胃癌相关抗原与自身CTL细胞增殖及体外杀瘤活性关系

目的 :探讨胃癌相关抗原与胃癌患者自身细胞毒T细胞 (CTL)细胞增殖及体外杀瘤活性的关系。方法 :用生化方法提取胃癌相关抗原 ,体外协同IL 2培养淋巴细胞 ,MTT法测定细胞增殖及杀瘤活性 ,流式细胞仪 (FCM)检测细胞表型变化。结果 :12例胃癌相关抗原阳性患者CTL细胞增殖快于 9例阴性患者 ,统计比较 ,差异有极显著意义 (P <0 0 0 1)。E/T为 80∶1时 ,前者体外杀瘤活性均值也大于后者 (P <0 0 1) ,FCM检测结果表明前者CD+ 8及CD+ 2 5表达率也显著高于后者 (P <0 0 1)。结论 :本研究为解释胃癌等“不敏感群体”现象提供实验依据 ,提示该类抗原诱导的杀伤细胞可望用于胃癌临床免疫治疗 ;结合相关抗原筛查 。

IL－12对肿瘤病人PBMC增殖和杀瘤活性的实验研究

主要观察了ＩＬ－１２与ＩＬ－２联合对健康人和肿瘤病人ＰＢＭＣ增殖和体外杀瘤活性的影响。实验结果表明，单独应用ＩＬ－１０２对肿瘤病人ＰＨＡ活化ＰＢＭＣ增殖活性很小，如与低剂量ＩＬ－２合用，则可明显促进其增殖效应，表明ＩＬ－２可增强ＩＬ－１２的作用。与单用ＩＬ－１２相比，当ＩＬ－１２与低浓度ＩＬ－２合用时，健康人和肿瘤病人ＰＢＭＣ对Ｋ５６２细胞和Ｒａｊｉ细胞的杀伤活性均明显增强，且对Ｋ５６２细胞株杀伤活性明显强于对Ｒａｊｉ细胞株的杀伤活性。上述结果表明，ＩＬ－１２与ＩＬ－２合用对健康人和肿瘤病人ＰＢＭＣ增殖及杀瘤活性影响的格局基本一致。本实验为进一步研究ＩＬ－１２协同其它因子增强肿瘤病人ＬＭ和ＴＩＬ等免疫细胞抗肿瘤效应并进而使ＩＬ－１２过渡到临床肿瘤病人治疗提供了重要的实验依据。

MTT法检测CIK细胞的体外杀瘤活性

目的 观察CIK (cytokineinducedkiller)细胞的体外杀瘤活性。 方法 以LAK (lym phokineactivatedkiller)细胞作对比 ,用MTT法测定并比较CIK细胞与LAK细胞的体外杀瘤活性。 结果 CIK细胞的体外杀瘤活性明显优于LAK细胞 ,杀伤率分别为 2 9%和 15 %。结论 CIK细胞是一种具有较强杀伤活性的免疫效应细胞 。

肿瘤疫苗利播停(Lipostn)对人胃腺癌LAK增殖及杀瘤活性的影响

利播停(Lipostn)为解放军301医院袁玫等提取纯化的一种癌细胞表面抗原,属糖蛋白类物质,分子量为430KD,可为单克隆抗体CL-3识别。同时,利用CL-3单抗结合免疫电泳方法可检测粪便中胃肠道肿瘤相关抗原。可认为利播停与患者体内肿瘤抗原成份有一定免疫交叉性反应。 已证实Lipostn可诱导鼠淋巴细胞(取自肿瘤引流区淋巴结)对含特定抗原的肿瘤细胞有杀伤作用。基此,我们研究Lipostn对人胃腺癌LAK增殖及杀瘤活性(体外)的影响。实验发现,单独的Lipostn不能诱导患者外周血PBMC增殖,但与rIL-2(400μ/ml)之间存在协同促增殖作用,以2.5μg/ml剂量最为显著。选用人胃低分子化腺癌NMK细胞为靶细胞,以MTT试验测定其对人胃腺癌LAK杀瘤活性的影响。观察到,该剂量Lipostn与rIL-2(400U/ml)协同诱导的胃腺癌LAK杀瘤活性得到了显著增强,表现在维持同一水平的杀瘤活性下,Lipostn可以减少效应细胞的数量。

