泥鳅杂交三倍体和二倍体胚胎发育的比较研究

对杂交三倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus(2n♀×4n♂,DT)和二倍体泥鳅(2n♀×2n♂,DD)的胚胎发育进行观察,详细记录了其胚胎发育的形态特征和发育特点。结果表明:DT受精卵在水温(25±1)℃的条件下,整个胚胎发育过程约需36 h 19 min;对照组DD受精卵在水温(25±1)℃的条件下,整个胚胎发育过程约需35 h 57 min;DT(DD)的胚胎发育包括卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官形成期和孵化出膜期6个时期,DT(DD)受精卵约40 min(40 min)后进入卵裂期,3 h 45 min(3 h 40min)后进入囊胚期,6 h 30 min(6 h 24 min)后进入原肠期,9 h 32 min(9 h 20 min)后进入神经胚期,15 h 45 min(15 h 30 min)后进入器官形成期,36 h 19 min(35 h 57 min)后出膜。研究表明,DT的胚胎发育时序及形态特征与DD基本相似,说明DT具有正常的胚胎发育过程,本研究可为杂交三倍体泥鳅苗种培育提供生物学依据。

杂交三倍体(4n♀×2n♂)泥鳅染色体组核型多态性研究

以杂交三倍体泥鳅(4n♀×2n♂)为研究对象,初步分析对不同发育阶段(胚胎、六月龄及十二月龄)染色体核型。结果表明,胚胎阶段整三倍体(3n=75)染色体数目为3n=75,核型公式:14M+9SM+52T,NF=98;亚三倍体(3n>75)染色体数目为3n=73,核型公式:13 M+6 SM+54 T,NF=92;超三倍体(3n>75)染色体数目为3n=77,核型公式:18 M+7 SM+52 T,NF=102。六月龄阶段整三倍体染色体数目为3n=75,核型公式:15 M+5 SM+55 T,NF=95;亚三倍体染色体数目为3n=73,核型公式:13M+6SM+54T,NF=92;超三倍体染色体数目为3n=76,核型公式:14 M+6 SM+56 T,NF=96。十二月龄阶段整三倍体染色体数目为3n=75,核型公式:16 M+6 SM+53T,NF=97;亚三倍体的染色体数目为3n=72,核型公式:13M+6SM+53T,NF=91;超三倍体的染色体数目为3n=77,核型公式:13M+6SM+58T,NF=96。研究表明,杂交三倍体(4n♀×2n♂)泥鳅不同发育阶段染色体核型整倍体及非整倍体均表现出多态性。结论为杂交三倍体泥鳅染色体组不稳定性研究提供细胞遗传学依据。

杂交三倍体泥鳅染色体C带及rDNA序列的FISH定位

对杂交三倍体泥鳅(4n♀×2n♂)的胚胎染色体进行了C带及染色体荧光原位杂交(FISH)分析,首次探讨了杂交三倍体泥鳅C带特征,为准确鉴别染色体提供依据,研究了核糖体5.8S+28S r DNA在杂交三倍体泥鳅胚胎中期染色体上的数目和位置。C带结果表明,杂交三倍体泥鳅的染色体C带包括臂端C带和着丝粒C带,没有发现臂间C带。M染色体只有1号染色体既有臂端C带又有着丝粒C带,但臂端C带均比着丝粒C带大,信号也比着丝粒的强;而其他M染色体及SM染色体、T染色体只有着丝粒C带。FISH分析显示,核糖体5.8S+28S r DNA清楚地定位在杂交三倍体泥鳅中期染色体中部着丝粒染色体(M)的端部区域,在杂交三倍体泥鳅中期染色体上可以检测到三簇杂交信号。该结果从分子细胞遗传学层面进一步证实了杂交三倍体泥鳅是含有三套染色体组的遗传三倍体。

