阿尔茨海默病胞质杂交细胞的构建与其线粒体的结构功能变化

目的：探讨AD胞质杂交细胞的构建方法及其线粒体形态功能变化情况，为后续研究提供细胞模型。方法：利用融合剂将AD患者及健康老人血小板分别与线粒体DNA缺失细胞（ρ^0细胞）进行融合，建立AD和对照细胞质杂交细胞，透射电镜及PCR法鉴定；透射电镜观察胞质杂交细胞线粒体结构；MTT检测细胞活力；荧光探针DCFH—DA检测细胞内活性氧（ROS）水平。结果：ρ^0细胞与血小板融合后重新出现线粒体和mtDNA与同期对照组胞质杂交细胞比较，到培养晚期，AD胞质杂交细胞中异常线粒体显著增多，细胞活力明显降低，ROS水平明显增高。结论：成功构建出AD胞质杂交细胞和对照组胞质杂交细胞，为下一步的研究奠定了细胞模型基础。

牙鲆鳃细胞与中国对虾淋巴细胞杂交细胞的体外培养

利用PEG介导的细胞融合方法 ,将已成系的牙鲆鳃细胞与中国对虾淋巴细胞进行细胞杂交 ,对所获得的杂交细胞用MEM∶MPS( 1∶1)混合培养液进行体外培养。培养 5天后发现 ,杂交细胞长成了单层 ,传代培养后仍可继续生长和分裂。通过逐渐提高混合培养液中MPS的所占比例所筛选出的杂交细胞 ,目前已传 12代 ,生长和分裂势头仍然十分旺盛。通过接种对虾杆状病毒发现 ,10天后杂交细胞出现了明显的病变特征 (细胞收缩变圆、脱落、死亡 ) ,至 14天细胞便几乎完全脱壁死亡。取病变细胞的培养上清 0 .3mL再加入到一瓶已长成单层的杂交细胞中 ,结果 5天后杂交细胞也出现了明显的病变特征 ,而未接种病毒的对照组杂交细胞生长正常。可初步认为我们所得到的杂交细胞确为对虾 (杆状 )

太湖猪淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞杂交细胞的建立

以我国优良猪种小梅山（属太湖猪种）的脾淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０）作亲本，经聚乙二醇（ＰＥＧ）促融，ＨＡＴ培养基选择培养，先后得到２５株杂种细胞．并对杂种细胞进行染色体分析和同工酶电泳等研究．结果显示，杂种细胞系含有全部小鼠骨髓瘤细胞染色体，而猪染色体丢失迅速，仅保留猪的４号、５号、７～１０号、１２号、１３号、１５号和１７号等部分染色体，杂种细胞内能检测到全部小鼠同工酶活性，但仅能检测到相应猪的同工酶．上述鉴定结果表明，融合细胞为猪鼠体细胞杂合子，这工作为在我国开展体细胞杂交法定位家猪基因奠定了基础．

HBV适应性杂交细胞株的建立和初步研究

目的建立不同于HepG2细胞及人原代肝细胞的新型杂交细胞株,使该细胞株既能长期携带HBV又能体外传代培养。方法诱导HepG2细胞产生HGPRT基因突变,将筛选出的HGPRT阴性的HepG2细胞与携带HBV的人原代肝细胞进行融合得杂交细胞,用HAT培养基筛选出异核体杂交细胞,再利用有限稀释法进行克隆,通过核型分析方法鉴定所得细胞。对所得杂交细胞及培养上清液进行HBV DNA和HBsAg、HBeAg的检测。实验同时,用未杂交的HepG2和人原代肝细胞作对照。结果经筛选后,有一杂交细胞株(HepCHLine3)克隆成功。HepCHLine3在形态学上与HGPRT-HepG2细胞相似,能体外传代培养,染色体核型分析示HepCHLine3杂交细胞染色体众数为99条,证明为融合细胞株,含所有来自HepG2和人原代肝细胞的基因数。传代培养的Hep-CHLine3和其培养上清液用巢式PCR分别可检测到HBV DNA,培养上清液内检测到HBsAg和HBeAg。对照组的HepG2和人原代肝细胞相应结果为阴性。提示该细胞携带并分泌HBV DNA。结论该杂交细胞兼具HepG2细胞体外传代和人原代肝细胞对HBV易感的特性,是一新型杂交细胞系,为进一步建立新型HBV感染细胞模型奠定了基础。

