83例散发性结直肠癌D22S274位点杂合缺失分析

目的 抑癌基因的杂合缺失 (LOH)被认为是结直肠癌形成的关键步骤之一 ,当一条等位基因已经异常的抑癌基因发生杂合缺失可导致肿瘤的形成。本实验通过对 83例散发性结直肠癌D2 2S2 74位点杂合缺失情况作一研究 ,并探讨其意义。方法 微卫星DNA标记D2 2S2 74与 83例结直肠癌病例的肿瘤和正常组织进行PCR反应。 83例散发性结直肠癌 ,男 4 0例 ,女4 3例 ,年龄 31至 84岁 ,中位年龄 6 6岁。PCR产物在ABIPrism 377自动荧光测序仪进行电泳 3小时 ,以GeneScan3.1和Genotyper 2 .1软件进行遗传位点扫描以及杂合缺失分析。LOH与临床病理参数之间的关系比较采用 χ2 检验 ,P <0 .0 5被视为有统计学意义。结果 D2 2S2 74 (2 2 q13.32 13.33)位点的杂合缺失率 34.0 4 %。直肠癌的杂合缺失率为 5 0 % (9/ 18) ,高于近端结肠癌的 12 % (2 / 17) (P =0 .0 18) ,远端结肠癌的杂合缺失率为 4 2 % (5 / 12 )较近端结肠的杂合缺失率高 ,但无统计学差异 ,然而将远端结肠、直肠一起考虑 ,它们的杂合缺失率 (14 / 30 ,4 7% )高于近端结肠 (2 / 15 ,13% ) (P =0 .0 15 ) ,提示远端结肠、直肠癌与近端结肠癌发生机制可能有所不同。结论 2 2 q13.32 13.33区域可能存在与结直肠癌发生相关的抑癌基因。

胃癌微卫星不稳定性和抑癌基因杂合缺失

目的研究微卫星不稳和抑癌基因缺失在胃癌发生中的作用．方法采用ＰＣＲ为基础的方法，检测了５３例胃癌中６个微卫星标记突变及ＡＰＣ／ＭＣＣ和ＤＣＣ基因杂合缺失（ＬＯＨ）．结果胃癌微卫星不稳的检出率为３２１％（１７／５３）．７例（１３２％）为微卫星高频率不稳（３个以上微卫星标志），１０例（１８９％）为微卫星低频率不稳（１或２个微卫星标记）．肠型胃癌微卫星高频率不稳的发生率（２５０％）显著高于弥漫型胃癌（３４％）（Ｐ＜００５）．高频率不稳组未发现有ＡＰＣ，ＭＣＣ和ＤＣＣ基因ＬＯＨ，微卫星高频率不稳与ＡＰＣ／ＭＣＣ和ＤＣＣ基因ＬＯＨ呈负相关．结论微卫星不稳在部分胃癌，特别是肠型胃癌早期发生中起重要作用，高频率不稳胃癌与遗传性非息肉大肠癌有共同的特点．与此相反。

胃粘膜肠化生组织YNZ22基因杂合缺失及p53基因突变、蛋白表达的研究

为探讨YNZ2 2基因杂合缺失 (LOH)及 p5 3基因突变、蛋白表达在胃粘膜肠上皮化生中的作用 ,应用PCR RFLP、PCR SSCP及免疫组化技术检测了不同类型肠化生组织中YNZ2 2基因LOH、p5 3基因素 5～ 8外显子突变及其蛋白表达。结果显示 ,YNZ2 2LOH率为 19.4% (6 / 31) ,p5 3突变率为 2 9.8% (14/ 47) ,p5 3蛋白表达率为 10 .0 % (6 / 6 0 )。将肠化生分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型 ,发现Ⅲ型肠化生中 p5 3突变率及其蛋白阳性表达率分别为5 7.1% (8/ 14)和 2 7.8% (5 / 18) ,均显著高于Ⅰ (18 2 % )、Ⅱ型肠化生 (2 .4% ) (均P <0 .0 5 )。p5 3蛋白表达与 p5 3基因突变显著相关 (P <0 .0 5 ) ,YNZ2 2LOH与 p5 3突变及蛋白表达无显著相关性 (P >0 .0 5 )。提示 ,YNZ2 2基因LOH及 p5 3基因异常可能在胃粘膜肠化生的发生及其癌变中起一定作用 ,p5 3基因有可能成为胃癌早期诊断的分子指标。

