化疗,是如何灭杀癌细胞的

化疗,作为癌症综合治疗的核心组成部分,是众多癌症患者无法回避的治疗手段。尽管“化疗”二字常令患者及家属心生畏惧,导致部分患者因恐惧而忽视其治疗效果,进而延误病情,但实际上,化疗远非人们想象中的那般无用或有害。相反,它是一种能够有效延长患者生命的治疗方法。

C5aR在金黄色葡萄球菌LukS-PV诱导非小细胞肺癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨金黄色葡萄球菌杀白细胞素S组分(LukS-PV)通过活化补体5受体(C5aR)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549和H460凋亡的影响。方法:将敲低C5aR表达的慢病毒载体转染至A549和H460细胞中,qRT-PCR和Western blot检测C5aR敲低率,Annexin V/PI染色法检测敲低C5aR对细胞凋亡的影响。对敲低C5aR的细胞再加入LukS-PV,通过Annexin V/PI染色法和凋亡相关蛋白检测细胞凋亡情况。结果:与PBS对照组相比,LukS-PV可促进A549和H460细胞凋亡(P<0.05)。慢病毒载体转染A549和H460细胞敲低C5aR后,细胞C5aR表达水平降低(P<0.05)。在敲低C5aR基础上再加入LukS-PV,细胞凋亡受到抑制(P<0.05)。结论:敲低C5aR可抑制LukS-PV诱导NSCLC细胞的凋亡。

Panton-Valentine杀白细胞素原核表达、纯化及生物学活性鉴定

目的原核表达金黄色葡萄球菌Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)蛋白,并进行生物学活性鉴定。方法提取PVL阳性金黄色葡萄球菌DNA,利用PCR扩增LukF-PV和LukS-PV编码基因,亚克隆入表达载体pET28 a,转化入大肠埃希菌(E.coli)BL21株,经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,纯化后获得可溶性的蛋白,Western blot对其鉴定。并以人多形核粒细胞(PMNs)为靶细胞检测其生物学活性。结果成功构建了LukF-PV和LukS-PV基因的表达载体,经IPTG诱导和亲和层析纯化法获得重组蛋白,Western blot鉴定证实其为重组PVL蛋白。实验表明该蛋白具有诱导人多形核粒细胞(PMNs)凋亡的作用。结论成功地表达获得了具有生物学活性的PVL重组蛋白,为PVL快速检测方法的建立和致病机制研究奠定基础。

Panton-Valentine杀白细胞毒素(PVL)lukS-PV基因的克隆、原核表达及初步鉴定

目的构建Panton-Valentine杀白细胞毒素(PVL)lukS-PV基因表达载体,并在大肠杆菌中表达相应蛋白。方法提取PVL阳性金黄色葡萄球菌的基因,PCR方法扩增lukS-PV,A-T克隆至pGEM-T载体上,经PCR、双酶切和测序鉴定后,亚克隆到pET28a(+)表达载体上,鉴定并转化至Rosetta(DE3)plys表达宿主菌中,用IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE电泳分析和Western blot鉴定。结果构建了lukS-PV-pGEM-T和lukS-PV-pET28a(+)重组质粒,经PCR扩增和限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切均得到939bp的目的片段,基因测序与GENEBANK中的PVL的序列一致,宿主菌表达带HIS标签的重组LukS-PV蛋白。结论成功克隆lukS-PV基因和构建重组表达质粒,并在宿主菌中成功表达重组LukS-PV蛋白,为PVL免疫学检测方法的建立奠定基础。

金葡菌P-V杀白细胞毒素的原核表达及对人多形核白细胞的杀伤效应(英文)

