具杀线虫活性的苏云金杆菌筛选研究

Bioassay of 51 strains of Bacillus thuringiensis to Bursaphelenchus xylophilus had been studied in laboratory. Two of them had higher toxicity to B. xylophilus. Extraction of endotoxin and exotoxin of the two isolates to B. xylophilus showed the action of exotoxin higher than that of endotoxin.

产杀虫活性物质海洋放线菌的筛选和初步鉴定

从浙江宁波海域的滩涂泥样中分离到54株海洋放线菌,用卤虫液体测定法进行了杀虫活性菌株的筛选,结果显示多株放线菌具有较高的杀虫活性,菌株XS902,XS904,BL803,BL807对卤虫的ID50高达100以上。同时研究了XS904活性菌株的形态培养特征和生理生化特征,初步鉴定该菌株属于链霉菌属。

一株杀虫抗生素产生菌的筛选、鉴定及活性物质稳定性研究

通过卤虫初步筛选及家蚕复筛,从土壤中筛选到一株产高杀虫活性物质菌株GX-29。根据其理化特征及16SrDNA序列分析结果,确认该菌株为极暗黄链霉菌(Streptomyces fulvissimus)。利用卤虫活性追踪对其活性物质稳定性进行初步研究,结果表明温度、紫外线对其杀虫活性影响不显著;中性及偏碱性条件下,其杀虫活性稳定。

具有杀虫活性的海洋微生物的筛选

以棉铃虫(H.armigera)为初筛试虫,采用常规浸虫和微型筛选法测定采自中国海域的908株海洋微生物的杀虫活性,获得了14株具有杀虫活性的菌株,进一步测定在初筛中具有高杀虫活性的JAAS01菌株浓缩发酵液对棉铃虫、菜青虫(P.linnaeus)、粘虫(L.separata)、小菜蛾(P.xylostella)和菜缢管蚜(R.pseudobrassicae)的室内杀虫活性。结果表明,JAAS01菌株浓缩发酵液对粘虫的杀虫活性最高,达94 36%,对菜青虫和棉铃虫的杀虫活性中等,而对菜缢管蚜和小菜蛾的杀虫活性较低。研究结果显示,从海洋微生物中可筛选出对农业害虫具有杀虫活性的新型微生物资源。

靶标酶在研究杀虫活性构效关系中的应用

运用已建立的乙酰胆碱酯酶 (ACh E)活力分析规范化筛选模型 ,研究 N-甲基取代苯基氨基甲酸酯类化合物和含硅氨基甲酸酯类新系列化合物与 ACh E酶抑制中量 (I50 )构效关系的规律 ,并以 CASAR软件进行 QSAR分析 ,所得结果迅速反馈给化学合成 ,为高效低毒新杀虫剂的创制提供有益的信息和科学依据。

具有杀虫活性放线菌的筛选与初步鉴定

通过卤虫初筛和小菜蛾复筛,从土壤中得到2株具有较高杀虫活性的放线菌菌株,编号为SN23和SN336。根据其形态培养特征和生理生化特性的研究结果,初步鉴定这2株活性菌株均属于链霉菌属。

青藏高原18种植物的杀虫活性筛选

以拒食率和死亡率为标准，用生长在青海的１８种高原植物甲醇提取物对菜粉蝶５龄幼虫的生物活性进行测定，筛选出高效杀虫植物－瑞香狼毒。

一株具有杀松材线虫活性海洋真菌的筛选和初步鉴定

为了从分离得到的海洋真菌中筛选并鉴定具有杀松材线虫活性的菌株,本文采用稀释涂布平板法对采自青岛近海海域样品中的真菌进行分离,使用浸渍法对菌株的培养滤液和菌丝破碎液进行杀松材线虫活性测定,同时根据菌落形态、大小、色泽等特点的不同,经进一步纯化得到6个纯菌株,对这些菌株进行杀线活性测定,经初步筛选得到2株具有较强杀线活性的菌株,菌株HZ-1-1处理28h时杀线活性最高,其培养滤液和菌丝破碎滤液的线虫校正死亡率分别达到72.6%和84.1%;菌株HZ-1-2处理32h时杀线活性最高,其培养滤液和菌丝破碎滤液处理的线虫校正死亡率分别为46.3%和58.8%。选出活性表现最强的菌株HZ-1-1进行后续实验。实验结果表明,菌株HZ-1-1为轮枝孢属(Verticillium)的真菌。本研究对由松材线虫引起的松树萎蔫病的生物防治具有重要的理论意义。