虹鳟(♀)×溪红点鲑(♂)杂交三倍体F1及其亲本肌肉营养成分的比较

对虹鳟、溪红点鲑及其杂交三倍体F1(虹鳟♀×溪红点鲑♂)的肌肉营养成分进行了测定和分析比较,旨在为虹鳟、溪红点鲑杂交育种时的性状选择提供参考。结果显示:F1的水分、粗脂肪含量与虹鳟差异不显著,但显著低于溪红点鲑(P<0.05);F1的粗蛋白含量显著高于双亲(P<0.05);灰分含量三者之间差异不显著;F1的钾、铜离子含量与虹鳟差异不显著,钾离子含量显著高于溪红点鲑,铜离子含量显著低于溪红点鲑(P<0.05);F1的铁、锌、磷离子含量与溪红点鲑差异不显著,二者的铁离子含量显著高于虹鳟,锌、磷离子含量显著低于虹鳟(P<0.05);F1的钙离子含量与双亲差异显著,其中虹鳟含量最高,溪红点鲑含量最低(P<0.05);三者的钠、镁、锰离子含量差异不显著。F1的氨基酸、必需氨基酸、非必需氨基酸、鲜味氨基酸及半必需氨基酸总量均显著高于双亲(P<0.05),亲本间差异不显著;F1多数氨基酸含量高于鸡蛋全卵蛋白标准,而两亲本只有赖氨酸含量高于该标准,其它氨基酸含量均低于该标准;F1所有的氨基酸含量高于WHO/FAO标准,两亲本仅部分指标高于该标准;F1的饱和脂肪酸(SFA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)、ω-3和ω-6族多不饱和脂肪酸总量均显著低于溪红点鲑(P<0.05),而与虹鳟的差异不显著。结果表明,F1与其双亲相比,氨基酸含量更丰富,脂肪含量较少,味觉更鲜美。

杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系的建立及应用

为研究杂交三倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的形成机制,探寻其产业化生产的有效途径,通过对GISH的多项试验参数进行优化,建立杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系,并对天然四倍体泥鳅(4n=100)与大鳞副泥鳅Paramisgurnus dabryanus(2n=48)正、反杂交后代进行GISH分析。结果表明:杂交三倍体泥鳅GISH技术反应体系中,探针DNA在温度为105℃、持续时间为2 min时,片段化后探针DNA片段长度为500~1000 bp;封阻DNA在温度为110℃、持续时间为10 min时,片段长度为100~500bp;标记后的探针DNA与片段化后的封阻DNA混合比(P/B)在1∶25和1∶50时均可以得到较好的杂交信号;以大鳞副泥鳅全基因组DNA为探针DNA、天然四倍体泥鳅全基因组DNA为封阻DNA,与二者正、反交后代进行基因组原位杂交试验,结果显示,来源于亲本大鳞副泥鳅24条染色体在着丝点处均有杂交信号,无杂交信号染色体50条,来源于亲本泥鳅。该研究结果不仅为杂交三倍体泥鳅后代的鉴定提供了最直观的证据,也为中国天然四倍体泥鳅是含有四套染色体组的遗传四倍体并能产生2n的配子提供了分子细胞遗传学基础数据,对泥鳅三倍体育种研究具有一定的指导意义。

杂交三倍体泥鳅×二倍体泥鳅杂交后代胚胎染色体组构成的研究

为探讨杂交三倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus配子染色体组的构成,以杂交三倍体泥鳅(3n)与二倍体泥鳅(2n)为研究对象,配制2n♀×3n♂和3n♀×2n♂杂交组合,对杂交后代的胚胎染色体进行银染(Ag-NORs)、CMA_3/DA/DAPI三重荧光染色和染色体荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)等方面的研究。结果表明:两个杂交组合的杂交后代胚胎染色体有丝分裂中期分裂相中最高银染点数均为3个,位于中部着丝粒染色体(M1)的端部区域;在2n♀×3n♂和3n♀×2n♂杂交后代胚胎染色体有丝分裂中CMA3阳性部位有3个,位于中部着丝粒染色体(M1)的端部区域;将核糖体5.8S+28S r DNA定位在杂交后代胚胎染色体上,两种杂交组合均可检测到3簇杂交信号,位于中部着丝粒染色体(M1)的端部区域。研究表明,杂交三倍体泥鳅无论雌雄与二倍体泥鳅杂交所产生的后代染色体组构成均为3套染色体组,进而可推测,杂交三倍体泥鳅无论雌雄均可产生(1.5~2)n的配子,该结果为三倍体泥鳅配子染色体组成提供了细胞遗传学证据。

