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杂种优势的一种可能的分子机理——杂合酶的协同效应 被引量:11
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作者 谭远德 《南京师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1998年第3期80-87,共8页
根据酶的结构与催化功能关系原理,提出了杂种优势的一种分子机理的假设,即杂合酶的协同效应,显性互补和异质等位基因互补是其中两个特例.应用杂合酶的正负协同效应能够很好地解释杂种优势的正负性和强弱性.杂合酶的特性与杂种优势... 根据酶的结构与催化功能关系原理,提出了杂种优势的一种分子机理的假设,即杂合酶的协同效应,显性互补和异质等位基因互补是其中两个特例.应用杂合酶的正负协同效应能够很好地解释杂种优势的正负性和强弱性.杂合酶的特性与杂种优势的许多性质是一致的.杂合酶的活性多态性得到了同工酶的验证,其中的杂合酶活性强度与杂种优势有很强的正相关.从多聚酶的亚基间相互作用所产生的构象变化的传递形成的催化反应的协同性,讨论了杂合酶产生协同效应的可能性,以及与杂种优势之间的关系.已有许多间接证据暗示基因→酶→协同效应→杂种优势这机制存在的可能性. 展开更多
关键词 种优势 杂合酶 协同效应 分子机理
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重组人SOD2/3杂合酶的制备及其生物活性初探 被引量:1
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作者 程安阳 范立强 +2 位作者 赵健 李小灵 王刚 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期715-721,共7页
为获得重组SOD2/3杂合酶,以及观察SOD2/3能否转导入宫颈癌细胞,抑制肿瘤细胞的增殖,构建了原核表达载体pET-SOD2/3,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达获得N端带有6个组氨酸标签的SOD2/3杂合酶;用Ni柱金属螯合亲和层析纯化重组SOD2/3;... 为获得重组SOD2/3杂合酶,以及观察SOD2/3能否转导入宫颈癌细胞,抑制肿瘤细胞的增殖,构建了原核表达载体pET-SOD2/3,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达获得N端带有6个组氨酸标签的SOD2/3杂合酶;用Ni柱金属螯合亲和层析纯化重组SOD2/3;利用肝素柱层析验证SOD2/3的肝素靶向性;将纯化后的融合蛋白加入体外培养的宫颈癌细胞,通过FITC和MTT实验观察杂合酶SOD2/3的转导能力及其在细胞内的活性。成功构建了SOD2/3杂合酶的表达载体,重组SOD2/3表达量占菌体总蛋白30%左右;金属螯合亲和层析一步纯化,回收率在70%以上,纯度达90%左右;重组酶能与肝素亲和层析结合,说明杂合酶SOD2/3有肝素靶向性;细胞实验证实SOD2/3较SOD2能更好地抑制Hela细胞生长。获得了较纯的重组SOD2/3杂合酶,该酶能直接以天然有活性的形式转导人宫颈癌细胞内并抑制其细胞增殖,具有很好的作为肿瘤治疗、抗氧化损伤药物的潜力。 展开更多
关键词 SOD2/3杂合酶 表达 纯化 抗肿瘤
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重组人SOD2/3杂合酶原核表达及纯化方法的研究 被引量:1
3
作者 周大海 范立强 +1 位作者 赵健 程安阳 《食品与药品》 CAS 2011年第11期385-388,共4页
目的摸索工程菌的表达条件并分离纯化,获得高活性的重组人SOD2/3杂合酶(rhSOD2/3)。方法利用含有质粒pET-28a-SOD2/3的工程菌诱导表达rhSOD2/3,考察诱导温度、诱导剂浓度、Mn2+浓度与加入时机对重组酶表达量与活性的影响;利用金属螯... 目的摸索工程菌的表达条件并分离纯化,获得高活性的重组人SOD2/3杂合酶(rhSOD2/3)。方法利用含有质粒pET-28a-SOD2/3的工程菌诱导表达rhSOD2/3,考察诱导温度、诱导剂浓度、Mn2+浓度与加入时机对重组酶表达量与活性的影响;利用金属螯合亲和层析纯化rhSOD2/3。结果重组酶的表达量占菌体总蛋白40%~50%,最佳表达温度15℃、诱导剂浓度0.5 mmol/L,Mn2+浓度2.5 mmol/L,表达时间16 h,亲和层析能较好的纯化rhSOD2/3,比活从粗酶液220 U/mgpr提高到930 U/mgpr以上。结论成功获得了rh SOD2/3最适的表达条件及纯化方法。 展开更多
关键词 SOD2/3杂合酶 表达 纯化 亲和层析
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重组超氧化物歧化酶1/3杂合酶在大肠杆菌中表达的优化
4
作者 宋筱龄 范立强 +3 位作者 容智凤 赵健 李素霞 袁勤生 《食品与药品》 CAS 2008年第6期8-11,共4页
