苦皮藤内生真菌中杀虫杀菌活性物质的初步研究

对杀虫植物苦皮藤植株中的内生真菌进行了研究。从苦皮藤根中和侧枝中分别分离得到24株和15株内生真菌,其中表皮层10株,韧皮部27株,木质部2株。对分离出的菌株进行液体培养,并对其发酵产物进行了杀虫和杀菌活性测定。以生物活性追踪为指导,对杀虫和杀菌成分分别进行了制备薄层分离和柱层析分离。生物活性测定结果表明,只有1B菌株菌丝体的丙酮粗提物对3龄粘虫有毒杀作用,在500μg/mL浓度处理下,24h后的死亡率为85.3%;在500μg/mL浓度处理下,1L,2B和5J3个菌株的发酵液和菌丝体粗提物对番茄灰霉病菌、小麦赤霉病菌、苹果炭疽病菌和玉米小斑病菌表现出了不同程度的抑制菌丝生长活性;其菌丝体粗提物对番茄灰霉病菌、玉米小斑病菌和烟草赤星病菌有明显的抑制孢子萌发作用,在盆栽试验中,对小麦白粉病和黄瓜霜霉病的盆栽防效均在50%以上;从1B菌株中分离到1个杀虫化合物1B-4;从1L菌株中分离出3个杀菌化合物1L-3,1L-6和1L-8,其中1L-6杀菌活性最高。

苦楝内生真菌及其代谢产物的杀虫活性

在对290株苦楝内生真菌分离纯化鉴定的基础上,研究了30株具有代表性的内生真菌及其代谢产物的杀虫活性。结果表明其中5个菌株对马尾松毛虫5d校正死亡率大于60%,杀虫活性最强的KL042菌株经鉴定为球孢白僵菌。球孢白僵菌作为内生真菌,在国内尚未见报道。进一步选取杀虫活性较强的9株内生真菌,研究其代谢产物的胃毒和触杀活性,结果表明拟青霉KL017菌株发酵液10倍浓缩液对柳蓝叶甲胃毒活性最强,48h校正死亡率达90.09%。球孢白僵菌KL042、拟青霉KL017和交链孢KL062发酵液10倍浓缩液点滴马尾松毛虫前胸背板后,48h校正死亡率分别为76.67%、56.67%和53.33%。

代谢产物具杀虫活性的红树林真菌1893菌株培养条件的研究

本课题组从香港海域红树林中筛选获得的一株真菌菌株,代号1893,初步研究发现其粗提物对许多重要害虫具有很高的毒杀活性,具有开发成新型杀虫剂的良好前景。为得到该菌株产生较高杀虫活性物质的最佳培养条件,采用单因素法对影响其生长和所产代谢产物活性的温度、起始pH、发酵时间、装液量等因素进行了测定,利用SAS软件进行模拟优化,得出该真菌的最适发酵条件为:温度26.8℃,起始pH6.5,培养时间17天,当在500mL三角瓶中接种生长一致的直径5mm菌饼一块时,其装液量以200mL为最佳。同时发现发酵液pH值和杀虫活性具有相同的变化趋势,二者的相关性系数R2达到0.93972,由于pH值的检测要比杀虫活性的检测简单快捷得多,建议在实际培养该菌的过程中,可以通过检测发酵液的pH值来预估发酵液的杀虫活性大小。该研究为进一步将红树林真菌1893研发成高效、广谱、无公害、低成本的新型海洋生物杀虫剂打下基础。

一株虫生真菌杀线虫活性代谢产物的分离与结构鉴定

以生物活性为导向,利用硅胶、凝胶柱层析法以及高效液相色谱等技术对一株虫生真菌拟青霉菌Paecilomycessp.的活性次生代谢产物进行了研究。从其活性组份中共分离得到2个杀线虫活性次生代谢产物,经质谱和核磁共振等波谱分析方法鉴定其结构分别为脑苷酯类化合物Cerebroside A(1)和Cerebroside B(2)。活性测定结果显示,这2个化合物均具有杀松材线虫Bursaphelenchus xylophilus活性,其中化合物1在质量浓度分别为1000,100和10μg/mL下对松材线虫的致死率分别为100%,100%和11.1%。