α-CD3单抗对肿瘤特异性T细胞的扩增及其杀瘤活性的影响

用α-CD3单抗激活FBL-3红白血病肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞获取肿瘤特异性T细胞，并观察α-CD3单抗对肿瘤特异性T细胞的增殖、杀瘤话性及表型变化的影响。研究采用四种不同的培养方案。(1)单独使用α-CD3单抗(CD3组)；(2)单独使用20U／ml rIL-2(IL-2组)；(3)使用α-CD3单抗48小时后仅加入20U/ml rIL-2(CD3^-IL-2组)

脐血及外周血中细胞毒性T细胞的体外诱导及杀瘤活性研究

目的 在体外研究卵巢癌细胞诱导脐血来源的CTL的扩增及其杀瘤活性。探索其用于卵巢癌过继免疫治疗的可行性。方法 从脐血中分离出单个核细胞 ,用不同剂量的SKOV 3细胞及IL -2刺激扩增 ;用FCM检测表型变化 ,MTT比色法检测其对SKOV 3及K 5 62的杀伤活性 ,并与用同样方法所得外周血来源CTL细胞相对照。结果 用 2× 10 6个 /ml的卵巢癌细胞可诱导脐血CTL细胞较高的杀伤活性为 5 3 .46%± 8.45 % ;诱导 10天后杀伤SKOV 3活性为 44 .0 9%± 6.95 % ,杀伤K 5 62的活性为41.0 3 %± 5 .79% ,CD3、CD4、CD 8及CD4/CD8值分别为 5 2 .0 0± 9.5 0、3 6.0 0± 4.80、3 8.0 0± 10 .2 0、1.10± 0 .40。结论 应用适当剂量的抗原可诱导较高活性的脐血源CTL 。

粒－巨细胞集落刺激因子对人胃腺癌TIL增殖及体外杀瘤活性的影响

粒－巨细胞集落刺激因子对人胃腺癌ＴＩＬ增殖及体外杀瘤活性的影响梁晓鸣陈子孝（江西省新余市人民医院内科新余３３６５００）胡国柱（江西省中医药研究所南昌３３０００６）ＧＭ－ＣＳＦ作为一种重要的造血生长因子，能刺激粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞增殖分化，此外...

人LAK细胞抗菌杀瘤活性多肽的分离纯化及初步鉴定

LAK细胞(Limphokine-activated killer cells)是淋巴细胞因子激活的杀伤细胞，用以过继免疫治疗晚期癌症为近年来肿瘤生物治疗法中引人瞩目的手段之一。但LAK细胞杀菌肿瘤的分子机制并不十分清楚。我们应用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳(AU-PAGE)方法，从植物血凝素和IL-2刺激的人外周血单个核细胞酸溶性提取物中，

胃癌相关抗原及其与自身CTL细胞增殖及体外杀瘤活性关系的研究

探讨胃癌相关抗原与胃癌患者自身ＣＴＬ细胞增殖及体外杀瘤活性的关系。方法生化方法提取胃癌相关抗原，体外协同ＩＬ－２培养淋巴细胞，ＭＴＴ法测定细胞增殖及杀瘤活性，ＦＣＭ仪检测细胞表型变化。结果１２例胃癌相关抗原阳性患者ＣＴＬ细胞增殖快于９例阴性患者，差异有极显著性（Ｐ＜０．００１）。Ｅ：Ｔ为８０：１时，前者体外杀瘤活性均值也大于后者（Ｐ＜０．０１），ＦＣＭ检测结果表明前者ＣＤ８及ＣＤ２５表达率也显著高于后者（Ｐ＜０．０１）。结论为解释胃癌等“不敏感群体”现象提供实验依据，提示该类抗原诱导的杀伤细胞可望用于胃癌临床免疫治疗；结合相关抗原筛查，可实施个体化免疫治疗。