小鼠骨髓瘤杂交细胞在动物体内的抗肿瘤保护作用

将小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞与脂多糖（ＬＰＳ）活化的同系动物来源的Ｂ淋巴细胞融合，获得１Ｆ１１和２Ａ６杂交细胞。采用荷瘤小鼠模型，观察了１Ｆ１１、２Ａ６杂交细胞的免疫治疗对小鼠存活率、小鼠脾ＣＴＬ细胞体外杀瘤活性的影响。结果显示，腹腔荷骨髓瘤小鼠经ＳＰ２／０杂交细胞治疗后第３周时存活率均为５０．０％，对照组小鼠全部死亡；１Ｆ１１、２Ａ６治疗组分别有３０．０％、２０．０％小鼠长期存活；杂交细胞治疗组小鼠脾ＣＴＬ细胞杀伤ＳＰ２／０细胞活性显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。结果表明，１Ｆ１１和２Ａ６杂交细胞具有一定的体内抗肿瘤治疗作用。

培养晚期AD胞质杂交细胞线粒体功能的异常变化

目的探讨AD胞质杂交细胞在培养过程中的功能变化情况,为AD的线粒体发病机制提供实验依据。方法GSH检测试剂盒(比色法)检测细胞匀浆中GSH含量,COX活性检测试剂盒(分光光度计法)测定COX活性,JC-1染色后流式细胞术和激光共聚焦显微镜术检测线粒体膜电位的变化。结果培养晚期AD胞质杂交细胞的GSH含量、COX活性、膜电位水平明显低于培养早期AD胞质杂交细胞,差异有统计学意义(t=8.048,P<0.001;t=12.758,P<0.001和t=2.751,P<0.05),也显著低于培养晚期CTL胞质杂交细胞(t=23.06,P<0.001;t=26.862,P<0.001和t=3.876,P<0.01)。结论AD胞质杂交细胞随着培养时间的延长,其线粒体功能显著降低,这是由于AD患者本身线粒体基因的缺陷所至。

肿瘤杂交细胞阻抑二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的实验研究

用灭活的肿瘤杂交细胞(融合细胞)免疫二乙基亚硝胺(DEN)诱发肝癌过程中的大鼠做实验。实验分三组:瘤苗免疫组、诱发对照组、空白对照组。实验全程均为18周。实验结果:瘤苗免疫组18只大鼠无一只发生肝癌,而诱发对照组16只大鼠中有10只发生肝癌,其余6只也出现了癌前期病变。结果提示:肿瘤杂交细胞在一定程度上能阻抑或延迟二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的发生。

用PCR分析方法检测体细胞杂交细胞中的人染色体

本文介绍一种快速高效检测人和啮齿类（大鼠和小鼠）体细胞的杂交细胞中人染色体的新方法。这种方法以聚合酶链反应促进人ＤＮＡ扩增为基础，引物为已定位的基因，或人的ＤＮＡ片段。

利用聚丙烯酰胺凝胶平板电泳对杂交细胞酯酶同功酶的分析研究

酯酶同功酶可作为遗传及表达活性的生化指标。本文利用柴胡和石防风两种药用植物 ,经过原生质体融合及组织培养后取其再生融合细胞的愈伤组织 ,采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳方法 ,进行酯酶同工酶电泳图谱分析 ,可以测得杂交细胞基因重组后是否有新的酯酶 (蛋白质 )表达与出现 。

