两种巨噬细胞系中PKC亚型表达的差别与其抗瘤活性的比较:依赖一氧化氮的杀瘤机制(英文)

目的 探讨LPS诱导的巨噬细胞杀瘤效应以及与PKC相关的分子机制。方法 两种巨噬细胞系P388D1和RAW264．7用LPS刺激、或先用PMA长期处理下调PKC表达、或用L-NAME阻断iNOS后再以LPS刺激，检测其杀伤肿瘤细胞系P815(MTT法)及分泌IL-1，TNF-α(ELISA法)和NO(Griess试剂)的作用；并用Western blot法检测PMA长期作用后两株细胞系中PKC亚型的表达。结果 LPS刺激的RAW264．7细胞有杀伤靶细胞的功能，而P388D1几乎没有杀伤作用。PMA预处理(1μg／mL，24 h)后可明显抑制LPS诱导的杀瘤作用。因上述结果提示PKC在巨噬细胞杀瘤活性中可能的重要作用，比较了PMA处理后两株细胞PKC亚型的表达：Western blot结果显示，在所检测的PKCα，β1，β2，δ及ε5种亚型中，在P388D1细胞均有表达，而在RAW264．7细胞仅有PKCα，PKCβ1，PKCδ表达；1μg/mL PMA作用24h后明显下调了RAW264．7细胞PKCα，PKCβ1和PKCδ的表达，在P388D1则有PKCα、PKCδ和PKCε下调，而PKCβ1和PKCβ2不被下调。结合LPS诱导的与PKC活化有关的IL-1、TNF-α及NO的产生，发现在P388D1细胞几乎不产生NO，而在RAW264．7细胞，NO合成酶抑制剂L-NAME不仅能阻断LPS诱导的NO的产生，而且明显抑制LPS诱导的杀瘤活性。结论

可溶性喉鳞癌抗原和抗CD_3单抗及r1L-2共同诱导的杀瘤细胞—TAK细胞的杀瘤机制的研究

作者在前期研究工作的基础上,进一步探讨喉鳞癌抗原诱导的TAK细胞的杀瘤机理。结果表明:TAK细胞除直接杀伤靶细胞外,还通过分泌肿瘤坏死因子间接杀伤靶细胞。电镜观察表明,靶细胞的死亡形式有两种:溶解坏死和凋亡。

细胞因子诱导的杀伤细胞生物活性及杀瘤机制

目的探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体外杀伤活性及杀瘤机制。方法采集白血病患儿骨髓单个核细胞,加入粒-巨噬细胞集落刺激因子、IL-4、TNF-α等细胞因子,诱导培养成树突细胞。从白血病患者外周血分离淋巴细胞,经IFN-γ、CD3McAb、IL-2诱导并培养,获得大量CIK。将树突细胞(DC)和CIK细胞共培养10～25d,获得DC-CIK细胞。采用四甲基偶氮唑盐法研究DC-CIK对多种白血病细胞株的杀伤活性,经小鼠抗人LFA-1单克隆抗体处理后,采用RT-PCR与Western Blot方法检测GATA-3和T-bet基因表达水平变化。结果DC-CIK在诱导第0-6天增殖较缓慢,第13天细胞增殖100倍,在第13-21天细胞处于快速增殖期,于第22天达增殖高峰,DC-CIK对肿瘤细胞B95、Jhhan、M07e均表现出杀伤活性,其中对B95细胞的杀伤作用较强,在效靶比为12.5:1.0,25:1时DC-CIK对B95细胞的杀伤无明显差异,为50%和60%左右;而对Jhhan、M07e的作用不明显,在效靶比为12.5:1.0,25:1时DC-CIK对Jhhan、M07e杀伤百分比分别为27.21%、25.13%,33.05%、29.72%。经小鼠抗人LFA-1单克隆抗体处理后,与阴性对照组比较,2个处理组均使细胞内GATA-3基因mRNA表达水平增加(t=3.425,4.523Pa<0.05),GATA-3基因蛋白表达水平增加(t=3.766,5.654Pa<0.05);T-bet基因mRNA水平表达降低(t=4.682,3.898Pa<0.05),T-bet基因蛋白表达降低(t=5.624,4.982Pa<0.05)。结论细胞因子IFN-γ、CD3McAb和IL-2体外诱导的单个核细胞具有强大的增殖活性和杀伤活性。GATA-3和T-bet基因均参与了LFA-1/ICAM-1介导的DC-CIK杀瘤途径。

噬菌体展示TM-TNF-α模拟肽体内杀瘤效应的研究

目的 研究噬菌体展示TM -TNF- α模拟肽的体内杀瘤效应及机制。方法 大量制备所需的噬菌体展示肽,比较不同展示肽对小鼠的肝癌细胞H2 2的体外杀瘤效应,挑取杀瘤效应最好的展示肽并选择其合适的滴度进行体内实验。小鼠接种H2 2细胞3d后,于肿瘤接种部位皮下注射噬菌体展示肽,观察肿瘤的生长情况。结果 噬菌体展示TM- TNF -α模拟肽在体内能明显抑制肿瘤的生长(P <0 .0 1)。且抑瘤率与展示肽之间呈剂量依赖关系。HE染色发现展示肽治疗组肿瘤组织中有大量淋巴细胞浸润,而sTNF- α治疗组除淋巴细胞浸润还可见中性粒细胞、浆细胞浸润。结论 直接注射噬菌体展示TM -TNF -α模拟肽可在体内有效杀瘤,其杀瘤机制可能不同于分泌型TNF -α。