目的:通过基因工程方法获得重组的杀白细胞毒素,为深入研究其致病机制打下基础。方法:利用PCR方法从产杀白细胞毒素金葡菌临床分离株的基因组DNA中克隆PVL-S和PVL-F基因序列,分别将其克隆到载体pET22b中,构建重组pET22b-LuKS和pET22b-LuKF原核表达载体,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,异丙基硫代β-D半乳糖苷(sopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,将其可溶性表达经镍离子螯合亲和层析纯化后,通过对外周血粒细胞和多形核白细胞的刺激反应鉴定其活性。结果:以PCR方法获得PVL-S和PVL-F基因片段,与克隆载体连接后测序与文献报道的基本一致,成功构建了pET22b-LuKS和pET22b-LuKF原核表达质粒,并高效诱导表达出相对分子质量约34 kD的S蛋白及相对分子质量约35 kD的F蛋白。重组蛋白(rPVS,rPVF)在37℃经IPTG诱导时均以包涵体形式存在,而30℃时部分出现可溶性表达,部分为包涵体。将上清可溶性重组蛋白作用于外周血粒细胞,可导致粒细胞出现凋亡,部分出现坏死。结论:成功构建了表达载体pET22b-LuKS和pET22b-LuKF,对其编码的S片段和F片段进行了原核表达和鉴定,高效表达了杀白细胞毒素的S和F两类蛋白,为进一步对其致病机制和免疫原性的研究奠定基础。

杀白细胞素pvl基因阴性MRSA对抗菌药物的耐药性研究

目的研究杀白细胞素(PVL)pvl基因阴性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)对多种抗菌药物的耐药性。方法采用头孢西丁纸片扩散法检测MRSA;用聚合酶链反应(PCR)检测m ecA基因及pvl基因;采用琼脂稀释法测定金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度(M IC)并检测pvl基因阴性MRSA对12种抗菌药物的耐药性。结果 71株金黄色葡萄球菌中检测出33株pvl基因阴性MRSA,检出率为46.4%(33/71);对青霉素类抗菌药物的耐药率为100.0%;对其他类抗菌药物呈多重耐药并以ECLOTGMP为主要耐药模式,占66.7%(22/33);未发现对达托霉素、替考拉宁和万古霉素耐药的菌株。结论医院感染中以pvl基因阴性MRSA为主,并呈现多重耐药;pvl基因阴性MRSA主要耐药模式为对红霉素、环丙沙星、克林霉素、苯唑西林、四环素、庆大霉素、复方磺胺甲口恶唑和青霉素耐药,是主要流行株,要谨慎使用以上8种抗菌药物。

我国各地区18所教学医院金葡菌临床分离株杀白细胞毒素基因检测及分子流行病学调查

目的研究我国多所医院临床分离金葡菌中杀白细胞毒素(PVL)分布特征及与临床疾病的关系。方法对18所教学医院临床分离809株金葡菌进行PCR检测PVL基因,PVL阳性菌株经纸片扩散法检测MRSA表型,mecA^femB双重PCR确证MRSA基因型,并对PVL阳性的MRSA进行SCCmec分型,脉冲场凝胶电泳(PFGE)法对PVL阳性的MRSA进行同源性分析。结果809株金葡菌中58株(58/809,7.2%)携带PVL基因。沈阳检出率较高,其次为武汉,与其他医院差异有统计学意义(P<0.05);PVL阳性的MRSA15株(15/407,3.5%),MSSA43株(43/402,11.1%),差异无统计学意义(P>0.05);PVL阳性的门诊菌株7.9%(5/63),住院6.9%(53/746),差异无统计学意义(P>0.05)。PVL阳性的MRSA经SCCmec分型,Ⅱ型3.8%(2/53),Ⅲ型4.7%(12/258),未分型1.0%(1/104),差异无统计学意义(P>0.05)。PVL阳性的MRSA经PFGE后,A克隆株73.3%(11/15);B克隆株13.3%(2/15);C克隆株6.7%(1/15);D克隆株6.7%(1/15),差异有统计学意义(P<0.05)。结论PVL可以引起严重感染,及时进行检测并做同源性分析,采取有效的措施控制医院感染的暴发。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因检测与耐药性分析

