杂交竹梢枯病菌拮抗细菌筛选及其抗菌物质研究

本文以杂交竹梢枯病菌Arthrinium phaeospermum为生防目标,从健康杂交竹上筛选拮抗细菌,并对其发酵条件及抗菌物质进行了研究。结果表明,分离所得88株细菌中菌株ZB27对暗孢节菱孢菌Arthrinium phaeospermum有较好拮抗作用,平均抑制率达75.52%。形态学、生理生化特征和16S rDNA分析将其鉴定为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa。根据正交试验方差分析得出优化培养基配方为:牛肉膏5g,蛋白胨5g,蔗糖1g,(NH4)2SO40.05g,蒸馏水1000ml;最优发酵条件为:25℃,pH7.5,接种量1ml且装液量50ml于300ml三角瓶。其产生的抗菌物质具有耐热、耐酸碱、耐紫外、对氯仿不敏感等特点。

杂交竹梢枯病拮抗菌的筛选及抗菌蛋白分析

从健康的撑×绿杂交竹上分离、筛选得到抗杂交竹梢枯病菌(Arthrinium phaeospermum)的强拮抗菌株YB15。根据形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析,鉴定该菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-50分子筛层析、High Q Sepharose Fast Flow强阴离子交换层析和Sephadex G-75分子筛层析,从发酵液中分离纯化出一种分子质量约为31.0 ku的抗菌蛋白。稳定性试验显示该抗菌蛋白对蛋白酶K和胰蛋白酶不敏感,耐热,不耐酸碱和紫外线,对有机溶剂敏感性存在差异。

绛红褐链霉菌YSSPG3的鉴定及其抗菌蛋白纯化

从四川碧峰峡撑×绿杂交竹健康植株根际分离到对杂交竹梢枯病菌(Arthrinium phaeospermum)有强拮抗作用的放线菌菌株YSSPG3,该菌株的无菌发酵液对多种真菌和细菌具有抗菌活性。通过对菌株YSSPG3的形态特征、培养特性、生理生化特性、细胞壁组分与16S rDNA序列分析,确定为绛红褐链霉菌(Streptomyces purpeofuscus)。采用硫酸铵沉淀和柱层析法对发酵液中起主要抑菌作用的抗菌物质进行分离纯化,获得单一的抗菌蛋白AMP,分子量为5 075.619 Da,等电点为6.77。抗菌蛋白在温度≥60℃和pH<7,以及紫外线照射时间≥12 h的环境下抑菌活性均明显下降,但受蛋白酶K、胰蛋白酶和氯仿影响不大,无几丁质酶、葡聚糖酶等水解酶活性。利用Edman降解法测定抗菌蛋白N末端25个氨基酸序列,与来自Streptomyces tendae Tü901的chitin-binding protein AFP1的同源性较高,为81.00%。