10%浓度血清孵育20 h后,NK细胞杀伤活性为(39.98±7.65)%,40%浓度血清组为(58.33±7.45)%,重度子痫前期组中10%、20%、40%浓度血清组间两两相比,差异有统计学意义(F=24.326,P<0.01)。结论子痫前期患者血清中某些因子可使NK细胞杀伤活性增强。

TCRVβ8.4基因转染人PBMC对肝癌细胞杀伤活性的研究

目的 :探讨转染hTCRVβ 8 4基因后健康人PBMC的免疫学特性及其对起源于乙肝病毒的肝癌细胞株BEL 74 0 2杀伤活性的改变。方法 :将hTCRVβ 8 4基因克隆至真核表达载体pcDNA3 1( )上 ,并转染健康人PBMC ,流式细胞术检测转染后PBMC中TCRVβ8 4蛋白表达 ,乳酸脱氢酶释放活性法检测重组质粒转染后PBMC对癌细胞BEL 74 0 2的杀伤活性。 结果 :TCRVβ8 4在基因转染后淋巴细胞中表达显著增高 ;与BEL 74 0 2共培养后 ,基因转染组CD3+ TCRVβ8 4T细胞增殖明显高于对照组 ;BEL 74 0 2G刺激后免疫细胞活化 ,表达CD12 2的细胞数量增多 ,表达CD19(B细胞活化的标志 )的B细胞增加 ;重组质粒转染后 ,PBMC对肝癌细胞BEL 74 0 2杀伤活性增强 ;透射电镜观察发现 ,重组质粒转染的PBMC使BEL 74 0 2凋亡。结论 :hTCRVβ 8 4基因修饰可显著增强淋巴细胞在超抗原BEL 74 0 2刺激下的增殖及免疫细胞活化 ,基因修饰后T淋巴细胞杀伤活性明显增强。

NK细胞对骨髓瘤RPMI 8226细胞的体外杀伤活性

目的:探讨NK细胞对骨髓瘤RPMI 8226细胞的体外杀伤活性。方法:分离纯化NK细胞,LDH法检测不同效靶比时NK细胞对RPMI8226细胞的杀伤活性,并以K562细胞为对照。同时用甲基纤维素克隆形成试验观察效靶比为20:1时细胞克隆形成率。结果:NK细胞对K562、RPMI 8226细胞的杀伤活性随着效靶比升高而增强,在同一效靶比,NK细胞对K562、RPMI8226细胞的杀伤活性组间比较差异均有统计学意义。NK细胞对K562细胞克隆形成抑制率为(63.48±6.78)%,对RPMI 8226细胞克隆形成抑制率为(23.71±2.39)%,差异有显著统计学意义。结论:NK细胞可杀伤骨髓瘤RPMI 8226细胞,但为低度敏感。

大肠癌患者手术前后淋巴细胞杀伤活性及诱导细胞因子能力的变化

目的:探讨大肠癌患者手术前后外周血淋巴细胞杀伤活性及诱导细胞因子能力的变化。方法:选择25例在本科进行大肠癌手术的病例,研究大肠癌患者手术前后NK、ADCC活性、T细胞亚群以及外周血淋巴细胞诱导IL—2水平的改变。结果:大肠癌患者手术后,NK、ADCE活性、CD4^+T细胞的比例及诱导IL—2的水平明显高于手术前(P<0.05),但与对照组相比,仍相差非常显著(P<0.01);按病期、病理分类比较发现,Dukes’AB期及高、中分化组淋巴细胞的功能抑制较CD组及低分化组轻(P<0.05)结论:大肠癌患者淋巴细胞活性的抑制与肿瘤的分期有关;大肠癌细胞可能分泌某些因子抑制免疫细胞的活性。

当归多糖对CIK细胞生物学特性及其杀伤活性的影响

目的:探讨当归多糖(Angelica sinensis polysaccharide,ASP)体外对人外周血来源的细胞因子诱导的杀伤(cytokine induced killer,CIK)细胞的增殖、免疫表型及其对白血病K562细胞杀伤活性的影响。方法:分离健康志愿者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),第0天加入IFN-γ(1 000 IU/ml),24 h后再加入IL-2(1 000 IU/ml)、抗CD3单抗(50 ng/ml)继续培养,此后每隔3 d根据添加不同浓度的ASP分为5组:A组(不加ASP)、B^E组(分别加ASP 12.5、25、50、100μg/ml)。全自动血细胞计数仪计数各组CIK细胞的增值情况,流式细胞术检测各组CIK细胞中CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞的百分比,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组CIK细胞上清液中IFN-γ及TNF-α的分泌水平,CCK-8法检测各组CIK细胞对K562细胞的杀伤活性。结果:联合ASP诱导培养CIK细胞至第16天时,与A组相比,E组CIK细胞的增殖能力明显增加[(56.98±3.00)×106vs(43.81±2.14)×106,P<0.05)],各组细胞活率都保持在90%以上;各组CIK细胞CD3+CD4+、CD3+CD8+细胞比例无明显差异,而D组、E组CD3+CD56+细胞比例与A组相比存在差异[(26.65±3.71)%、(28.36±4.28)%vs(20.75±3.56)%,P<0.05)];E组CIK细胞在效靶比为40∶1、20∶1、10∶1时对K562细胞的杀伤活性比A组更强[(84.19±5.88)%vs(68.05±5.95)%、(76.69±6.54)%vs(64.55±9.44)%、(72.32±9.22)%vs(61.45±8.22)%,均P<0.05〗。结论:随着培养时间的延长,高浓度的ASP体外对CIK细胞的增殖及杀伤活性有一定的促进作用。