AL杂交细胞在放射生物学研究中的应用

AL杂交细胞是近年来研究负荷粒子致突变效应较理想的一种分析体系,可用于直接检测低剂量突变因子的效应。用此体系研究某些人类基因之间的连锁非常方便,体系灵敏度高,具有其他体系细胞所不具备的优势,在放射生物学中可作为研究致突变效应的一种很好的工具。

染色体分化染色法(Giemsall)在杂交细胞系中的应用

在杂交细胞系(中国地鼠——人类细胞杂交或小鼠——人类细胞杂交)中。如何识别人类染色体是绘制人类基因图研究中的一大难题。尽管可用染色体的酶标记即同功酶电泳法来区分,但是耗费的试剂和时间甚多,因此如要建立含单条人类染色体的DNA文库,采用同功酶电泳法,以一个人的工作量计算两年方可完成。而用染色体分化染色只需要两个月则可获得同样满意的结果。

体细胞杂交在蔬菜作物上的研究与前景

体细胞杂交是一种将植物不同种、属,甚至科间的原生质体诱导融合,然后离体培养获得再生植株的技术。原生质体融合能克服传统育种的杂交生理障碍问题,实现不同材料间核质基因的重组,传递优异基因,创制并获得含目标性状的新种质,拓宽育种材料的遗传背景,同时能快速创制雄性不育材料,极大地缩短育种年限,是作物进行突破育种的有效手段和强大的性状改良工具。本文对该技术在蔬菜上的发展历程、研究和应用领域进行综述,重点总结了十字花科、茄科、伞形科蔬菜作物原生质体分离再生和体细胞杂交的研究进展,展望了体细胞杂交技术在蔬菜作物中的应用前景,讨论了该技术在应用过程中面临的问题与对策,为体细胞杂交在蔬菜上的广泛应用提供参考。

无血清培养杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器的工艺研究

目的:在WAVE-25生物反应器上,探讨抗人CD52杂交瘤细胞无血清流加培养方式的工艺条件,通过多种抗体质量检测加以验证,建立规模化的生产工艺,为后期的工艺放大提供参考。方法:探索无血清培养CD52杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器的工艺参数,在反应过程中依据活细胞密度、活率、pH值、溶氧以及免疫球蛋白G(IgG)含量、葡萄糖(Gluc)、谷氨酰胺(L-Gln)、乳酸(Lac)、铵根离子(NH_(4)^(+))等生长代谢参数进行过程监测和调控;通过蛋白纯化,利用流式细胞术,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)对CD52单克隆抗体纯品(简称CD52纯抗)进行特异性和纯度的检测和鉴定。结果:无血清培养CD52杂交瘤细胞通过流加培养方式在WAVE-252L生物反应器可稳定大规模培养,蛋白纯化后获得的CD52纯抗产率和质量得到显著提高,产率从100 mg/L提高至350 mg/L,提高了3.5倍;纯度从92%提高至100%;相同浓度下荧光强度提高了69%。结论:CD52杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器可大规模培养,通过工艺参数和反应过程中生化指标的调控获得的CD52纯抗产率和质量都有显著的提高,可为后续的大规模化生产提供参考。

用人鼠杂交细胞株探针进行染色体描绘

用人鼠杂交细胞株探针进行染色体描绘曾瑄，赵蓥，高春生，赵非非，刘国仰，杨焕明，程在玉荧光原位杂交（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｔｉｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ）是目前广泛应用的一种非同位素原位杂交技术，在基因定位、标记染色体的识别、染色体...