目的采用实时荧光PCR检测耐甲氧西林金葡菌(MRSA)杀白细胞素(PVL)基因,并分析其对抗菌药物敏感性,指导临床合理用药。方法采用双重实时荧光PCR技术对血液和脓液分离的40株MRSA进行PVL基因检测,并对PVL基因阳性菌株感染患者的临床资料进行分析;VITEK2-compact全自动微生物测试仪进行药敏试验。结果 40株MRSA检出7株PVL基因阳性,阳性率17.5%,PVL基因阳性菌株所致的感染分别为坏死性皮肤软组织感染3例,血流感染3例和乳腺脓肿1例。MRSA携带或不携带PVL基因菌株的药敏试验结果有所不同,未检出对万古霉素不敏感菌株。结论 MRSA携带或不携带PVL基因对抗菌药物敏感性有差异,本地区MRSA-PVL基因阳性率较高,应加强监测。

国内杀白细胞素阳性金黄色葡萄球菌感染的研究现状

金黄色葡萄球菌是临床引起感染性疾病最常见的病原菌之一，它的致病性与其携带的多种毒素因子有关。携带毒素因子的金黄色葡萄球菌毒力更强，与感染后疾病的严重程度呈正相关，产毒素菌株所造成的感染重、病程长，加大治疗难度和护理难度，同时增加了患者的痛苦和经济负担。杀白细胞素（PVL）是金黄色葡萄球菌产生的一种重要外毒素，

杀白细胞毒素基因阳性MRSA的临床和实验研究

目的了解2003—2006年我院MRSA临床分离株中杀白细胞毒素(PVL)基因的分布、SCCmec分型、药物敏感性及其临床特征。方法对2003年1月至2006年12月我院1 366株MRSA临床分离菌株,用PCR方法筛选PVL基因阳性菌株,用多重PCR方法进行SCCmec分型;并进行回顾性研究,分析PVL基因阳性及阴性株所致感染的临床特点及相关危险因素;用琼脂稀释法测定其对临床常用抗菌药的敏感性(MIC)。结果在1 366株MRSA菌株中共筛出5株PVL基因阳性菌株,阳性率为0.37%。50株MRSA临床分离菌株中,SCCmecⅠ型1株,占2%(1/50);SCCmecⅡ型26株,占52%(26/50);SCCmecⅢ型16株(其中包括SCCmecⅢA1株),占32%(16/50);SCCmecⅣ型1株,占2%(1/50);SCCmecⅤ型2株,占4%(2/50);4株(8%)未能分型。5株PVL基因阳性株中SCCmecⅢ型1株,SCCmecⅣ型1株,SCCmecⅤ型2株,未分型1株。MIC结果显示PVL基因阳性株较阴性株对多种非β内酰胺类抗生素更为敏感,未发现万古霉素不敏感菌株。该5株PVL阳性菌株所致感染分别为皮肤软组织感染2例、肺部感染2例和尿路感染1例。结论PVL基因阳性MRSA已在我院检出,应加强医院感染控制防治其播散流行。

杀白细胞素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性分析

目的了解杀白细胞素(PVL)基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药情况,指导临床合理用药。方法对临床收集的47株PVL基因阳性MRSA采用PCR法检测PVL基因,采用纸片扩散法进行药敏试验,并对结果进行分析。结果 47株MRSA的PVL基因检出率为46.8%,PVL基因阳性、阴性MRSA对β-内酰胺类抗菌剂均100.0%耐药,PVL基因阳性MRSA对氨基糖苷类、利福平、四环素、红霉素、环丙沙星、亚胺硫霉素等抗菌剂全部耐药,对盐酸克林霉素的耐药率为95.5%;PVL基因阴性MRSA对上述抗菌剂的耐药性虽比PVL基因阳性MRSA轻,但耐药率也在88.0%以上,2组间耐药性比较,差异有统计学意义(P<0.05)。对复方新诺明敏感率在90.0%以上,未发现对万古霉素耐药株。结论 PVL基因阳性MRSA在临床检出率已较高,耐药性严重并呈多重耐药特征,增加了临床抗感染治疗的难度。