参芪扶正注射液对脐血CIK细胞体外增殖及杀瘤活性的影响

目的观察参芪扶正注射液对脐血细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)体外增殖及杀瘤活性的影响。方法用脐血单个核细胞,诱导分化CIK细胞,分为4组。细胞因子组加入γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素1α(IL-1α)、白细胞介素2(IL-2)、CD3单抗细胞因子;参芪扶正注射液组:加入参芪扶正注射液;细胞因子+参芪扶正注射液组:加入参芪扶正注射液﹑IFN-γ、IL-1α、IL-2、CD3单抗细胞因子;对照组只加培养液。培养12天后CIK细胞达到增殖高峰期,用流式细胞仪检测细胞表型和增殖能力,MTT法检测CIK细胞对K562细胞的杀伤作用,ELISA法检测CIK细胞分泌的细胞因子IL-2、IFN-γ、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果对脐血CIK细胞体外增殖的影响,在培养12天时,参芪扶正注射液组与细胞因子组比较差异无统计学意义(P>0.05),细胞因子+参芪扶正注射液组与细胞因子组相比差异有统计学意义(P<0.01);CIK细胞对K562细胞的杀伤作用,各实验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),参芪扶正注射液组CIK细胞在12、16天时分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α因子水平优于对照组(P<0.01)。结论参芪扶正注射液对脐血CIK细胞既有显著的增殖和杀瘤作用,又可促进脐血CIK细胞分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α。

IL-12和IL-15对外周血CIK细胞增殖和对SMMC-7721肝癌细胞杀瘤效果研究

目的观察常规培养条件下添加白细胞介素(IL)-12、IL-15对细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞增殖的影响,观察不同细胞因子组合培养的CIK细胞的杀瘤作用,为高效率、高质量体外制备肿瘤患者自体CIK细胞制剂提供新思路。方法首先筛选出IL-2、IL-12、IL-15最佳添加水平;然后采集健康献血员外周血,分离出单个核细胞后,根据添加的细胞因子种类和组合类型进行分组:A组(IL-2常规培养组)、B组(IL-2^+IL-12组)、C组(IL-2^+IL-15组)、D组(IL-2^+IL-12^+IL-15组)、E组(细胞因子空白对照组);各组单个核细胞分别在培养第0、5、10、15、20天,采用全自动血球计数仪进行CIK细胞计数,锥虫蓝染法检测细胞活性,流式细胞技术检测细胞膜CD3、CD8、CD56阳性率,MTS法测定CIK细胞对肝癌SMMC-7721细胞的杀瘤效果。结果B、C、D组培养第10、15、20天后CIK细胞增殖倍数均明显高于A组(P<0.05);D组培养第10、15、20天CIK细胞增殖倍数均分别明显高于C组(P<0.05)。B、C、D组培养第15、20天CIK细胞膜CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+百分比均分别明显高于A组(P<0.05);D组培养第15、20天CIK细胞膜CD3^+CD8^+、CD3^+CD56^+百分比均分别明显高于B组(P<0.05)。在效靶比5∶1时,各组培养第10、15、20天的CIK细胞对肝癌SMMC-7721细胞的杀伤率均明显高于A组(P<0.05);D、C组培养第10、15、20天CIK细胞对肝癌SMMC-7721细胞的杀伤率分别明显高于B组(P<0.05)。结论 IL-12、IL-15均可促进CIK细胞增殖,IL-15在促进CIK细胞增殖的同时还能增强CIK细胞杀伤肝癌SMMC-7721细胞的活性。

