杀伤细胞免疫球蛋白样受体在子痫前期胎盘组织中的表达及意义

子痫前期是妊娠期特有的疾病，其病因及发病机制不清，大多数学者认为可能与某些遗传因素引发的免疫功能失调，造成滋养细胞侵润障碍，导致胎盘浅着床有关[1]。杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR2DL4）通过识别滋养细胞表面的人类白细胞抗原G（HLA-G），向自然杀伤（NK）细胞传递抑制性信号，抑制NK细胞对胎儿成分的杀伤作用，其表达异常可能使胎儿和母体之间的免疫平衡失调，引发病理性妊娠[2]。本研究对KIR2DL4基因在胎盘的表达情况进行研究，探讨KIR基因在子痫前期发病中的可能作用，报告如下。

阻断KIR2DL4(CD158d)增强NK细胞的杀伤功能

目的利用抗体阻断人原代培养的自然杀伤(NK)细胞表面的杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(KIR2DL4),抑制其与配体人白细胞抗原G(HLA-G)的结合,观察对NK细胞杀伤功能的影响。方法用免疫磁珠法分离人NK细胞并培养,流式细胞术检测所得NK细胞的纯度;流式细胞术检测NK细胞表面KIR2DL4的表达水平和人乳腺癌SK-BR-3细胞表面HLA-G的表达水平;将NK细胞与SK-BR-3细胞共培养,并加入KIR2DL4的阻断抗体,ELISA检测NK细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)的水平,利用流式细胞术检测NK细胞表面CD107a的表达水平,以检测其脱颗粒情况。结果分离得到的人原代NK细胞纯度可达90%以上;共培养实验发现,KIR2DL4的阻断抗体可促进NK细胞分泌IFN-γ,且NK细胞表面CD107a的表达水平也明显提高,提示其脱颗粒能力增强。结论阻断KIR2DL4信号可明显促进NK细胞的杀伤功能,KIR2DL4在NK细胞杀伤靶细胞的过程中发挥抑制性作用。

急性淋巴细胞白血病患者外周血中KIR2DL4的表达及其对NK细胞杀伤功能的影响

目的:探究杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(killer cell Ig-like receptor 2DL4,KIR2DL4)在急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者外周血中的表达,及其对自然杀伤细胞(nature killer,NK)杀伤功能的影响。方法:从ALL患者及健康志愿者的外周血中分离出单个核细胞,采用实时荧光定量PCR检测单个核细胞中KIR2DL4的表达差异;从单个核细胞中分选NK细胞,通过流式细胞仪检测CD3-CD56+标记的NK细胞比例,并分析NK细胞表面KIR2DL4与Molt-4细胞表面人白细胞抗原G(human leukocyte antigen G,HLA-G)的表达水平。分别以NK细胞、KIR2DL4阻断抗体作用的NK细胞、IgG1抗体作用的NK细胞作效应细胞,Molt-4细胞为靶细胞,在不同效靶比(5:1、10:1、20:1)下,利用ELISA检测细胞上清液中干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放法检测不同处理的NK细胞对Molt-4细胞的杀伤作用;并在20∶1的效靶比下,通过激光共聚焦显微镜观察各处理下Molt-4细胞形态学改变,流式细胞术检测不同处理的NK细胞脱颗粒情况。结果:ALL患者外周血中KIR2DL4 mRNA相对表达量显著高于健康志愿者(P<0.05);分选后CD3-CD56+标记的NK细胞纯度达到90%以上;与NK细胞和Molt-4细胞共培养相比,阻断KIR2DL4能够提高细胞上清液中NK细胞分泌因子IFN-γ与TNF-α水平(P<0.05),提高NK细胞对Molt-4细胞的杀伤率(P<0.05),使Molt-4细胞形变与核固缩更明显,并提高NK细胞中CD107α表达水平(P<0.05)。结论:KIR2DL4在ALL患者外周血中高表达,而阻断KIR2DL4能够促进NK细胞分泌IFN-γ、TNF-α及脱颗粒,提高其对Molt-4细胞的杀伤功能。

KIR2DL3/HLA-C1基因组合与HCV感染相关性研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)感染是一个全球性的健康难题,丙型肝炎引起的肝硬化相关性死亡已经成为肝病中重要的病因之一。研究表明,人类白细胞抗原(HLA)以及其特异配体杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)与HCV感染具有相关性,其中KIR2DL3和HLA-C1与HCV感染的相关性已经得到证实。KIR2DL3和HLA-C1结合的亲和力低,减少了自然杀伤细胞的抑制作用,间接影响机体对HCV感染的免疫能力。该文将从KIR2DL3和HLA-C1在人群中的发生率、HCV感染过程中抗病毒免疫以及对肝移植后HCV再感染的影响等几个方面进行综述。

白血病患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性的Logistic回归分析

自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）是一类主要表达于NK细胞和部分T细胞表面的糖蛋白受体，主要通过与靶细胞表面的HLA—Ⅰ类分子特异性结合传递抑制或激活信号，从而调控NK细胞的功能。它是广泛参与免疫调节及免疫反应的重要基因之一。目前共发现17个KIR基因，即KIR2DL1～4、KIR2DL5A、KIR2DL5B、KIR2DLS1～5、KIR3DL1～3、KIR3DS1、KIR2DPI和KTR3DP1。我们采用序列特异引物聚合酶链反应（PCR-SSP）检测技术对243例白血病患者的KIR基因进行了检测，以初步探讨KIR基因多态性与白血病发生之间的关系。