目的获取活性高的重组SOD 1/3杂合酶。方法用含pET-SOD 1/3的工程菌诱导表达重组SOD 1/3杂合酶,通过分析SDS-PAGE及SOD酶活性,考察诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度、Cu 2+、Zn 2+浓度对重组酶表达量和活性的影响。结果正交试验表明,用1 ... 目的获取活性高的重组SOD 1/3杂合酶。方法用含pET-SOD 1/3的工程菌诱导表达重组SOD 1/3杂合酶,通过分析SDS-PAGE及SOD酶活性,考察诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度、Cu 2+、Zn 2+浓度对重组酶表达量和活性的影响。结果正交试验表明,用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在A600=1.2时诱导,Cu2+、Zn2+浓度分别为2.4 mmol/L,诱导温度15℃,诱导时间12 h,能获得高活性重组SOD 1/3,其比活性为1681U/mg。结论培养温度和Cu2+、Zn2+浓度是优化表达的最主要因素。降低诱导温度有利于重组酶的可溶性表达,添加Cu2+、Zn2+能促进重组酶活性提高。 展开更多
关键词 超氧化物歧化 杂合酶 表达 优化
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大数据时代杂合酶的设计及其新趋势 被引量:3
5
作者 张群 吴秀芸 +2 位作者 蒋绪恺 赵越 王禄山 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1033-1045,共13页
酶分子的高效性和稳定性是工业广泛应用的物质基础。利用分子生物学技术可以将不同酶分子通过串联、插入、翻译后融合等方式构建成符合工业需求的杂合酶,但应用中多结构域杂合酶在表达量与酶活等方面仍存在弊端,而基于特定蛋白质结构域... 酶分子的高效性和稳定性是工业广泛应用的物质基础。利用分子生物学技术可以将不同酶分子通过串联、插入、翻译后融合等方式构建成符合工业需求的杂合酶,但应用中多结构域杂合酶在表达量与酶活等方面仍存在弊端,而基于特定蛋白质结构域的多功能设计成为新趋势。高通量测序技术的发展,使得生物学家正面临着爆炸式增长的大数据集。近年来"蛋白质功能区"概念的提出,拓宽了人们对蛋白质结构与功能组织层次的认知,功能区残基聚簇的协同演化可导致同一家族不同蛋白质功能的差异。基于海量大数据分析可以快速定位特定功能区以及协同进化的关键位点,再利用合成生物学技术就可实现多种功能残基在同一蛋白质中的精准嫁接,完成天然酶分子的再设计。这将是杂合酶技术发展的新阶段,也会成为生物大数据时代下蛋白质设计的新趋势。 展开更多
关键词 杂合酶 功能区 生物大数据 成生物学技术 蛋白质工程
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P450酶特性研究与新型杂合酶的构建 被引量:1
6
作者 张玲玲 巴丽娜 +1 位作者 林章凛 朱玉山 《计算机与应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期103-107,共5页
细胞色素P450酶是一类在自然界中广泛存在的含有亚铁血红素的酶系,能够催化以小分子有机物单加氧反应为主的多种生物化学反应,在药物生产和人类健康等领域发挥着重要的作用。细胞色素P450酶催化过程的核心是辅基血红素HEME中铁离子与氧... 细胞色素P450酶是一类在自然界中广泛存在的含有亚铁血红素的酶系,能够催化以小分子有机物单加氧反应为主的多种生物化学反应,在药物生产和人类健康等领域发挥着重要的作用。细胞色素P450酶催化过程的核心是辅基血红素HEME中铁离子与氧气分子的反应,涉及2个电子转移的步骤。经由氧化还原辅酶的电子传递成为P450酶催化循环的前提,该酶也因和氧化还原辅酶耦合方式的不同而分为3类。作为1个电子自给自足的多域细胞色素P450,P450BM3能够将NAD(P)H产生的电子100%用于产物生成,其高效的催化性能为研究P450酶结构功能关系和电子传递机制提供了优良模板。仿照P450BM3构建P450杂合酶是近年来细胞色素P450酶研究领域的热点之一。本文总结了细胞色素P450酶的催化过程和分类,以及P450BM3酶的界面、连接肽、电子传递和活性位点的相关研究成果,并简要介绍了细胞色素P450杂合酶的人工构建。我们依据蛋白质系统优化的方法,将理性设计与实验验证相结合,从事构建和改善细胞色素P450sca-2杂合酶,以期通过酶法转变调血脂药物普伐他汀生产过程中转化效率低且成本高的现状,具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 细胞色素P450 P450BM3 P450杂合酶 电子传递 综述
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杂合酶的研究现状与发展前景
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作者 韩镇 解桂秋 高仁钧 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第4期578-581,共4页
近年来,随着人们对环境和能源问题的关注,以酶为催化剂的绿色生物催化技术越来越受到重视,而酶的催化能力是影响酶能否进行工业化应用的重要因素,同时,因催化不同反应的需要,新酶开发显得十分迫切。杂合酶技术是基于已有酶资源来进行新... 近年来,随着人们对环境和能源问题的关注,以酶为催化剂的绿色生物催化技术越来越受到重视,而酶的催化能力是影响酶能否进行工业化应用的重要因素,同时,因催化不同反应的需要,新酶开发显得十分迫切。杂合酶技术是基于已有酶资源来进行新酶的设计和开发的技术,其具有独特的优点,尤其是目前酶的表达克隆、分子筛选、人工进化、DNA序列改组和体外突变等技术已成为常规技术,为杂合酶的开发及生产奠定了基础。本文对杂合酶的构建策略、构建方法及发展前景作一综述,为其应用和开发提供参考。 展开更多