经瘤苗刺激的肝癌TIL细胞的诱导及其体外抗肿瘤活性

目的 研究sTIL细胞的体外增殖动力学和细胞生物学特性及体外抗肿瘤活性。 方法 采用冷冻瘤苗刺激肝癌TIL细胞,研制具有较强的抗瘤活性的由瘤苗激活的杀伤细胞(sTIL),并与TIL比较。 结果 冷冻肝癌瘤苗在TIL的培养扩增过程中不断刺激,对保持TIL较长时期的增殖力和杀伤肿瘤细胞活性等生物学特性明显增强。sTIL细胞培养至d5即有较强的杀瘤活性。持续时间可>60d,而最佳杀瘤活性时间为20～40d,37℃和5%CO2条件下细胞存活率为98%以上。 结论 sTIL可能通过特异性的T细胞的增殖且分泌细胞因子来增强其杀瘤活性。

海参猴桃液辅以少量rIL-2对免疫杀伤细胞活性的正向调节研究

目的 :探讨用中药海参猴桃液 (SSAP)辅以基因重组人白细胞介素 2 (rIL -2 )体外培养扩增、激活免疫杀伤细胞LAK的机理 ,观察SSAP辅以少量rIL -2能否提高及在多大程度上提高LAK细胞的杀瘤活性。方法 :通过提取健康供血者的外周血单个核细胞作为待培养细胞 ,设空白对照组 (加等量生理盐水 )、阳性对照组 (1 0 0 0U/mlrIL -2 1ml)、实验 1组 (1 0 0 0U/mlrIL -2 0 .5ml +30 0 0 μg/mlSSAP 1ml)、实验 2组 (1 0 0 0U/mlrIL -20 .1ml+30 0 0 μg/mlSSAP 1ml) ,4组在不同条件下培养LAK细胞 ,分别用H -TdR释放法检定其体外对人肝癌BEF -740 4杀伤活性。结果 :30 0 0 μg/ml的SSAP +1 0 0 0U/mlrIL -20 .1ml在培养第 3天便能测出杀伤活性 ,第 9天达峰值 [杀瘤率 (75 .5± 1 3.6 ) % ],杀瘤活性与 1 0倍量rIL -2单独诱导激活的LAK细胞杀瘤活性相近 [杀瘤率 (92 .9± 2 1 .3) % ],两组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,而且杀瘤活性持续 1 8天。结论 :SSAP辅以少量的rIL -2能大量扩增激活LAK细胞 ,增强其对肿瘤细胞的杀伤力 ,更重要的意义在于获得的LAK细胞杀伤力强大而持久 ,同时可减少rIL

IL-2基因转染的人卵巢癌细胞对人外周血淋巴细胞杀瘤功能的影响

目的 :研究白介素 - 2 (interleukin- 2 ,IL - 2 )基因转染的人卵巢癌细胞对人外周血淋巴细胞 (peripheral bloodiymphocytes,PBL)杀瘤活性的影响。方法 :采用脂质体携带 IL- 2基因转染人卵巢癌细胞系 3AO细胞 ,与正常人 PBL 混合培养 ,利用 MTT法测定混合培养后 PBL对已转染 IL- 2基因的 3AO细胞抑制率。结果 :基因转染后 3AO细胞生长良好 ,光镜形态下未观察到凋亡改变 ;转染后的 3AO细胞转录并产生 IL - 2 m RNA;PBL对转基因 3AO细胞的抑制率明显高于无基因转染的 3AO细胞的抑制率 (P<0 .0 1)。结论 :IL- 2基因修饰的卵巢癌细胞能够改变淋巴细胞的功能而发挥其抗肿瘤作用。

干扰素对LAK细胞产生和杀瘤作用的影响

淋巴因子激活的杀伤细胞(Lymphokine-Activated Killer Cell,LAK)主要来自T淋巴细胞和自然杀伤细胞(Natural Killer Cell,NK),可从外周血、脾脏及骨髓等多种组织中诱生,具有广谱的MHC(主要组织相容性抗原)非限制性地体外杀瘤活性和良好的体内抗瘤作用,因而日益倍受人们重视。近年来的研究还发现,LAK细胞的诱生与杀瘤作用受多种因素的影响,其中免疫调节剂干扰素(Interferon,IFN)的调节作用更为引人注目。其调节方式。