NK细胞可溶性KIR3DL1分子检测双夹心ELASA的建立

自然杀伤细胞（natural killer cells，NK细胞）是固有免疫中一类十分重要的淋巴细胞，约占循环淋巴细胞总数的15％。目前根据CD56和CD16的表达水平可将NK细胞分为CD56hi、CD56dim和CD56-CD16＋3个亚群。

KIR2DL5基因研究进展

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer-cell immunoglobulin-like receptors,KIPs)是由一组位于19q13.4的紧密成簇的基因编码的免疫球蛋白超家族受体,蛋白结构具有多样性。KIR2DL5由于其独特的基因转录表达特征、单倍体分布、群体分布和表达的多样性,以及D0-D2免疫球蛋白样胞外段结构域和较长的胞内段结构特征而有别于其他KIR,在KIR研究中尤为重要。本文拟对这一基因的研究进展作一综述。

KIR3DL3等位基因多态性与南方汉族人群白血病的关联研究

目的了解中国南方汉族人群KIR3DL3等位基因多态性与白血病的相关性。方法收集急性髓系白血病患者（AML组,n=137）、急性淋巴细胞白血病患者（ALL组,n=141）以及健康无关志愿献血者（对照组,n=306）的血样（3组均为南方汉族）,提取基因组DNA,应用本实验室设计的引物对KIR3DL3全部外显子进行测序分型,用Assign 4. 7. 1软件判定基因型。使用SPSS 22. 0统计软件对2个病例组与对照组中检出的每个KIR3DL3等位基因做差异性分析。结果 AML组、ALL组和对照组分别检出了12、14、16种等位基因。ALL病例组和对照组中KIR3DL3＊004和＊028等位基因的检出比例分别为12. 77%（18/141） vs 1. 63%（5/306）与11. 35%（16/141） vs 3. 27%（10/306）,（Pc〈0. 05）。AML病例组中检出的各等位基因的检出比例与对照组比较无明显差异（P〉0. 05）。结论本组人群携带的KIR3DL3＊004、＊028等位基因为中国南方汉族人群发生ALL的易感因子。

中国北方汉族人群KIR2DL4等位基因水平多态性的研究

目的了解中国北方汉族人群KIR2DL4等位基因水平的分子遗传多态性。方法采用磁珠法从327人份北方汉族无关个体标本中提取基因组DNA,采用本实验室建立的KIR2DL4测序分型专利技术对KIR2DL4基因的全部编码区(CDS)序列分为4段做特异性PCR扩增后,采用Sanger测序法对扩增产物所涵盖的每个外显子做双向测序。所获得的序列用Assign 4.7分析软件分析每个标本的基因型。结果共检出8种KIR2DL4等位基因,基因频率由高到低分别为KIR2DL4^(+)00102[77.1%(252/327)]、^(+)00501[35.8%(117/327)]、^(+)011[20.2%(66/327)]、^(+)00602[12.5%(41/327)]、^(+)00801[8.6%(28/327)]、^(+)00103[4.9%(16/327)]、^(+)00503[1.5%(5/327)]、^(+)00504[0.9%(3/327)]。能正常膜表达的10A型等位基因(KIR2DL4^(+)00102、^(+)00103、^(+)00501、^(+)00503、^(+)00504、^(+)00602)及存在CDS nt811位置腺嘌呤缺失而不能正常膜表达的9A型等位基因(KIR2DL4^(+)00801、^(+)011)的检出比例分别为97.6%(319/327)及27.8%(91/327),约为3.5∶1。与南方汉族人群相比较,中国北方汉族人群KIR2DL4各等位基因的检出频率无明显差异(P>0.05)。结论所获得的KIR2DL4分子遗传多态性数据可为疾病关联、人类进化等研究提供重要参考。

内蒙古汉族人群2型糖尿病及2型糖尿病合并肾病患者KIR基因多态性分析

目的探讨内蒙古汉族2型糖尿病和2型糖尿病合并肾病患者与杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptors,KIR)的基因多态性的关联性。方法收集2010年7月至2015年12月期间在内蒙古科技大学第一附属医院接受治疗的87例2型糖尿病患者和102例2型糖尿病合并肾病患者的外周血,并选取122例健康体检者作为对照组。采用序列特异性引物聚合酶链反应方法检测三组人群KIR基因多态性,采用χ~2检验分析组间KIR基因型频率差异。结果 1)三组人群中均检出目前已知的全部18个KIR基因,其中KIR3DL3、KIR2DL4、KIR3DL2和KIR3DP1基因频率均为100%;2)与对照组相比,2型糖尿病组和糖尿病肾病组患者KIR2DL3基因频率均降低(P<0.01);3)与2型糖尿病组比较,糖尿病肾病组患者KIR2DS4基因频率升高(P<0.01)。结论 KIR2DL3缺失可能是内蒙古地区汉族患者2型糖尿病发病的保护因子,KIR2DS4可能是其患2型糖尿病合并肾病的易感基因。

浙江汉族人群KIR2DL3基因遗传多态性

目的 探讨浙江汉族人群KIR2DL3基因的多态性分布情况。方法 采用PCR测序分型方法进行KIR2DL3等位基因分型。首先合成引物特异性扩增KIR2DL3基因的两个片段，然后对KIR2DL3基因第4．5、7、8和9外显子进行测序分析，根据多态性位点格局判断样本的KIR2DL3等位基因情况。结果 样本中共检测到两种等位基因，其中KIR2DL3＊001等位基因占77％。结论 PCR测序分型方法可有效检测KIR2DL3等位基因。