丁香杂交胚离体培养的研究

为了充分利用我国丰富的丁香资源,培育丁香新品种,我们从1985年开始,持续进行了丁香属的杂交育种工作。同时为了克服杂交胚的败育现象,应用了幼胚培养技术,于1988年初步培育出一年两次开花的新品种——四季兰丁香。但是有的杂交组合,采用一般幼胚培养也未能使其杂交胚发芽成植株。为了解决这个问题,从1988年开始,进行了授粉后不同发育期杂交胚的离体培养及其发芽能力的研究。关于丁香属植物的组织培养,国外报道过欧洲丁香的茎尖培养、丁香的胚培养,国内外尚未见报道。

不同取胚时期对葡萄杂交胚培养的影响

对无核白等4个葡萄品种的杂交胚在不同时期取胚培养,对胚发育和萌发结果进行曲线回归,通过回归方程和拟合曲线找出不同杂交胚生长发育的特点和规律。结果表明,不同杂交胚适宜的取胚时期各不相同。回归方程中常数越大,其对应的杂交胚越容易培养,其发育率和萌发率较高。取胚时期内,多数杂交胚发育和萌发的变化趋势表现为峰形曲线。

柚杂交胚离体培养再生植株的研究

以王官溪蜜柚和度尾文旦柚互交产生的杂交种幼胚为材料,研究离体胚再生植株的技术.结果表明:幼胚在MT培养基上直接成苗质量最好;子叶在MT附加0.25mg·L-16-BA+0.5mg·L-1ZT+0.01mg·L-1NAA固体培养基中产生不定芽;带子叶胚轴在MT附加1mg·L-16-BA+0.2mg·L-1IAA+1mg·L-1GA3的固体培养基中可提高其萌芽率,繁殖系数扩大了20倍以上;分化的丛生芽是试管微芽嫁接的良好接穗材料,将芽苗转移到1/2MS+0.5mg·L-1IBA+0.5mg·L-1NAA的固体培养基中诱导生根壮苗最好.

核桃杂交胚的离体培养研究

以＂香玲×辽一＂核桃杂交胚为试材,研究了不同生长调节剂、p H值对离体胚萌发、生根和成苗的影响,筛选最佳培养条件。结果表明：以MS为基本培养基,不添加任何生长调节剂的胚的萌发率达到90.2%,生根率达到89.6%,并且生长健壮;适宜的p H值为6.0～6.5,种胚培养4周后即可成苗,选生长健壮的生根苗（不需要炼苗）移栽到经高压灭菌的蛭石中,成活率可达90%以上。

葡萄无核二倍体与四倍体杂交胚挽救及后代倍性分析

为培育三倍体无核葡萄新品种,分别以二倍体无核葡萄品种‘Flame Seedless’、‘Sweet Scarlet’和‘无核白’为母本,以四倍体品种‘巨峰’为父本进行杂交,研究不同取样时期、不同萌发培养基和不同珠被处理方式对杂种胚成苗影响的研究,并通过流式细胞仪对杂种后代进行了三倍体类型初选。结果表明:不同时期剥取的胚珠在成苗率方面有显著差异,不同杂交组合适宜取材时期也不同,其中‘无核白’ב巨峰’为30d、‘Sweet Scarlet’ב巨峰’为35d、‘Flame Seedless’ב巨峰’为40d;在胚萌发阶段,接种在1/2MS+IAA 0.1mg/L培养基上有利促进胚萌发;直接剥取裸胚萌发较快,且能显著提高杂交胚的成苗率。经倍性分析,初步确定获得了三倍体杂种幼苗22株。

甜菜远缘杂交胚培养及植株再生

以甜菜远缘杂交胚为外植体进行离体培养时，在MS培养基上，适合胚继续生长、分化的激素浓度为0．5mg／LNAA、0.5mg／L6BA。胚的离体时期至关重要，初步认为以授粉6～8天的远缘杂交胚的离体再生诱导率最高。同时比较了正、反远缘杂交的受精效果和诱导率，存在明显差异。

桃杂交种胚培养技术探析

为提高桃杂交种胚的成活率,克服远缘不亲和性,利用组织培养技术研究不同激素配比对杂交胚成活率的影响。结果表明,最适芽萌发培养基为MS+6-BA(0.5 mg/L)+NAA(0.2 mg/L),萌发率达86%;丛生芽诱导最佳增殖培养基为MS+6-BA(0.3 mg/L)+NAA(0.1 mg/L),增殖系数为5.28;最适生根培养基1/2MS+IBA(0.5mg/L)+NAA(0.1 mg/L),生根率为91%。