金黄色葡萄球菌所致肺部感染的耐药特点及其Panton-Valentine杀白细胞素基因的携带状况分析

目的分析金黄色葡萄球菌所致肺部感染的耐药性特点及其Panton-Valentine杀白细胞素基因的携带状况。方法回顾性调查了温州医学院第一附属医院2005年1月至2006年1月医院感染的金黄色葡萄球菌所致肺部感染患者132例,对其体外药敏试验进行分析;并利用多重PCR检测其PVL基因,应用多位点基因序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术对PVL基因阳性的菌株进行序列分型。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的SCCmec基因分型采用多重聚合酶链反应。结果致肺部感染的132株金黄色葡萄球菌的耐药现象较为严重,仅对万古霉素、呋喃妥因及复方新诺明等药物的敏感率较高;其中经多重PCR筛选出10株携带PVL基因的金葡菌,全部为MRSA菌株,3株为ST239-SCCⅢ,2株为ST398-SCCmecⅢ,2株为ST398-SCCmecⅣ,ST25-SCCmecⅢ、ST59-SCCmecⅠ和ST88-SCCmecⅢ各1株。结论肺部感染的金黄色葡萄球菌对多种抗生素耐药,呈多重耐药性;其携带PVL基因占一定比例。

MRSA杀白细胞素基因检测和SCCmec分子流行病学调查

目的了解我院临床分离的耐甲氧西林金葡菌(MRSA)葡萄球菌染色体mec基因盒(sta phyloccoccal cassette chromosomemec,SCCmec)的分布和杀白细胞毒素(Panton-Valentine Leukocidin,PVL)基因的携带状况。方法收集我院2005年10月—2006年6月从临床标本中分离的30株MRSA(mecA基因阳性)。运用多重PCR检测SCCmec的基因型和亚型;PCR扩增PVL基因;纸片扩散法检测MRSA对10种抗菌药物的耐药性。结果30株MRSA中,SCCmecⅡ型6株(20.0%);SCCmecⅢ型15株(50.0%);SCCmecⅣa型1株和SCCmecⅤ型2株。6株MecA基因阳性菌株未能分型。PVL总阳性率36.7%(1 1/30),其中SCCmecⅡ1株、SCCmecⅢ5株、SCCmecⅣa 1株,SCCmecⅤ2株、未分型2株。SCCmecⅡ型和SCCmecⅢ型菌株除对β内酰胺类抗生素耐药以外,对其他抗菌药物呈现多重耐药。SCCmecaⅣa和SCCmecⅤ型的菌株除对β内酰胺类抗生素耐药以外,对其他类抗菌药物均敏感。结论我院临床分离MRSA的SCCmec型别主要以SCCmecⅢ和SCCmecⅡ为主;PVL基因的阳性率较高;携带SCCmecⅡ和SCCmecⅢ的MRSA对抗菌药物呈现多重耐药现象。

杀白细胞毒素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的红霉素耐药基因的检测

目的了解杀白细胞毒素(PVL)基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MR-SA)的红霉素耐药基因(ermA/B/C)检出情况。方法收集2007年1月—2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者的MRSA 45株,采用聚合酶链反应对45株MRSA的ermA/B/C和PVL基因进行检测,分析PVL基因阳性MRSA的ermA/B/C检出率。结果45株MRSA中有33株检出ermA/B/C,检出率为73%(33/45);有12株检出PVL基因,检出率为27%(12/45);12株PVL基因阳性MRSA中有9株检出ermA/B/C,检出率为75%(9/12);33株PVL基因阴性MRSA中仅24株检出ermA/B/C,检出率为73%(24/33)。结论PVL基因阳性与PVL基因阴性MRSA的ermA/B/C检出率基本一致,MRSA的重要致病基因——PVL的产生可能与红霉素耐药基因ermA/B/C无关。

金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素对THP-1巨噬细胞活性及凋亡/坏死的作用

目的探讨金黄色葡萄球菌PV-杀白细胞素(PVL)对THP-1巨噬细胞活性及凋亡/坏死的作用。方法采用CCK-8比色法检测重组PV-杀白细胞素(rPVL)对THP-1巨噬细胞活性的影响;应用流式细胞仪检测THP-1巨噬细胞凋亡/坏死率;用Western blot法检测rPVL刺激THP-1巨噬细胞NF-κB的蛋白表达。结果随着rPVL对THP-1巨噬细胞作用的浓度和时间的增加,细胞活性进行性下降,在低浓度(5 nmol/L rPVL)以凋亡为主,在高浓度(40 nmol/L rPVL)以坏死为主,且具有时间依赖性。NF-κB的蛋白在高浓度(40 nmol/L rPVL)刺激下活化,2 h量表达最大,具有时间依赖性。结论 rPVL对THP-1细胞有毒性作用,低浓度诱导其凋亡、高浓度促进坏死,并能活化NF-κB的蛋白。