防治茄二十八星瓢虫Bt菌株的筛选及杀虫活性分析

以从湖北宜昌、襄阳、荆州、广东东莞、安徽安庆5个地区采集得到的52份土样为试材,分别采用温度筛选法、镜检法、PCR-RFLP法和SDS-PAGE等方法,分离了土壤中的苏云金芽孢杆菌,并鉴定了分离出的Bt菌株的基因型,通过茄二十八星瓢虫二龄幼虫的室内杀虫试验测定分离株的杀虫活性,同时分析了部分Bt菌株的伴孢晶体蛋白,以期挖掘新的Bt菌株资源,筛选出对茄二十八星瓢虫具有高毒力的Bt菌株。结果表明:分离得到10株含cry3基因的菌株,3株含cry7基因的菌株和2株含cry8基因的菌株,得到1株对茄二十八星瓢虫二龄幼虫有高毒力的Bt菌株,当其伴孢晶体悬浮液的浓度在40 mg·mL^(-1)时,校正死亡率最高可达40.42%;发现YC-2-20、GD-4-1均表达分子量约为67 kDa的晶体蛋白;GD-5-7表达分子量约为130 kDa和80 kDa的晶体蛋白;YC-12-6表达分子量约为130 kDa和70 kDa的晶体蛋白。试验筛选出的Bt菌株为农业生产中茄二十八星瓢虫的绿色防控提供了可应用的菌株及基因资源,同时对延缓害虫抗药性的产生也具有重要意义。

对棉铃虫高杀虫活性苏云金芽胞杆菌菌株的筛选

采用生物活性测定方法对实验室分离保存的73株Bt菌株进行杀棉铃虫幼虫的筛选,获得了3株对棉铃虫具有显著杀虫活性的菌株,其胞晶混合物对棉铃虫幼虫的LC50值为413. 43～574. 30μg·m L-1。对这3株Bt菌株研究发现,其产生的伴胞晶体类型包括菱形和方形,伴胞晶体蛋白编码基因的类型主要有cry1Aa、cry1Ab、cry1Ac、cry1Ia、cry2Ac、cry2Ah、cry4Ba、cry9Ea、cyt2Aa等,这些Bt菌株均表达约60 k Da和130k Da伴胞晶体蛋白。这3株Bt菌株的鉴定为棉铃虫的生物防治提供新的菌株资源和基因资源。

新化合物室内杀虫活性筛选的某些问题的探讨

本文就新化合物室内杀虫活性筛选中的某些问题,即对靶标试虫的要求、对环境条件的要求、对新化合物的要求等进行了探讨,并结合具体研究工作提出了一些建议,意在促进生物活性测定的标准化,利于农药创制工作的快速、准确进行。

二卤丙烯类杀虫活性化合物定向筛选方法探讨

报道了啶虫丙醚对小菜蛾、甜菜夜蛾、棉铃虫的室内毒力,并从生测靶标、筛选剂量、药剂处理方式、调查时间、评价标准等方面探讨了二卤丙烯类杀虫活性化合物的定向筛选方法。该方法有利于发现该类二卤代丙烯类化合物的创制。

新型新杀虫剂的高通量筛选方法研究

试验针对化学合成的新化合物筛选及活性评价方法进行了探索,对几类杀虫剂活性进行了对比试验,建立了基于人工叶片表面涂布及使用挥发性有机溶剂的高通量筛选和活性评价方法。并采用该方法对4个系列的化学合成化合物和微生物源先导化合物及其化学合成衍生物样品共773个进行了筛选。结果表明,该筛选方法能稳定、高效地对化学合成的新化合物进行杀虫活性筛选和活性评价。

内蒙古地区土壤放线菌分离及其杀虫活性研究

为发现具有杀虫活性的放线菌,采用选择性分离方法对采自内蒙古地区特殊生境12份土样的放线菌进行分离;先后以卤虫、淡色库蚊3龄幼虫为供试对象进行菌株发酵液杀虫活性筛选,测定高活性菌株发酵液对3种农业害虫(朱砂叶螨、小菜蛾和粘虫)的毒杀活性。结果表明,从采自内蒙古地区的12份土样分离获得放线菌183株,其中,菌株11-09-3、11-09-49、12-09-10对卤虫、淡色库蚊3龄幼虫具有较好的毒杀活性,菌株11-09-3的发酵液对小菜蛾的毒杀活性为96.67%,对朱砂叶螨的毒杀活性为93.10%,菌株11-09-3值得进一步研究。

11种农药对芦笋地甜菜夜蛾的室内杀虫活性

为筛选适合芦笋地甜菜夜蛾防控使用的低毒、高效杀虫剂,开展11种杀虫剂对甜菜夜蛾3-4龄幼虫的室内杀虫活性测定。结果表明,虫螨腈、乙基多杀菌素和氯虫苯甲酰胺稀释1 000倍液对甜菜夜蛾具有良好的杀虫活性,且速效性好。虱螨脲1 000倍、茚虫威2 000倍杀虫活性次之,药后5 d死亡率也在95%以上。甜菜夜蛾核型多角体病毒1 000倍和甲氨基阿维菌素苯甲酸盐4 000倍均速效性不强,药后5 d对幼虫的致死率分别为85%和77.5%。苦参碱600倍、多杀霉素1 000倍、氟啶脲600倍、印楝素500倍对甜菜夜蛾的杀虫活性不高。

