用双向Southern转移-杂交法进行克隆的基因分析

用双向Southern转移和分子杂交方法,分析证明了SRSV有关的克隆pSF11插入子含有LTR结构、非编码区、gag基因和部分env基因。并讨论了该方法的优缺点。

人脑中硒蛋白W与鞘脂激活蛋白原相互作用的筛选与验证

硒蛋白W(SelW)是人脑中一种重要的硒蛋白.在缺硒的条件下,SelW在脑中具有优先储备的特性,但其具体机制和在脑中的功能至今尚不清楚.本文以SelW突变体SelW′为"诱饵",采用酵母双杂交系统对人胎脑文库进行筛选,获得与SelW相互作用的蛋白,其中一种为鞘脂激活蛋白原(PSAP).采用荧光共振能量转移技术中的受体漂白和敏化发射两种方法,验证了SelW与PSAP的相互作用.构建表达载体在大肠杆菌中成功表达出SelW′,利用Pull-down技术验证了SelW′与PSAP在细胞外的直接相互作用.采用免疫共沉淀的方法验证了上述两种蛋白在昆明小鼠脑组织中的内源性相互作用.基于SelW和PSAP的已知生物功能,推测SelW可能在脑部发育和神经退行性疾病形成过程中发挥着重要作用.