细胞因子诱导的杀伤细胞联合其他方案治疗血液肿瘤研究进展

近年来．过继免疫治疗作为肿瘤治疗中的重要发展方向，逐渐受到重视。细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine—induced killer cells，CIK），因其增殖速度快，杀瘤活性高，副作用小。广谱等特点，已较为更多的应用在临床治疗中。CIK细胞具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和非主要组织相容性复合体限制性杀瘤的优点，在多种恶性血液病中得到应用。本文就以下几点进行综述。

LDH法检测新城疫病毒野生株与疫苗株对大肠癌的体外杀伤作用

目的比较新分离的新城疫病毒野生株(NDV7793、NDVD817)与疫苗株Lasota对大肠癌的体外杀伤作用。方法3株病毒作用于大肠癌细胞株LS174T和LOVO,用乳酸脱氢酶微量释放法测定病毒的杀瘤活性并通过测定培养上清液的血凝效价来检测病毒的增殖能力。结果3株新城疫病毒均可杀伤大肠癌细胞并可在其复制增殖,对正常大肠细胞无明显细胞毒性。而对正常大肠组织细胞未见明显影响(P<0.05);野生株对癌细胞的杀伤作用较强,72h后对LOVO细胞株的杀伤效应>90%;LOVO大肠癌细胞对NDV敏感性强于LS174T大肠癌细胞。结论3株NDV对大肠癌细胞均有选择性杀伤作用,野生株病毒的抑瘤效应强于疫苗株,对正常大肠组织无细胞毒性。

复方木鸡冲剂对荷瘤小鼠淋巴细胞功能的影响

目的:探讨复方木鸡冲剂对荷瘤小鼠淋巴功能的影响。方法:收集荷瘤小鼠的脾淋巴细胞,检测淋巴细胞的杀瘤活性、存活能力及分泌IL-2的情况,比较复方木鸡冲剂对荷瘤小鼠淋巴细胞的作用和影响。结果:与未给予复方木鸡冲剂处理组相比,复方木鸡冲剂能增强荷瘤小鼠淋巴细胞的杀瘤活性,提高淋巴细胞的存活能力,复方木鸡冲剂处理后淋巴细胞分泌IL-2明显增加。结论:复方木鸡冲剂能够增强荷瘤小鼠淋巴细胞的功能,刺激淋巴细胞分泌IL-2,以此影响机体的免疫功能和抗肿瘤。

新城疫病毒诱导人自然杀伤细胞杀伤喉癌细胞株Hep-2的体外研究

目的研究新城疫病毒(NDV)和紫外线灭活的新城疫病毒(NDV-UV)在体外诱导人外周血自然杀伤细胞(NK)对喉癌细胞株Hep-2的杀伤作用。方法用淋巴细胞分离液从外周血中分离单个核细胞,经贴壁黏附法去除Mφ,尼龙毛柱去除B细胞,补体裂解法去除T细胞,得到富集的NK细胞后,用NDV和NDV-UV分别诱导NK细胞16h作为效应细胞,Hep-2细胞作为靶细胞,然后用MTT法测定NK细胞杀瘤活性,并进一步比较NDV和NDV-UV对NK细胞杀瘤活性的影响。结果NDV和NDV-UV诱导的NK细胞对Hep-2细胞的杀伤率高于未诱导组(P<0.01),而NDV诱导组的杀瘤率高于NDV-UV诱导组(P<0.05),随着效应细胞数量增大,NK细胞杀瘤活性逐渐增强(P<0.01)。结论NDV和NDV-UV能在体外诱导人外周血NK细胞,使之杀瘤活性增强,NDV的诱导作用较NDV-UV强。