三种非放射性标记DNA探针杂交灵敏度的比较

以地高辛配基、光敏生物素及补骨脂素标记的Ｎ－ｒａｓＤＮＡ片段为探针，采用点渍法和ＤＮＡ印渍法，比较了这三种非放射性标记探针的杂交灵敏度．在点渍法中，三者能检测到的低限ＤＮＡ浓度分别为０．１μｇ·Ｌ－１，１μｇ·Ｌ－１和１μｇ·Ｌ－１．在ＤＮＡ印渍法中，地高辛配基能检测到的低限ＤＮＡ浓度亦为０．１μｇ·Ｌ－１．本文还讨论了影响上述三者灵敏度的有关因素．

十字花科黑腐病菌中存在tRNA衍生片段(tRF)的证据

tRNA衍生片段(tRNA-derived fragment, tRF)是一种由内切核糖核酸酶将初级tRNA (primary tRNA)或成熟tRNA分子剪切后形成的长度为14~30 nt (核苷酸)的稳定的RNA片段。研究表明,tRF广泛存在于各种真核生物中,它们既可以作为信号分子,又可以作为基因表达的调控因子,在细胞的各种生理过程中发挥重要的调控作用。但至今除了在大肠杆菌(Escherichia coli)和沃氏富盐菌(Haloferax volcanii)中发现了tRF外,在其他原核生物中未见有关tRF的报道。本研究采用高灵敏度的Northern杂交技术对十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv. campestris, Xcc)的苏氨酸-tRNA (threonine-tRNA, tRNAThr)和甲硫氨-tRNA (methionine-tRNA, tRNAMet)进行了检测。结果显示,除了检测到全长的成熟tRNAThr和tRNAMet外,还检测到多个丰度各异的稳定的tRF,而且一些tRF的产生受营养胁迫的诱导。此外,我们还发现,编码tRNAMet的基因XC4381已经退化为非编码RNA基因。本研究证明了tRF在Xcc中的存在,为深入研究tRF的功能,特别是在Xcc致病中的作用奠定了基础。