海口市白纹伊蚊对菊酯类杀虫剂的抗药性及击倒抗性基因突变分析

目的了解海口市白纹伊蚊对溴氰菊酯和氯菊酯的抗药性,并检测其击倒抗性(kdr)基因突变型,阐明抗性表型与kdr基因突变的关系。方法在海口新埠岛、龙塘镇、石山镇、白沙门和花卉市场采集白纹伊蚊幼虫,应用浸渍法测定其对溴氰菊酯和氯菊酯杀虫剂的敏感性,以抗性倍数确定抗性级别。对应生物测定的样品扩增和分析白纹伊蚊的kdr基因部分片段,采用χ2检验比较抗性表型与kdr突变基因型的差异性。结果海口白纹伊蚊花卉市场和白沙门群体对溴氰菊酯和氯菊酯均产生抗性,花卉市场群体对溴氰菊酯的抗性倍数高达436.36,为高度抗性。龙塘镇和石山镇群体对氯菊酯均为敏感,对溴氰菊酯的抗性为低度(9.09)或中度(18.18)。新埠岛群体对溴氰菊酯和氯菊酯均为敏感。在对应检测的317只白纹伊蚊的kdr基因中,发现1 534位点存在点突变,检测到2种突变等位基因(TGC/C、TCC/S)。5种基因型和频率分别为野生型TTC/TTC(62.15%)、野生/突变型杂合子TTC/TGC(0.63%)和TTC/TCC(16.09%)、突变型纯合子TCC/TCC(20.82%)以及突变型杂合子TGC/TCC(0.32%)。χ2检验结果显示,接触菊酯类杀虫剂后敏感表型与抗性表型个体中,kdr基因型间的差异有统计学意义(P<0.05),在抗性表型群体中的kdr突变型基因型的频率(42.94%)大于敏感表型个体(31.97%)。结论海口市白纹伊蚊多个群体对溴氰菊酯和氯菊酯同时存在抗性,抗性表型与kdr突变基因型密切相关。本研究首次记录了kdr新的等位基因TCC/S。

基因步移在分离蚊虫细胞色素P450启动子中的应用及意义

【目的】快速扩增出白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP 6N3基因 (CYP 6N3)上游启动子区序列。【方法】根据本室已获得的白纹伊蚊CYP 6N亚家族新成员CYP6N3全长cDNA的 5′ 末端核苷酸序列 ,设计 2个反向特异引物 (GSP1和GSP2 ) ,利用 4种限制性内切酶 DraⅠ、EcoRⅤ、Pvu Ⅱ和 StuⅠ分别消化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株高分子量基因组DNA ,消化产物与适配子连接产生 4种消化的DNA库 (DL1、DL2、DL3及DL4) ,并分别以此为模板 ,进行基因步移。用特异引物GSP1与适配子引物AP1进行第 1步PCR扩增 ,然后再以第 1步PCR产物为模板、用内部特异引物GSP2与内部适配子引物AP2进行第 2次PCR扩增。【结果】第 1步PCR结果显示 :在上述 4种消化文库中分别扩增出约 80 6、2 190、2 2 0 6和 3 0 76bp的特异条带 ;第 2步PCR结果与第 1次PCR相类似 ,但各泳道主带扩增效率明显升高。【结论】本实验已成功地获得了白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 CYP6N3上游启动子区核苷酸序列及其 4种限制性内切酶图谱。此外还对基因步移法在昆虫细胞色素P45 0多样性及其参与杀虫剂抗性分子机理研究中的意义进行了讨论。