儿童哮喘α_1-抗糜蛋白酶杂合缺失研究

目的探讨α1 抗糜蛋白酶(α1 antichymotrypsin,α1 ACT)杂合缺失是否为儿童哮喘发病的遗传因素。方法应用火箭免疫电泳技术检测90例哮喘儿童、180例健康儿童及200例健康成人血浆α1 ACT含量 ,家系调查确定α1 ACT杂合缺失 ,统计学方法分析α1 ACT杂合缺失和非缺失患儿的有关临床资料。结果哮喘组、儿童对照组以及成人对照组α1 ACT杂合缺失频率依次为4.4 %、0、0.05 % ,哮喘组较成人对照组明显增高[Prevalenceradio(PR)=8.89, 2MH =5.68,95 %置信区间(1.47,53.60) ,P<0.05] ;且α1 ACT杂合缺失患儿哮喘初发年龄早、住院次数多、放射性过敏原吸附试验阳性率显著增高[PR=3.91, 2MH=10.190,95 %置信区间(1.69,9.03) ,P<0.01]。结论α1 ACT杂合缺失与儿童哮喘发病及其严重性存在一定的联系。

广州市汉族哮喘儿童α_1-抗糜蛋白酶杂合缺失分析

目的探讨α1 -抗糜蛋白酶 (α1-antichymotrypsin,α1-ACT )杂合缺失是否为广州市儿童哮喘发病的遗传机制以及地理环境是否影响α1-ACT杂合缺失在儿童哮喘中的分布。方法应用火箭免疫电泳技术对广州市50例哮喘儿童、50例健康儿童及100例健康成人血浆α1 -ACT含量进行检测 ;经家系调查确定3组α1-ACT杂合缺失频率 ;比较了哮喘组α1-ACT杂合缺失及非缺失患儿的临床资料。结果α1-ACT杂合缺失频率哮喘组、儿童对照组以及成人对照组依次为14 %、2 %、1 % ,哮喘组较儿童对照组明显增高 (χ2=4.891,P<0.05) ;广州市哮喘儿童α1-ACT杂合缺失频率 (14 % )明显高于重庆市哮喘儿童 (4.4 % ) ,χ2 =4.054,P<0.05 ;哮喘组α1 -ACT杂合缺失与非缺失患儿比较 ,前者哮喘住院次数多 ,放射性过敏原吸附试验阳性率显著增高。结论α1-ACT杂合缺失与儿童哮喘发病存在一定的联系 ;地理环境影响α1 -ACT杂合缺失频率分布。

散发性结直肠癌4号染色体长臂的杂合缺失分析

目的:通过在4号染色体长臂高频杂合缺失(LOH)位点寻找结直肠癌相关的肿瘤抑制基因。方法:荧光标记的微卫星引物与83例结直肠癌的肿瘤和正常组织进行聚合酶链反应(PCR)。PCR产物在ABI 377DNA测序仪进行电泳分析,用Genescan 3.7和Genotype 3.7软件进行扫描及LOH分析。LOH结果与临床、病理因素进行χ2检验。结果:4号染色体长臂(4q)的平均LOH率为28.56%,发现明显的2个高频LOH区间,一个在D4S3000和D4S2915位点之间(4q12～21.1);另一个在D4S407和D4S2939位点之间(4q25～31.1)。在D4S3018位点,肿瘤直径>5cm的LOH明显高于直径<5cm的LOH(56%vs13.79%,P=0.01)。在D4S1534位点,肝转移的LOH明显高于未发生肝转移的患者(80%vs17.25%,P=0.012)。结论:2个4号染色体长臂的高频杂合缺失区域4q12-21.1、4q25-31.1可能存在散发性结直肠癌发生、发展相关的肿瘤抑制基因。