吡唑啉类杀虫剂对神经原靶标位置的作用机制

20世纪70年代，化学家们在研究1．苯酰基．3．苯脲类衍生化合物如（PH6041；图1A）的杀虫活性过程中发现了第一代吡唑啉类杀虫剂，即吡咯啉。对苯酰基苯脲结构的修饰合成支现了另外一系列相关的化合物1．苯氨基甲酰．2．吡唑啉，这个系列的化合物具有较高的杀虫性，但同时也表现出完全不同的中毒症状。然而，二氟脲和其衍生物能够抑制昆虫体内的壳多糖的合成，

酰基肼类杀虫剂毒理机制与抗药性研究进展

酰基肼类杀虫剂作用于昆虫蜕皮激素受体 ,导致昆虫致死性蜕皮 ,是一类新型高效、环境友好性杀虫剂 ,近年来发展很快。本文综述了酰基肼类杀虫剂在杀虫活性化合物开发、杀虫毒理机制、与该类化合物有关的活性化合物筛选技术及抗药性等方面的研究进展。

对粘虫高毒力Bt菌株的筛选

以粘虫的初孵幼虫为供试昆虫,对东北农业大学植物保护系昆虫教研室从哈尔滨地区病死的昆虫体内分离、保存的苏云金芽孢杆茵(Bacillus thuringiensis,以下简称Bt)74个菌株进行了筛选。经初筛、复筛,从中筛选出对粘虫初孵幼虫高素力Bt菌株5株,它们的菌株号分别为31,42,72,78,87号,当菌液浓度为1.60×10 8芽孢/mL时,粘虫初孵幼虫校正死亡率分别为80％～95％,它们的致死中浓度Lc50分别为3.56×10 6芽孢/mL、4.60×10 5芽孢/mL、4.47×10 6芽孢/mL、5.49×10 6芽孢/mL、2.43×10 6芽孢/mL。

苏云金芽孢杆菌Vip3Aa10毒素结合肽的筛选及活性测定

【目的】Vip3A是由苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在对数生长期产生并分泌到胞外的对鳞翅目昆虫有较广杀虫谱的毒素,其在敏感昆虫中肠上的结合受体尚未得到鉴定。利用噬菌体展示技术,论文试图从肽库中筛选到能与Vip3A毒素特异性结合的多肽,为研究Vip3A毒素的杀虫模式提供线索。【方法】将构建的p ET28a-Vip3Aa10表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,用亲和纯化的方法制备Vip3Aa10,并用胰蛋白酶活化和离子交换层析进一步纯化。以活化的Vip3Aa10毒素为诱饵,经"吸附-洗脱-扩繁"4轮条件逐渐严格的淘选,从噬菌体随机肽库中筛选能特异性地与活化的Vip3Aa10结合的噬菌体。以筛选到的噬菌体基因组DNA为模板,经PCR扩增和测序,获得插入到噬菌体上的外源基因的序列,并推导出相应多肽的氨基酸序列。将化学合成的多肽与活化的Vip3Aa10一起与甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)刷状缘膜囊泡共育后,用免疫印迹方法检测多肽对活化的Vip3Aa10与BBMV结合的影响。将合成的多肽与活化的Vip3Aa10一起涂布在饲料表面,晾干后,每孔放1只1龄的甜菜夜蛾幼虫。6 d后统计昆虫死亡情况。【结果】在25℃条件下用IPTG诱导含p ET28a-Vip3Aa10质粒的大肠杆菌BL21(DE3)可以表达出可溶性的Vip3Aa10蛋白。经亲和纯化、胰蛋白酶活化以及离子交换层析后,可得到较纯的活化的Vip3Aa10。以活化的Vip3Aa10为诱饵,经过4轮条件逐渐严格的淘选,从十二肽库中筛选出9条多肽,其中3条多肽的丰度较高,分别命名为P12-1、P12-2和P12-3,从七肽库中筛选出5条多肽,其中1条多肽的丰度较高,命名为P7-1。结合试验和杀虫活性测定试验结果表明,P12-2和P7-1多肽能不同程度地抑制Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡的结合,以及抑制Vip3Aa10的杀虫活性。【结论】用噬菌体展示技术筛选的多肽P7-1能显著性地抑制Vip3Aa10与刷状缘膜囊泡的结合,可降低35%以上的Vip3Aa10的杀虫活性。

苏云金芽胞杆菌6618杀虫菌株的分离和鉴定

从我国不同地区采集118份土样,利用温度筛选法分离获得一株苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)6618,镜检观察发现该菌株能产生典型的菱形晶体,PCR分析表明其含有cry1类杀虫基因。采用SDS-PAGE和质谱分析发现该菌株主要产生130 k D原毒素,其组分由Cry1Ae和Cry1Ac原毒素组成。基因序列分析表明该菌株的cry1Ac基因为已知的cry1Ac1,而cry1Ae为新型杀虫基因。毒力生测表明该菌株对棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫具有显著的杀虫效果。筛选获得的高毒力Bt菌株6618为丰富我国苏云金芽胞杆菌储备和研发新型高效生物杀虫剂提供了菌株资源。