厦门市白纹伊蚊成蚊对常用杀虫剂的抗药性观察

目的了解白纹伊蚊成蚊对常用杀虫剂的抗药性,为科学选择和使用杀虫剂提供依据。方法2018年9月在厦门市思明、集美、海沧区和2019年8月在厦门市思明、集美、翔安区,采用勺舀法采集野外白纹伊蚊幼虫和卵块,在实验室饲养至成蚊。采用接触筒法测定白纹伊蚊成蚊对7种常用杀虫剂的抗药性,计算1 h击倒率和恢复24 h死亡率。根据死亡率判断抗药性水平:≥98%为敏感群体(S);80%~<98%为可能抗性群体(M);<80%为抗性群体(R)。结果2018和2019年白纹伊蚊成蚊暴露于0.1%溴氰菊酯、0.4%高效氯氰菊酯、0.5%高效氯氟氰菊酯、1.4%顺式氯氰菊酯、3%氯菊酯、0.5%马拉硫磷、0.05%残杀威7种常用杀虫剂,1 h击倒率分别为95.1%(117/123)、98.3%(115/117)、100.0%(116/116)、99.2%(120/121)、98.4%(123/125)、97.5%(119/122)、100.0%(127/127)和96.7%(118/122)、98.6%(143/145)、100.0%(139/139)、100.0%(149/149)、98.0%(146/149)、96.8%(121/125)、100.0%(126/126)。2018年恢复24 h死亡率分别为91.1%(112/123)、78.6%(92/117)、75.0%(87/116)、88.4%(107/121)、96.0%(120/125)、99.2%(121/122)、100.0%(127/127),2019年恢复24 h校正死亡率分别为74.9%、76.9%、79.5%、91.4%、92.3%、100.0%、100.0%。结论厦门市白纹伊蚊成蚊对马拉硫磷和残杀威敏感,对溴氰菊酯、高效氯氰菊酯和高效氯氟氰菊酯等拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性高。要加强抗药性监测,交替使用不同类型杀虫剂,以减少和延缓抗药性的产生。

贵阳市致倦库蚊成蚊对4种常用杀虫剂抗药性调查

目的了解贵阳市致倦库蚊成蚊对4种常用杀虫剂的抗药性水平。方法2015年8 - 9月,用幼虫勺捕法采集贵阳市8个地区的野外致倦库蚊幼虫,在实验室饲养至成蚊。采用接触筒法测定成蚊对4种常用杀虫剂的抗药性,计算1 h击倒率和恢复24 h死亡率。根据死亡率判断抗药性水平:< 90%为抗性群体(R);90%~< 98%为可能抗性群体(M);≥98%为敏感群体(S)。结果将致倦库蚊成蚊分别暴露于7.70 g/L敌敌畏、3.30 g/L残杀威、0.25 g/L高效氯氰菊酯和0.20 g/L溴氰菊酯,1 h击倒率范围分别为57.78%(52/90)~91.11%(82/90)、86.67%(78/90)~100.00%(90/90)、23.33%(21/90)~77.78%(70/90)和27.78%(25/90)~88.89%(80/90);恢复24 h死亡率范围分别为61.11%(55/90)~94.44%(85/90)、90.00%(81/90)~97.78%(88/90)、23.33%(21/90)~73.33%(66/90)和21.11%(19/90)~72.22%(65/90)。结论贵阳市致倦库蚊成蚊对4种常用杀虫剂均产生了一定程度的抗药性,其中对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯等拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性较高。

Determination of Resistance to Seven Insecticides in Plutella xylostella L. in Fields of Northern Hunan

The resistance of field populations of Plutella xylostella, from the three vegetable producing areas （Nianyuxu Town of Yueyang City, Canggang Town of Changde City and Shatou Town of Yiyang City） in northern Hunan, to seven insecticides was determined using leaf dipping method in door. The results showed that Plutella xylostella showed an extremely high-level resistance to beta-cypermethrin （resistance ratio, RR=257.13）, a high-level resistance to abamectin （RR=135.15） and indoxacarb （RR=103.08） and a moderate-level resistance to chlorfenapyr and emamectin benzoate. But Plutella xylostella is relatively sensitive to chlorantraniliprole and Bacillus thuringiensis （Bt）. Therefore, the prevention of Plutella xylostella in northern Hunan should focus on the alternative use of chlorfenapyr, emamectin benzoate, chlorantraniliprole and Bacillus thuringiensis and avoid the use of beta-cypermethrin so as to delay the generation and development of resistance to insecticides in Plutella xylostella.