中熟桃品种黄妃杂交种胚培养的研究

针对中熟桃品种黄妃存在大量种子败育,影响育种效率和进程的问题,春季以黄妃做母本,黄金蜜1号为父本进行杂交,8月初果实成熟后收集杂交种子,研究了不同基本培养基中加入不同植物生长调节剂与浓度的培养基上接种种胚的培养效果。结果表明,杂交种胚在基本培养基WPM上加入1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA的培养基上具有最高的发芽率;在同浓度IBA条件下,6-BA浓度越高,种胚的发芽率越高,幼苗苗高越高而发根数减少;IBA浓度与根的发育成正相关。

杜鹃杂交幼胚拯救技术的初步研究

为克服杜鹃远缘杂交受精后障碍,提高杜鹃杂交胚的萌发率,本研究以南京地区栽培的映山红、满山红、马银花和锦绣杜鹃为母本,以云南、浙江等地的野生杜鹃为父本进行杂交,对杂交胚进行了最佳初代基本培养基类型的探讨,同时观察了基因型及胚龄对杂交胚萌发状况的影响。结果表明,大多数杂交组合的杂交胚在WPM基本培养基中萌发率高,生长势好,其次是在MS基本培养基中,适宜的杂交组合数仅次于WPM基本培养基。基因型及胚龄对杂交胚的萌发率及成苗途径均有显著影响。同一杂交组合,母株及花粉种源地的差异也会影响杂交胚的萌发。不同杂交组合,最适宜胚拯救时期也不同,并且对于大多数组合的杂交胚而言,幼龄胚更易形成愈伤组织,相对成熟的胚更易形成苗。

扁桃杂交幼胚培养初报

采用人工授粉后46～74 d的杂交扁桃幼胚进行胚培养,诱导萌发产生试管苗,将试管苗再进行分化增殖.结果表明：最佳培养材料的获得时间是人工授粉后60 d,MS基本培养基最适合胚生长萌发;G培养基附加BA 0.5 mg·L^-1,IBA 0.15 mg·L^-1或0.2 mg·L^-1为试管苗分化增殖的最佳组合.

巨胚杂交稻的农艺及产量性状

以2个巨胚不育系及其相应的2个非巨胚不育系,3个巨胚恢复系、2个非巨胚恢复系为材料,配制一套共20个半双列杂交组合,研究巨胚(ge)基因对杂交稻的若干生物学特性的影响。结果表明:ge基因对杂交稻主要农艺性状和部分产量性状没有显著影响,但ge基因使杂交稻的千粒重、容重、理论产量和实际产量下降,且只有在纯合时才有显著表达。含杂合geGE基因也使其上述性状有所下降,但幅度明显小于gege纯合基因。

斑马鱼高分辨率整胚原位杂交实验方法与流程

整胚原位杂交技术是利用反义RNA探针检测体内mRNA表达的一项技术,在利用模式动物研究基因时空表达方面有着重要的应用。如何使用该技术得到特异、高敏感度的表达结果,对每一个使用该技术的实验室来说都很重要。本实验室参照常规的实验方法,对该技术加以改进,使之更加灵敏,结果更加特异。文章主要以斑马鱼为例,介绍了整胚原位杂交技术的发展历史,并重点介绍了本实验室所用的整胚原位杂交实验流程,同时还分析了实验结果不理想的原因及其解决方法。

尼罗罗非鱼整胚原位杂交技术的建立和初步应用

为了研究尼罗罗非鱼胚胎发育和器官形成过程中基因功能和基因表达图式,本研究建立了尼罗罗非鱼的整胚原位杂交流程。尼罗罗非鱼的胚胎具有卵黄大、不透明、色素出现早等特点,因此现有鱼类整胚原位杂交方法不能完全适用于尼罗罗非鱼的胚胎,故本研究做了相应的调整和优化:通过提高H2O2的浓度和添加KOH,改良了尼罗罗非鱼胚胎的色素去除方法;使用冷丙酮代替蛋白酶K在提高胚胎通透性的同时保持胚胎完整;减少了探针回收和抗体回收后的洗涤次数,完善了结果的图像采集和胚胎保存方案。使用尼罗罗非鱼的重组激活基因Rag1作为探针基因,整胚原位杂交结果显示Rag1基因表达的位置与已报道的斑马鱼和日本青鳉的Rag1基因在胚胎中的表达位置高度保守,胚胎完整,基因表达位置清晰可见,表明此套尼罗罗非鱼的整胚原位杂交技术流程成功有效。

斑马鱼整胚原位杂交和显微注射转基因技术的建立(简报)

随着人类基因组框架图的完成,解读大量基因的功能和表达调控成为亟待解决的问题.因此通过模式生物从个体水平、细胞水平和分子水平研究基因功能及其表达调控日益成为一个重要的研究领域.