神经鞘瘤D22S268杂合缺失与组织学类型的相关性研究

目的 探讨神经鞘瘤组织学类型与NF2基因微卫星标记D2 2S2 6 8杂合性缺失 (LOH)的相关性。方法 选择与NF2基因密切相关的微卫星标记D2 2S2 6 8,应用PCR方法检测 35例神经鞘瘤患者的新鲜肿瘤组织标本。结果 病理分型为AntoniA型 2 0例 ,其中LOH 15例 ;AntoniB型 15例 ,LOH 0例。两种病理分型中D2 2S2 6 8LOH发生率存在着显著差异 (P <0 .0 1)。结论 NF2基因的LOH可能在AntoniA型的神经鞘瘤发生过程中起决定性作用。

食管癌APC/MCC基因杂合缺失的研究

目的 研究APC/MCC基因杂合性缺失 (LOH)与食管癌发生发展的关系。方法 应用多聚酶链反应技术及限制性片段长度多态现象对 46例食管癌APC和MCC基因的LOH进行了分析。结果 食管癌APC和MCC基因LOH阳性表达分别为 2 9.0 % (9/31)和 33 .3 % (8/2 4)。结论 APC、MCC基因的LOH是食管癌的常见改变 ,可能参与了食管癌的发生。

哈萨克族食管癌患者3号染色体短臂3p24等位基因杂合缺失的研究

应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,配合限制片段长短多态现象(restriction fragment length polymorphisms,RFLP)分析,对16例新疆哈萨克族食管癌病人3号染色体短臂3p24等位基因杂合缺失(loss of heterozy-gosity,LOH)进行了测定,并同汉族、维吾尔族食管癌病人3p24杂合缺失进行了比较.结果显示,哈萨克族3p24杂合缺失率为100%(11/11),汉族为42.8%(3/7),维吾尔族为33.3%(1/3).提示3p24EAβMD、EAβH基因座位杂合缺失的检测有可能成为哈萨克族食管癌早期诊断的分子标志.

大肠癌组织APC/MCC和DCC基因杂合缺失的研究

采用聚合酶链反应(PCR)技术.并配合限制性片段长度多态性(RFLP)分析。对41例大肠癌组织APC/MCC和DCC基因的杂合缺失(LOH)进行研究。APC基因LOH率为28.0％(7/25),MCC基因LOH率为36.40％(8/22),两者综合分析LOH率为38.9％(14/38)。DCC基因LOH率为55.3％(21/38)。DCC基因在有淋巴结转移组的LOH率(80.0％),显著高于无淋巴结转移组(39.1％)(P<0.05),在Dukes C、D期组的LOH率(71.4％)显著高于A、B期组(35.3％)。以上结果提示,APC/MCC和DCC基因的LOH是大肠癌常见的基因改变,DCC基因LOH的测定有可能成为大肠癌病人预后评估的指标。

人胃癌组织中APC基因杂合缺失的分析

人胃癌组织中ＡＰＣ基因杂合缺失的分析北京医科大学临床肿瘤学院崔建涛，吕有勇目前已证明：ＡＰＣ基因的突变、缺失除与结肠癌有关外，与其它一些肿瘤，如肺癌、食管癌、胰腺癌也有关。国外有报道在胃癌中发现有ＡＰＣ基因缺失。本实验室在对我国建立的几株胃癌细胞系的...

大肠癌组织大肠癌缺失基因杂合缺失的研究

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限制性片段长度多态性分析（ＲＦＬＰ）技术，对４ｌ例大肠癌组织大肠癌缺失基因杂合性缺失进行研究。结果表明，３８例大肠癌信息个体中有２１例（５５．３％）发现ＤＣＣ基因杂合缺失。ＤＣＣ基因杂合性缺失与肿瘤大小、组织学类型和浸润深度无关，但有淋巴结转移（８０．００％）和ＤｕｋｅｓＣ、Ｄ期（７１．４％）大肠癌Ｄｃｃ基因杂合缺失率显著高于无淋巴结转移（３９．１％）和ＤｕｋｅｓＡ、Ｂ期组（３５．３％，Ｐ＜０．０５）。结果提示，ＤＣＣ基因杂合缺失多发生于大肠癌的晚期，ＤＣＣ基因杂合性缺失的检测有可能成为大肠癌病人预后评价的指标。