南极生境真菌Gliocladium catenulatum T31菌株杀虫活性的研究

本文对影响南极生境真菌Gliocladium catenulatum T31生长和杀虫活性的初始pH值、发酵时间、培养温度等影响因子进行了研究。并以小菜蛾为试虫,以校正死亡率为评价指标,利用微型平板法对真菌T31的杀虫活性进行测试,发酵液杀虫活性最高为60.42%。发酵物乙酸乙酯提取后,丙酮溶解0.33mg/mL浓度下,发酵液提取物杀虫活性最高为82.05%,菌体提取物杀虫活性为76.92%。盆栽试验证明该菌株发酵液对小菜蛾第7d的虫口减退率为54.2%。

历山国家级自然保护区虫生真菌资源及杀虫活性研究

对地处山西东南部的历山国家级自然保护区的虫生真菌种类资源及其杀虫活性作了初步的研究。共分离鉴定真菌 3目 13属 19种 ,2种为山西特有种 ,其中的丝孢目真菌为该地区的优势种群。选取其中的多形白僵菌和印度轮枝菌 ,分别对林业害虫杨二尾舟蛾、杨梢叶甲幼虫进行杀虫活性试验 ,多形白僵菌的平均杀虫效果高于印度轮枝菌 16 .4 %。

具杀螺活性的商陆根际真菌Aspergillus fumigatus SL-30发酵条件优化

以杀螺率为响应值,对商陆根际真菌菌株SL-30的发酵条件进行优化。在前期单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman设计法,对影响菌株发酵滤液杀螺活性的主要因素进行筛选,确定了三个主要因素依次为可溶性淀粉,蛋白胨和初始pH。采用响应面分析法确定了以上三个显著因子的最佳水平分别及交互影响,结果显示,三个显著因素的最佳水平为可溶性淀粉16.40 g/L,蛋白胨3.76 g/L,初始pH 3,该条件下发酵滤液的杀螺活性预测值达98.949%。经六批次的发酵验证,预测值与试验平均值接近。

植物内生真菌杀螺活性菌株筛选

分别从醉鱼草和水菖蒲中分离出99、103株内生真菌,按照WHO杀螺剂浸泡试验法观察不同内生真菌以及不同浓度发酵液杀螺效果,用河虾急性毒性试验评价其对非靶水生生物毒性。结果表明LL3026、S38、S21菌株发酵液有较高的杀螺活性,发酵液浓度为10%时,钉螺死亡率为100.0%;对河虾急性毒性较小。

一株虫生真菌的分离鉴定及杀虫活性初探

[目的]为虫生真菌在害虫防治中的应用提供参考。[方法]以从罹病昆虫体表分离的虫生真菌Ekks1为供试菌种,对其进行形态鉴定;以ITS4和ITS5为引物,对Ekks1的ITS序列进行PCR扩增、电泳检测和序列分析,并检测Ekks1对小菜蛾和豆蚜虫的杀虫效果。[结果]经形态鉴定,Ekks1为半知菌亚门,丝孢纲,丝孢目,丝孢科,白僵菌属,球孢白僵菌(Beauveria.bassiana);经PCR扩增,成功获得了Ekks1菌株的ITS1-5.8s-ITS5 rDNA序列,经分析,ITS1-5.8s-ITS5序列为555 bp,菌株Ekks1与GenBank中B.bassiana(EF672309)的同源性为99%;菌株Ekks1在孢子浓度为1.5×107个/ml时,感染8 d后小菜蛾的校正死亡率为76%,感染72 h后豆蚜虫的校正死亡率为61%。[结论]Ekks1为白僵菌属真菌,其孢子浓度为1.5×107个/ml时,对小菜蛾和豆蚜虫均具有一定的致死效果。

大叶醉鱼草内生真菌LL3026菌株杀虫活性及ITS-5.8S rDNA序列分析

从大叶醉鱼草的叶子中分离得到一株内生真菌LL3026,以卤虫模型测稀释后发酵液的杀虫活性,结果表明LL3026发酵液杀虫活性较强,且温度、光照及紫外照射对LL3026发酵液杀虫活性影响不显著;采用分子生物学方法对LL3026菌株rDNA的ITS基因(ITS-5.8S rDNA)进行PCR扩增、测序,构建系统发育树。ITS基因显示其属于刺盘孢属真菌。