小鼠早期胚胎的全胚原位杂交技术

目的:探索一种适合于早期胚胎基因表达型检测的全胚原位杂交技术。方法:收集小鼠囊胚、固定;制备VASP、IL1R2基因特异性地高辛标记的cRNA探针;对囊胚进行杂交前处理、全胚原位杂交、抗体处理、显色以及显色后处理与镜检。结果:VASP、IL1R2特异性表达在囊胚的内细胞团细胞和滋养层细胞中。结论:小鼠早期胚胎全胚原位杂交技术适用于早期胚胎基因时空表达型的检测。

甜菜单胚型杂交种良种繁育技术探讨

总结了多年雄性不育甜菜单胚型杂交种的良种繁育实践经验,对该类品种的良种繁育主要原则和技术措施进行探讨。提出了繁育该类种子的产质量保证体系和特殊技术要求;分析了种子生产的内因和外因的辩证关系,以及抓管理和落实的重要意义;探讨了提高种子产质量的高效实用技术和相关辅助工作的操作方法。

鱼藤素对斑马鱼胚胎中细胞周期蛋白D1基因下调的作用：整胚原位杂交检测

背景:斑马鱼胚胎发育早期,细胞分裂增殖快速,低浓度的鱼藤素可以延缓斑马鱼胚胎发育。目的:观察鱼藤素对斑马鱼胚胎中细胞周期蛋白D1基因的表达影响。方法:收集正常受精后发育至2-cell期(受精后约0.75 h)以及shield期(受精后6 h)斑马鱼胚胎于12孔板,分别用100,200,400 nmol/L鱼藤素在28.5℃的培养箱中避光处理至shield期及受精后24 h。同时用1%的二甲基亚砜溶液作为对照组,于相同条件下培养。后收集对照组及实验组胚胎,制备细胞周期蛋白D1 RNA探针进行整胚原位杂交,于正置荧光显微镜下拍照观察染色情况以检测鱼藤素对胚胎中细胞周期蛋白D1基因的表达影响。结果与结论:鱼藤素对斑马鱼胚胎中细胞周期蛋白D1基因的表达有明显的负调控作用。Shield期对照组胚胎细胞周期蛋白D1在外包细胞中泛表达,随着给药浓度的增加,细胞周期蛋白D1的表达显著减少,400 nmol/L鱼藤素处理组几乎不表达。受精后24 h的胚胎中细胞周期蛋白D1在脑部、中枢神经系统、发育未成熟的眼部、体节、躯干、尾部等有表达,100 nmol/L鱼藤素处理组表达明显下调,在增殖性区域几乎不表达。200,400 nmol/L处理组胚胎发育明显延缓,细胞周期蛋白D1主要表达于背侧外胚层细胞。

橘色双冠丽鱼黑素皮质素受体1基因(MC1R)整胚原位杂交

为探究黑素皮质素受体1基因(MC1R)在橘色双冠丽鱼胚胎发育和体色形成过程中的表达定位及功能,本研究首先制备了MC1R基因的RNA正反义探针,T7方向转录的正义RNA探针质量浓度为447.529ng/μL,SP6方向转录的反义RNA探针质量浓度为342.698ng/μL。经10~20倍稀释后的探针用于原位杂交,MC1R基因探针表达定位显示,随橘色双冠丽鱼胚胎的发育杂交信号总体呈逐渐减弱趋势,原肠期和视泡期其卵黄和胚体侧卧部分有杂交信号分布;出膜期其脊柱、卵黄囊及其内容物和色素细胞内出现杂交信号;出膜期第1天,卵黄表面有信号分布。总体来看,杂交信号在脊索、卵黄囊、卵黄囊内容物质及色素细胞有特异表达,而以正义探针作为阴性对照组在5个胚胎阶段均无任何信号,杂交信号显现的MC1R表达定位说明其在橘色双冠丽鱼色素细胞的分化、迁移中起到重要调控作用,也与神经、营养、免疫功能相关,初步建立了鱼类体色相关基因功能和定位研究的整胚原位杂交方法。