毛细管电泳法检测胃癌APC基因第十一外显子的杂合缺失

采用聚合酶链反应(PCR)扩增了胃癌及癌旁正常组织中APC基因易发生杂合缺失的第十一外显子的部分碱基序列,扩增样品分别经96℃变性和RsaⅠ酶切处理,以毛细管电泳(CE)-单链构象多态性(SS-CP)、CE-限制性片段长度多态性(RFLP)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)-SSCP对其杂合缺失情况进行检测。PAGE凝胶浓度为15%。CE检测条件:以3.0%聚环氧乙烷(PEO)为筛分介质,1×TBE(pH 8.2)为电泳缓冲液,分离电压15 kV,温度15℃,结合激光诱导荧光(λex=488 nm,λem=520 nm)检测。不同方法的检出率由高到低分别为:CE-SSCP(30%)>PAGE-SSCP(25%)>CE-RFLP(20%)。并证实了APC基因易发生杂合缺失在胃癌组织中的突变率高于10%,且CE-SSCP方法较PAGE-SSCP和CE-RFLP的检出率高。CE-SSCP检测方法具有快速、灵敏度高等优点,可为建立简便可靠的胃癌临床早期诊断方法奠定基础。

乳腺癌染色体3P^(14-24)区域不同位点杂合缺失的初步分析

目的： 研究染色体杂合缺失与乳腺癌生物学行为和预后的关系。方法：应用ＰＣＲ－ 限制性长度片段多态性分析（ＰＣＲ－ ＲＦＬＰ） 的方法，对５６ 例原发性乳腺癌患者３ 号染色体短臂３Ｐ１４ －２４ 区域杂合缺失（ＬＯＨ） 进行分析。结果：在染色体３Ｐ１４ 、３Ｐ２１ 、３Ｐ２４ 三个位点上ＬＯＨ 发生的频率分别为４ ．２ ％ （１／２４） 、０（０／９） 和３９ ．５ ％ （１５／３８） ，３Ｐ２４ 位点ＬＯＨ 发生的频率最高，说明该位点有乳腺癌相关抑制基因存在的可能性。分析３Ｐ２４ 位点的ＬＯＨ 与临床分期、淋巴结转移和ＥＲ、ＰＲ 的相关关系，发现在８ 例Ⅰ期乳腺癌信息个体中该位点ＬＯＨ 全部为阴性，在Ⅱ、Ⅲ期病例ＬＯＨ 阳性率分别为５２ ．２ ％ （１２／２３） 和４２ ．８ ％ （３／７） ；在腋淋巴结转移和无转移组病例中分别为６６ ．７ ％ （１２／１８） 、１５ ％ （３／２０） ，两组间有显著性差异（ Ｐ＜ ０ ．０１） ；ＥＲ 或ＰＲ 阴性的乳腺癌也较ＥＲ、ＰＲ 阳性者有较高的ＬＯＨ 发生率。说明在Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌以及淋巴结阳性、ＥＲ 或ＰＲ 阴性的肿瘤中该位点的缺失更频繁，提示３Ｐ２４ 位点基因缺失与病程进展快、侵袭性程度高和预后差的肿瘤有关。结论：通?

肝细胞癌17p13.3位点杂合缺失及其临床意义

目的探讨染色体17p13.3位点杂合缺失与肝细胞癌临床病理参数的关系。方法采用PCR扩增肝细胞癌组织和癌旁正常肝组织17p13.3位点的3个微卫星标志,即D17S643,D17S926和D17S1574,并比较和确定杂合子等位基因缺失。结果 3个微卫星标志总的杂合率为89.8%(79/88),杂合缺失率为41.7%(33/79);杂合缺失与肝细胞癌门静脉癌栓和肝内转移明显相关(P<0.01)。结论染色体17p13.3位点杂合缺失是肝细胞癌最常见的遗传学事件之一,该位点的缺失与肝癌门静脉癌栓和肝内转移密切相关。