不同培养条件下红树林真菌1893菌株代谢产物的杀虫活性

本文以白纹伊蚊Aedes albopictus幼虫为试虫,以校正死亡率为指标,采用单因素法和正交设计法,对红树林真菌1893的营养条件进行了筛选,以期获得高活性的代谢产物。结果表明:以蔗糖10g、酵母膏4g、粗海盐6g、MgSO4.7H2O1g、蒸馏水1000mL,pH6.5为培养条件时,代谢产物的相对效价最高,浓度为15mg/mL的代谢产物对3龄白纹伊蚊幼虫的毒杀死亡率达到了90.25%。

丝孢纲7个真菌属菌株发酵产物杀虫活性的初步研究

本文报道丝孢纲 7个真菌属菌株发酵产物对棉蚜和其中 5个真菌属菌株发酵产物对大豆二斑叶螨杀虫活性的研究。用水培棉苗法培养棉蚜 ,盆栽大豆培养二斑叶螨 ,采用菌株发酵产物浸渍法进行生物测定。结果表明 :受试菌株发酵产物对棉蚜防效均高于对照 ,其中单格孢菌 (Ulocadium)、链格孢菌 (Alternaria)、匍柄霉菌 (Stemphylium)的防效较稳定 ,蠕孢霉菌 (Helminthoid)和皮司霉菌 (Pithomyces)的防效次之 ,弯孢霉菌 (Bipaloria)和附球菌 (Epicoccumnigrum)的防效不稳定。其中除附球菌和皮司霉菌以外的 5个真菌属菌株发酵产物对二斑叶螨也有杀虫活性 ,但防效不稳定。

1株间座壳属真菌抗松材线虫的活性

筛选对松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)有致死作用的内生真菌。从苦楝(Melia azedarach)健康组织(茎、叶、果实)中分离纯化内生真菌,菌株采用摇瓶培养,发酵液和菌丝体分别用乙酸乙酯萃取制备胞外和胞内代谢产物,采用浸渍法进行杀线虫活性筛选。共计分离纯化31株内生真菌,其中菌株J352-03的发酵液对松材线虫有显著的毒杀活性,在2 mg·mL^(-1)质量浓度下处理48 h,菌株J352-03胞内、胞外的次生代谢产物对松材线虫校正死亡率均达到100%,LC50值分别为0.46 mg·mL^(-1)、0.42 mg·mL^(-1);对松材线虫卵的孵化抑制率分别为66.54%、76.04%,松材线虫体内三磷酸腺苷酶(ATP酶)、过氧化氢酶(CAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著低于对照组。菌株J352-03经形态学与rDNA-ITS序列分析鉴定为间座壳属一未知种Diaporthe sp.。综上所述,菌株J352-03对松材线虫有良好的生防潜力,具有进一步深入研究和开发利用的前景。

六株牛蒡共生真菌的杀虫活性

为了进一步开发和利用滨海植物牛蒡(Arctium lappa)的生物资源,寻找新型微生物农药,对来自牛蒡的6株共生真菌NY-2,NY-3,NY-4,NY-5,NY-6和NG-1的菌丝体和发酵液分别进行了对卤虫(Brine shrimp)杀虫活性的研究。结果表明:杀虫实验24h后,6株共生真菌的菌丝体和发酵液的乙酸乙酯提取物均表现出不同强度的杀虫活性,随着加样浓度的增加,卤虫死亡率也随之提高。6株共生真菌的菌丝体/发酵液对卤虫的半数致死浓度(LD50单位:mg·mL-1)分别是0.476 2/0.116 8,0.477 9/0.068 7,0.685 1/0.254 4,0.090 8/0.028 5,0.312 7/0.190 5,0.662 3/0.085 8;经与3种常见化学农药氯氰菊酯、敌敌畏和氧乐果的杀虫活性对比,6株真菌的杀虫活性全部优于以上3种农药,特别是NY-5发酵液的LD50仅为0.028 5mg·mL-1,其杀虫活性是农药对照组活性最好的敌敌畏的21倍。牛蒡的共生真菌是一个良好的微生物农药的生物来源。