杂交三倍体泥鳅性腺发育观察及其基因表达分析

以杂交三倍体泥鳅(4 n♀×2 n♂)为研究对象,对其早期性腺分化的组织学进行观察,并采用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,对杂交三倍体泥鳅早期不同发育时期(孵化后4、14、21、23、50、60和65 d)和不同组织(性腺、肝脏、肌肉、肠、鳃、鳍、皮肤和脑)中性腺发育相关基因(hormad1、dmrt1-a)的表达量进行定量检测。研究结果发现:在早期不同发育时期,hormad1和dmrt1-a基因均为在4日龄中表达量最高,14日龄次之,在50日龄中表达量最低。在不同组织中,hormad1基因在雌鱼的鳍中表达量最高,肝脏中表达量最低;在雄鱼的性脑腺中表达量最高,肝脏中表达量最低。dmrt1-a基因在雌雄鱼的性腺中表达量最高,脑中表达量最低。杂交三倍体泥鳅早期性腺的分化和发生与二倍体泥鳅无差别,可观察到原始生殖细胞、原始生殖细胞的迁移和原始性腺的生成及性腺的分化等过程。研究结果表明,hormad1、dmrt1-a这2个基因与杂交三倍体泥鳅早期性腺发育密切相关。

硬头鳟与溪红点鲑杂交三倍体育种技术的初步研究

为了获得同时具有杂交及三倍体优势的鲑鳟鱼苗种，开展了利用6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）诱导硬头鳟（Oncorhynchus mykiss）、溪红点鲑（Salvelinus fontinalis）正反杂交受精卵的实验。杂交结果，溪红点鲑（♀）×硬头鳟（♂）实验组卵子在受精10min后全部死亡，而硬头鳟（♀）×溪红点鲑（♂）组的受精卵正常，可以进行6-DMAP三倍体诱导实验。6-DMAP诱导受精卵结果，起始诱导时间在12～15min，受精卵的发眼率最高，为75．87％～76．64％，存5个起始诱导时间梯度内，受精卵的孵化率在86．44％～90.31％之间，苗种三倍体率在92．45％～95．55％之间，差异小显著（P〉0．05）。诱导持续时间为10～15min时，受精卵发眼率达到最高，为74．28％～76．81％，在5个诱导持续时间梯度内，受精卵孵化率在87．28％～90．24％之间，苗种三倍体率在93．67％～96．25％之间，变化不显著（P〉0．05）。药物诱导浓度为120～150mg／L时，受精卵的发眼率达到最高，为73．57％～76．27％，在5个不同的药物浓度梯度内，受精卵孵化率在88．57％～90．03％之间，苗种三倍体率存92．56％～96．38％之间，变化不显著（P〉O．05）。结果表明，利用6-DMAP诱导受精卵制备杂交三倍体苗种的方法是可行的，实验最佳方法为硬头鳟（早）×溪红点鲑（8）卵子受精后12～15min内，利用浓度为120～150mg／L的6-DMAP溶液诱导，持续时间为10～15min，然后放入孵化桶内正常孵化，获得苗种的三倍体率可达92．56％～96．38％，可满足正常生产的需要。

三倍体苹果杂交后代及其亲本果实香气及品质分析

为了明确三倍体苹果杂交后代的果实香气及品质的遗传倾向,以"寒富"苹果与"四倍体嘎啦"苹果的6份三倍体杂交后代及其亲本共8份品种(系)为试材,采用静态顶空(SHS)和气相色谱-质谱联用技术及高效液相色谱技术,检测了果实的香气成分及其糖酸组分和含量。结果表明:8份试材中共检测到34种酯类、醇类与醛类等挥发性物质,不同试材间的差异较大;在6份三倍体杂交后代试材中,H4G1的特征香气的种类最多;主成分分析结果表明,6份三倍性新种质的果实香气均倾向于父本遗传;果糖为所有试材果实的主要糖组分,其次为葡萄糖、蔗糖;苹果酸为主要的有机酸;在所有试材中,糖酸组分存在一定的差异,但其糖酸组成类型却不存在差异。

桑树三倍体杂交组合粤桑2号的育成

采用人工诱导和杂交育种的方法 ,育成优质高产桑树三倍体杂交组合粤桑 2号 ,已通过全国农作物品种审定。该杂交组合的桑叶产量比对照组合塘 10×伦 10 9增加 11 1%,万蚕收茧量增加 6 4 %,万蚕茧层量增加7 8%,5 0kg桑产茧量增加 7 6 %,6 6 7m2 桑园产值增加 2 5 4 %。

桑三倍体杂交组合种子生产技术研究——粤桑2号种子园创1/15公顷产种子59.75kg高产纪录

桑三倍体杂交组合(粤桑2号)种子生产技术,设肥料、整枝、防病三个因素三个水平正交试验,结果以整枝为主要因素,肥料次之;选出最佳的处理组合为挫(艹远)整枝、施复合肥+有机肥,并喷多菌灵防病。运用适当密植,适时降枝,合理施肥,自然和人工辅助充分授粉等技术措施,在2.21/15公顷种子园中,栽植后头年创1/15公顷产种子59.75公斤的高产纪录。