口腔鳞癌3p24等位基因杂合缺失的研究

目的：探讨 ３ 号染色体短臂 ２ 区 ４ 带（３ｐ２４）等位基因杂合缺失与口腔鳞癌临床相关因素之间的关系。以及抑癌基因在口腔鳞癌发生、发展中的作用。方法：对 ４０ 例口腔鳞癌及正常组织的手术标本应用聚合酶链反应技术配合限制性片段长度多态性（ Ｐ Ｃ Ｒ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ）分析方法进行检测。结果：３ｐ２４ 等位基因两个基因座位 Ｅ Ａβ Ｍ Ｄ和 Ｅ Ａβ Ｈ 杂合缺失分别为５０．０％ 和 ６２．５％ 。３ｐ２４ 等位基因杂合缺失在口腔鳞癌病理分级中有显著差异（ Ｐ＜ ０．０１）。在各民族间元差异（ Ｐ＞ ０．０５）。结论：３ｐ２４ 位点的抑癌基因在口腔鳞癌的发生、发展中具有重要作用，３ｐ２４ 等位基因杂合缺失和较差的预后因素相关，有可能成为判断临床预后的可靠指标。

口腔鳞癌临床因素与APC基因杂合缺失的研究

目的 分析APC基因杂合缺失与口腔鳞癌病理分级、临床分期之间的关系 ,探索抑癌基因在口腔鳞癌发生、发展中的作用。方法 应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法 (PCR -RFLP)对 40例口腔鳞癌组织中APC基因的杂合缺失 (LOH)进行检测。结果 APC基因的LOH频率为 6 6 .6 % ;病理分级中 ,低、中分化组APC基因的LOH频率均高于高分化组 (P <0 .0 5 ) ;临床分期中 ,APC基因的LOH频率在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期两组间无差异 (P >0 .0 5 )。结论 APC基因的失活在口腔鳞癌的发生。

口腔鳞癌染色体3p14-24区域不同位点杂合缺失的分析

目的 探讨 3号染色体短臂 14 2 4区域等位基因杂合缺失与口腔鳞癌临床相关因素之间的关系 ,以及抑癌基因在口腔鳞癌发生发展中的作用。方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法 ,检测 40例口腔鳞癌及正常组织中 3p14 2 4等位基因的杂合性缺失。结果 40例口腔鳞癌组织中 3p2 4位点EAβMD有 2 4例为信息个体 ,12例出现杂合缺失 ,杂合缺失率为 5 0 %,EAβH有 15例出现杂合缺失 ,杂合缺失率为 6 2 5 %;3p2 1位点杂合缺失率为 0 0 7%;3p14位点杂合性缺失率为 0 13%。 3p2 4杂合缺失与口腔鳞癌临床分期关系明显 ,Ⅲ -Ⅳ期晚期鳞癌的杂合缺失率高于Ⅰ -Ⅱ期早期鳞癌 ,两组间有差异 (P <0 0 5 ) ;口腔鳞癌高分化组的杂合缺失率明显低于中低分化组 ,其差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;淋巴结转移阴性与阳性组的杂合缺失率有显著性意义 (P <0 0 1)。结论 3p2 4杂合缺失在口腔鳞癌中普遍存在 ,从而说明 3p2 4位点处存在着某些与口腔鳞癌发生发展有关的抑癌基因 。

染色体17p^(13.1)位点杂合缺失与乳腺癌生物学行为及预后的关系

目的 探讨染色体 17p13 .1位点杂合缺失 (LOH )与乳腺癌生物学行为及预后的关系。方法 应用PCR 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP)的方法 ,检测 60例原发性乳腺癌患者 17号染色体短臂 17p13 .1位点LOH。结果 经PCR扩增、酶切和电泳分离 ,在 17p13 .1位点共筛选出信息个体 3 8例 ,LOH发生频率为 42 .1% (16/3 8)。在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期乳癌中LOH阳性率分别为 5 6.0 %和 15 .4% ,有显著性差异 (P <0 .0 5 )。而该位点LOH与淋巴结转移及ER、PR水平无明显相关。分析 17p13 .1位点LOH与预后的关系发现 ,LOH阳性乳腺癌患者术后生存期明显较LOH阴性患者短 (P <0 .0 1)。结论 17p13 .1位点LOH多发生在乳腺癌病变早期 ,检测该位点LOH有可能成为判断乳腺癌预后的 1个新的分子生物学指标。