一株具有杀松材线虫活性海洋真菌的筛选和初步鉴定

为了从分离得到的海洋真菌中筛选并鉴定具有杀松材线虫活性的菌株,本文采用稀释涂布平板法对采自青岛近海海域样品中的真菌进行分离,使用浸渍法对菌株的培养滤液和菌丝破碎液进行杀松材线虫活性测定,同时根据菌落形态、大小、色泽等特点的不同,经进一步纯化得到6个纯菌株,对这些菌株进行杀线活性测定,经初步筛选得到2株具有较强杀线活性的菌株,菌株HZ-1-1处理28h时杀线活性最高,其培养滤液和菌丝破碎滤液的线虫校正死亡率分别达到72.6%和84.1%;菌株HZ-1-2处理32h时杀线活性最高,其培养滤液和菌丝破碎滤液处理的线虫校正死亡率分别为46.3%和58.8%。选出活性表现最强的菌株HZ-1-1进行后续实验。实验结果表明,菌株HZ-1-1为轮枝孢属(Verticillium)的真菌。本研究对由松材线虫引起的松树萎蔫病的生物防治具有重要的理论意义。

一株具有杀虫活性真菌的筛选及活性物质稳定性研究

以卤虫为初筛指示虫,以蚜虫为复筛指示虫,从广西玉林土壤分离筛选出具有杀虫活性的菌株YLZ42。根据培养特征、形态特征及18S rDNA、ITS序列分析,菌株YLZ42被鉴定为淡色生赤壳菌(Bionectria ochroleuca)。生物测定结果表明,YLZ42发酵液的乙酸乙酯萃取物对小菜蛾、棉铃虫、甜菜夜蛾具有明显的毒杀活性,其校正死亡率在78.9%以上。YLZ42发酵液稳定性研究表明,其活性成分在100℃处理60 min,pH1-11条件下仍具有较强的杀虫活性。

雷公藤等10种植物分得49种内生真菌的发酵提取物杀虫活性研究

目的:从植物源内生真菌提取物中筛选杀虫活性较高菌株,获得高效的植物源杀虫剂。方法:组织切片法、平板划线法、小型发酵、萃取、回流提取、玻片浸渍法、点滴法。结果:经初筛、复筛测定了10种植物分得49种内生真菌的71个发酵提取物的杀虫活性,表明各种提取物对朱砂叶螨、桃粉蚜均有不同程度的触杀作用,其中乌头中分得的内生真菌发酵提取物活性相对较高,有6株内生真菌(0.5 mg/m L)对朱砂叶螨的24 h致死率接近50%。在供试的提取物中,WT-S-18对朱砂叶螨有较强的杀虫活性,其48 h的LD50计算值为0.418 2 mg/m L。结论:该研究为进一步纯化新型植物源杀虫物质并确定其分子结构提供了实验依据,从而为开发其应用前景及发现新的杀虫活性先导化合物奠定了基础。

2-芳基-4-取代喹啉类化合物的抗真菌活性和作用机制研究

目的开发新型抗真菌药物以解决深部真菌感染发病率和死亡率高、抗真菌药物出现耐药性的临床问题。方法采用抗真菌药敏实验对内部化合物库进行活性筛选,进一步通过微量液基稀释法考察阳性化合物的抗真菌谱;通过生长实验、时间杀菌曲线实验评价阳性化合物对真菌存活的影响;通过倒置显微镜观察化合物对真菌菌丝形成的影响;采用流式细胞仪检测化合物对真菌细胞内活性氧(ROS)生成、生物膜通透性和凋亡的影响。结果2芳基4取代喹啉类化合物J6抗真菌活性最优,对白念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、新生隐球菌的最小抑菌浓度分别为18.9、18.9、37.8、37.8 mg/L。J6能明显抑制这4种真菌的生长,甚至对新生隐球菌表现杀菌作用。此外,J6还能抑制真菌菌丝的形成。作用机制研究显示,J6可增加真菌细胞膜通透性和细胞内ROS水平,诱导真菌细胞发生凋亡。结论2芳基4取代喹啉类化合物J6表现出较好的抗真菌活性,对其进一步结构优化和机制研究,有望发现新型的抗真菌药物。