分泌抗脊髓灰质炎 Ⅱ型病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系

许多年来细胞生物学家进行了很多有关细胞杂交的实验研究,将具有不同遗传特性的两种动物细胞进行融合,形成一种新的杂交细胞,用来进行特定基因在染色体上的定位、基因表达以及动物细胞其它遗传特性的变化等方面的研究。为了观察免疫球蛋白产生的遗传控制,许多实验室进行了小鼠骨髓瘤细胞与其它细胞系之间相互融合的试验。在这样的研究中,Khletr和Milstein 1975,1976)证明,培养的小鼠骨髓瘤细胞能够同用羊红血球免疫了的动物脾细胞发生融合,从中选择出少量的杂交瘤细胞。

抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与中和效应

用提取的 Ａ 型产气荚膜梭菌 α毒素包涵体免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠后， 取小鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／０ 骨髓瘤细胞进行融合和克隆化，经间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 筛选，共获得 １ Ａ８、１ Ｃ３、１ Ｄ５、１ Ｄ８、１ Ｆ１、１ Ｈ１ 和 ２ Ｅ３ ７ 株稳定分泌单克隆抗体（ Ｍ ｃ Ａｂ）的杂交瘤细胞株。经鉴定，７ 株 Ｍ ｃ Ａｂ 的 Ｉｇ 亚类有 Ｉｇ Ｇ１（１ Ｄ８）、 Ｉｇ Ｇ３（１ Ａ８、１ Ｃ３ 和 ２ Ｅ３）和 Ｉｇ Ｍ（１ Ｄ５、１ Ｆ１ 和 １ Ｈ１）。细胞培养上清和腹水抗体效价分别为 １∶５１２～１∶１ ０２４ 和 １∶１０６ ～１∶１０８ 。尤为重要的是，２ Ｅ３ 杂交瘤细胞株分泌的 Ｍ ｃ Ａｂ 不仅能够中和 α毒素的磷脂酶 Ｃ活性和溶血活性，而且能够对致死性腹腔感染小鼠产生良好的被动保护作用。

分泌牛种布鲁氏菌单克隆抗体杂交瘤细胞A_7的悬浮培养研究

牛种布鲁氏菌杂交瘤细胞Ａ７珠分泌高中和性的抗牛种布鲁氏菌单抗ＩｇＧ＿１，该细胞被培养在Ｔｅｃｈｎｅ－Ｔ１０４型１．５升细胞培养装置中，此装置显示很低的机械剪切力。在悬浮培养时，Ａ＿７细胞密度可达１．２３×１０￣６／ｍｌ以上，单克隆抗体效价达１：５１２。

胞质因子对肿瘤细胞恶性的调控研究——小鼠骨髓瘤细胞与网织红细胞胞质体的胞质杂交实验

本研究选用无细胞核而富含珠蛋白mRNA的正常小鼠网织红细胞与骨髓瘤细胞系中的BW—胸腺淋巴肉瘤细胞系,NS—1浆细胞瘤细胞系和P388淋巴瘤细胞等分别进行胞质杂交的实验,以研究胞质因子调控肿瘤细胞恶性的可能性。实验结果表明三种淋巴瘤细胞在并入网织红细胞胞质体后所形成的杂交细胞呈现下列去恶性化的特征:1.杂交细胞出现组织化学反应及超微结构的形态改变;2.细胞分裂指数及生长速度明显下降;3.作异种移植至裸鼠后丧失发生肿瘤的能力;4.染色体数量明显减少,畸变率下降;5.出现基因产物血红蛋白的联苯胺阳性反应,并在BW—R杂交细胞传20多代过程中持续出现。对胞质体杂交细胞中基因产物血红蛋白的连续表现,染色体的丢失和在异种接种中丧失长瘤能力的可能机理予以讨论。

Vero、CHO和杂交瘤细胞在生物反应器中的生长和代谢

目的 研究Ｖｅｒｏ、ＣＨＯ和杂交瘤细胞在生物反应器中的生长和代谢。方法 应用搅拌式生物反应 器，培养了Ｖｅｒｏ、ＣＨＯ和鼠杂交瘤７Ｈ３细胞，对营养物质及代谢产物进行定量分析．测定各个培养中发酵相关参数。 结果 培养过程中葡萄糖和谷氨酰胺的摄取与培养液中两者的浓度正相关。控制营养物质的加入可提高细胞产 量。结论Ｖｅｒｏ、ＣＨＯ和７Ｈ３细胞在生物反应器培养中有相同的生长和代谢模式。