金黄色葡萄球菌Panton-Valentine杀白细胞素的研究进展

由金黄色葡萄球菌产生的Panton-Valetine杀白细胞素可导致白细胞凋亡和坏死,已成为该细菌的一个致病因素。临床发现由PVL阳性金黄色葡萄球菌所致的感染病情复杂,死亡增多。针对目前PVL的分子生物学特点、作用机制、靶细胞、临床分布及意义的研究进展进行了综述。

金黄色葡萄球菌杀白细胞素的研究进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA）普遍存在,是导致医院和社区感染的重要病原菌。MRSA最早出现在医院内呼吸道感染中,随着时间的推移,逐渐向院外扩散,社区相关性MRSA（communityassociated MRSA,CA-MRSA）成为院外感染的重要病原菌。有研究者发现,几乎所有CA-MRSA存在杀白细胞素（pantonvalentine leucocidin,PVL）[1-4]。

老年病房耐甲氧西林金黄色葡萄球菌葡萄球菌染色体mec基因盒基因型和杀白细胞素基因的检测及特点

目的了解复旦大学附属华东医院老年科临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)葡萄染色体mec基因盒(SCCmec)的分布和杀白细胞毒素(PVL)基因的携带状况。方法收集复旦大学附属华东医院老年科病房2011年2—7月从临床标本中分离的不重复MRSA共57株。运用多重聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌16SrRNA基因、PVL基因和mecA基因,并同时检测SCCmec的基因型及亚型。采用琼脂稀释法进行13种药物的药物敏感试验。结果 57株MRSA中,SCCmecⅠ型1株(1.8%),SCCmecⅠA型5株(8.7%),SCCmecⅡ型30株(52.6%),SCCmecⅢ型15株(26.3%),SCCmecⅢA型2株(3.5%),4株(7.0%)未能分型。57株MRSA中,PVL基因均为阴性。MRSA菌株最敏感的药物为万古霉素和利奈唑胺(敏感率均为100.0%),其次为呋喃妥因和甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑(98.2%、96.5%)。结论复旦大学附属华东医院老年科临床分离的MRSA呈多重耐药,其SCCmec型别主要以SCCmecⅡ型和SCCmecⅢ型为主,未发现PVL基因阳性菌株。

黄芪多糖脂质体激活巨噬细胞杀瘤细胞形态学观察

应用黄芪多糖＜ＡＰＳ＞和ＡＰＳ脂质体对肝癌患者腹水中的巨噬细胞＜Ｍ＞进行体外激活，以人肝癌细胞株为靶细胞，光镜下观察凋谢细胞数目。ＡＰＳ１００μｇ／ｍｌ时凋谢细胞１５．７４±１．０４％，ＡＰＳ脂质体１μｇ／ｍｌ时为５０．１３±２．１７％。电镜下见经激活处理的Ｍ能使靶细胞核破碎，呈现大量凋谢小体。未经激活处理的Ｍ不能引起靶细胞这些改变。结果表明，ＡＰＳ和ＡＰＳ脂质体可有效地激活Ｍ，后者通过凋谢方式使肿瘤细胞死亡。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的红霉素耐药基因和杀白细胞基因的检测

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)红霉素耐药基因和杀白细胞毒素基因的检出情况。方法收集MRSA 45株,采用聚合酶链式反应对45株MRSA的红霉素耐药基因ermA/B/C和杀白细胞毒素基因(PVL)进行检测。结果45株MRSA中有33株检出红霉素耐药基因,检出率为73.3%;有12株检出杀白细胞毒素基因,检出率为26.7%。结论在红霉素耐药基因ermA/B/C多重耐药的MRSA中检出率较高,是MRSA对大环内酯类抗生素耐药的主要机制;PVL基因检出率较高,是MRSA的重要致病因子。