NK-92细胞对人卵巢癌细胞体外杀伤活性

目的 研究NK 92细胞对人卵巢癌细胞的体外杀伤活性以及放射线照射后对其杀伤活性的影响。方法 以体外培养人卵巢癌细胞系HO 8910为靶细胞 ,以NK 92的敏感细胞株K5 6 2作为对照 ,应用 4h51Cr释放法检测不同效靶比情况下体外培养NK 92细胞的杀伤活性 ,并应用医用电子直线加速器对NK 92细胞进行照射处理 (0、4 0 0cGy)后再检测其杀伤活性变化。结果 NK 92细胞未照射组 ,效靶比较低时 (1∶1、5∶1)对于HO 8910细胞杀伤率为 39%～4 5 % ,随效靶比升高 ,杀伤率随之上升 ,10∶1时杀伤率显著上升为 5 9% ,2 0∶1时杀伤率仅上升了 6 % ;对于K5 6 2细胞 ,杀伤率为 5 8%～ 71%。照射后 2d ,4 0 0cGy组NK 92细胞对HO 8910细胞不同效靶比的杀伤率与 0cGy组相比有所降低 ,其总体杀伤率为 4 2 %～ 6 2 % ,对K5 6 2细胞杀伤范围在 4 4 %～ 6 1%之间。结论 NK 92细胞对人卵巢癌细胞系HO 8910具有较高的杀伤活性 ,经放射线照射后仍保留一定的杀伤活性。

细胞因子诱导的杀伤细胞对胆囊癌细胞株GBC-SD杀伤活性的影响

目的研究脐血单个核细胞体外多向诱导分化为LAK,CD3AK,CIK细胞及体外对胆囊癌细胞株GBC-SD杀瘤活性的变化。方法采用IL-2刺激诱生LAK细胞;用CD3单抗和IL-2刺激诱生扩增CD3AK细胞;加入IFN-γ,24h后加入IL-1,CD3单抗,IL-2刺激诱生CIK细胞,观察它们的扩增情况,并分析其相互关系;取培养的CIK细胞用流式细胞仪分析表型;用MTT法以胆囊癌细胞株GBC-SD为靶细胞,分组测定LAK,CD3AK,CIK细胞的杀伤活性。结果CD3AK和CIK细胞的扩增能力远大于LAK细胞(P<0.05)。CIK细胞和CD3AK相比,在前期无明显差异,至第20天左右时CIK细胞的扩增倍数显著高于CD3AK(P<0.05)。流式细胞仪分析结果显示CIK细胞培养后,其主要效应细胞CD3+CD56+细胞较培养前显著增加(P<0.05),CD8+细胞也较培养前显著增加(P<0.05)。CD3AK和CIK细胞对胆囊癌细胞株GBC-SD的杀伤活性均显著高于LAK细胞(P<0.05),而CIK细胞杀伤活性又强于CD3AK细胞(P<0.05)。结论CIK细胞具有更高的扩增能力和更强的杀伤活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀伤效应细胞。

MiR-191过表达抑制NK细胞的肿瘤杀伤活性和细胞凋亡

目的研究miR-191过表达对自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)的凋亡和肿瘤杀伤活性的影响。方法通过免疫磁珠阴性分选方法从小鼠脾脏中分离NK细胞,体外用IL-2刺激扩增5~7 d后,采用流式细胞术分析NK细胞的细胞毒活性和凋亡情况。制备小鼠骨髓、脾脏、淋巴结和胸腺的单细胞悬液,计算细胞总数后,采用流式细胞术分析NK细胞的比例和数量。结果与野生型(WT)小鼠相比,miR-191过表达转基因TgmiR-191小鼠NK细胞的凋亡率及其对小鼠淋巴细胞瘤细胞RMA-S的特异性杀伤活性均显著降低。miR-191过表达可显著增加脾脏和淋巴结的NK细胞数量。结论 miR-191过表达对NK细胞的肿瘤杀伤活性和细胞凋亡有明显的抑制作用。

抗原负载的DC及CIK对结肠癌细胞SW1116杀伤活性的比较研究

目的探讨树突状细胞(dendritic cells,DCs)以及CIK(cytokine induced cells)细胞对结肠癌细胞SW1116的体外杀伤作用,为结肠癌的治疗提供新的治疗手段。方法用IL-4、GM-CSF、TNFα等细胞因子诱导培养DC细胞,并用抗原进行负载;用CD3Ab、IFNγ、IL-2、IL-1α等诱导培养CIK细胞,分别用抗原负载的DC、CIK细胞对人结肠癌细胞SW1116进行体外杀伤活性实验,比较两者对SW1116的杀伤效果。结果抗原负载的DC和CIK对SW1116均有较强的杀伤效果,分别达到64.10%和67.70%。结论抗原负载的DC及CIK对人结肠癌细胞SW1116在体外具有较强的杀伤作用。