不同倍性泥鳅杂交后代染色体数目组成的研究

以泥鳅Misgurnus anguillicaudatus为研究对象,通过染色体计数法,对二倍体泥鳅与天然四倍体泥鳅正交(2n×4n)、反交(4n×2n)杂交后代的早期胚胎、6月龄及12月龄阶段的染色体数目进行了统计分析。结果表明:早期胚胎正、反杂交后代的染色体数目为67～81、67～82,在良好的中期分裂相(100、100个)中,染色体数目为75的整三倍体众数百分比最高(22%,20%),此外还有大量染色体数目<75的亚三倍体(37%,51%)和染色体数目>75的超三倍体(41%,29%);6月龄正、反杂交后代的染色体数目为68～79、66～80,在良好的中期分裂相(58、63个)中,整三倍体(3n=75)众数百分比最高(26%,41%),此外还有大量亚三倍体(34%,49%)和超三倍体(40%,10%);12月龄正、反杂交后代的染色体数目为68～82、69～83,在良好的中期分裂相(71、50个)中,三倍体(3n=75)众数百分比最高(28%,54%),此外还有大量亚三倍体(48%,20%)和超三倍体(24%,26%)。研究表明,二倍体泥鳅与天然四倍体泥鳅正、反杂交后代均出现大量能存活的非整三倍体个体,并随养殖时间的延长,非整三倍体率呈下降趋势。

不同投肥量对三倍体杂交狼尾草的生物量及品质的效应

递级增加氮化肥的投量，不仅能促进三倍体杂交狼尾草的生物量得以依级上升，而且其蛋白质含量亦同步以正相关趋势而提高。由此而论，三倍体杂交狼尾草只有在高肥、高湿的情况下，才能充分发挥其增产，增质的双重优势。

不同倍性泥鳅鳍细胞培养及染色体标本制备方法的研究

以天然二倍体、杂交三倍体(4n♀×2n♂)和天然四倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的鳍组织为材料,对短期培养的消毒方法、秋水仙素的浓度(1.0、1.5、2.0μg/mL)与处理时间(2、3、4 h)和低渗处理时间(30、40、50 min)等细胞培养技术,及染色体标本制备方法进行了研究。结果表明:选择100 g/L的碘伏溶液杀菌效果良好,对于细胞生长影响较小,尤以处理15 min时的效果最明显,细胞迁出迅速;在终止培养前3 h加入秋水仙素至终浓度为1.5μg/mL,天然二倍体、杂交三倍体和天然四倍体泥鳅鳍细胞中期分裂相染色体众数最高,分别为93.33%、90.00%、70.00%;25℃下低渗处理40 min时,可以获得大量图像清晰、长度适中、分散良好、染色体数目完整的染色体中期分裂相。本研究中初步建立了以鳍组织培养法作为材料来源快速制备不同倍性泥鳅染色体标本的方法。

一种新型水稻的研究进展(综述)

早稳型水稻是一种新型的杂交水稻 ,它由三倍体与二倍体杂交产生的F2 代的稳定株系选育而成 ,具有新颖性、可遗传的早代稳定等特点 ,其F2 代稳定这一特异现象难以用经典的遗传学理论解释 ,现有的研究表明一种特殊的基因控制着早代稳定的遗传 ,但对这一特殊的基因有待进一步的研究证实。目前对这种新型杂交水稻的深入研究在胚胎学、细胞学、遗传学等方面都存在着许多困难 ,尽管如此 ,早稳型水稻在选育新品种、不育系。

二倍体大白菜与四倍体结球甘蓝杂种的获得及其SSR鉴定与GISH分析

为创制结球甘蓝-大白菜异附加系、异代换系、易位系,利用二倍体大白菜(AA,2n=20)为母本与四倍体结球甘蓝(CCCC,2n=36)杂交,通过胚挽救获得了异源三倍体杂交种(ACC,2n=28);利用SSR对杂交种进行鉴定,6株F1均能扩增出父本的特征带,表明这6株是真杂交种。异源三倍体基因组原位杂交结果表明,未加封阻时,大白菜与结球甘蓝染色体均有较强的杂交信号;当加入适当比例的封阻时,来自大白菜和结球甘蓝染色体上的杂交信号强弱有明显差别;封阻过度时,大白菜与结球甘蓝染色体的杂交信号都十分微弱。说明大白菜与结球甘蓝基因组具有较高的同源性。