关键词 杂合酶 蛋白质工程 理性设计
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共有序列简并杂合寡核苷酸引物聚合酶链反应在呼吸道副黏病毒科病毒诊断中的应用 被引量:1
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作者 赵百慧 王春 +8 位作者 沈佳仁 俞雪莲 高烨 滕峥 朱兆奎 储维 宋黎黎 张泓 张曦 《微生物与感染》 2013年第2期89-95,共7页
采用共有序列简并杂合寡核苷酸引物聚合酶链反应(CODEHOP PCR)体系和商品化RV12试剂盒对急性呼吸道感染患儿下呼吸道标本中的副黏病毒科病毒进行检测,比较CODEHOP PCR与RV12试剂盒检测结果的符合率和敏感度,观察CODEHOP PCR在临床呼吸... 采用共有序列简并杂合寡核苷酸引物聚合酶链反应(CODEHOP PCR)体系和商品化RV12试剂盒对急性呼吸道感染患儿下呼吸道标本中的副黏病毒科病毒进行检测,比较CODEHOP PCR与RV12试剂盒检测结果的符合率和敏感度,观察CODEHOP PCR在临床呼吸道标本中对副黏病毒诊断的应用价值,进一步探讨具备检测已知呼吸道病毒和未知新病毒特点的CODEHOP PCR在呼吸道疾病谱和未知潜在呼吸道病毒诊断中的推广价值。采集2011年上海市儿童医院因急性呼吸道感染住院的患儿下呼吸道标本572份,分别采用2种方法对副黏病毒进行检测。CODEHOP PCR检测出阳性标本113例,阳性率为19.76%;RV12试剂盒检测出阳性标本102例,阳性率17.83%;2种方法检测符合率为85.39%。以10倍倍比稀释呼吸道合胞病毒A(RSVA)感染的细胞收获液,检测结果显示,CODEHOP PCR和RV12试剂盒检测下限分别为10-8和10-6。CODEHOP PCR具备简便、易操作和测序精度高等特点,适合疾病预防系统和临床检验科使用。该方法与一些新兴的高通量快速分子诊断技术结合,可提高检测灵敏度,具有高通量、快速检测和筛查未知新病毒的优势,在呼吸道病原体检测领域值得进一步优化和推广。 展开更多
关键词 共有序列简并寡核苷酸引物聚链反应 副黏病毒科 新呼吸道病毒
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青霉素G酰化酶的亚基重组 被引量:1
9
作者 张燕 杨晟 《齐鲁药事》 2008年第3期171-174,共4页
青霉素G酰化酶在半合成β-内酰胺类抗生素工业中催化关键反应。将来源于Esherichia coli的α亚基分别与Kluyvera citrophila,Providencia rettgeri,Alcaligenes faecalis的β亚基重组得到三种杂合酶,杂合酶表达量随野生型PGA同源性的减... 青霉素G酰化酶在半合成β-内酰胺类抗生素工业中催化关键反应。将来源于Esherichia coli的α亚基分别与Kluyvera citrophila,Providencia rettgeri,Alcaligenes faecalis的β亚基重组得到三种杂合酶,杂合酶表达量随野生型PGA同源性的减小而降低,E.coli和A.faecalis氨基酸序列的相同性低至41%,其杂合酶仍然具有水解3-苯乙酰胺-6-硝基苯甲酸的活力。 展开更多
关键词 青霉素G酰化 杂合酶
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香灰菌杂合B型血红素过氧化物酶(As.APx-CcP)基因的克隆及原核表达
10
作者 杨振华 莫翠园 +3 位作者 许丹云 胡敏涛 务俊月 马爱民 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第8期2437-2446,共10页
本研究基于JGI数据库中香灰菌的同源序列设计兼并引物扩增基因保守区,随后通过FPNI-PCR分别扩增保守区两侧侧翼序列,得到基因全长。该基因全长1 845 bp,由四个外显子和三个内含子组成,编码区1 596 bp,编码531个氨基酸,其中前21个为信号... 本研究基于JGI数据库中香灰菌的同源序列设计兼并引物扩增基因保守区,随后通过FPNI-PCR分别扩增保守区两侧侧翼序列,得到基因全长。该基因全长1 845 bp,由四个外显子和三个内含子组成,编码区1 596 bp,编码531个氨基酸,其中前21个为信号肽。通过RedOxiBase数据库比对,认为该基因属于I型过氧化物酶中的Ascorbate-cytochrome c peroxidase (APx-CcP)亚家族,与炭团菌EC38和CO27-5亲缘关系最近,序列一致率达到77%~82.5%。通过大肠杆菌表达系统,成功在体外表达了As.APx-CcP重组蛋白,优化了表达条件,表达出大小为63 kD的重组蛋白,对超声后上清蛋白和复性后蛋白测量了抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidase, APx)以及过氧化物酶(peroxidases, PODs)活性,均未显示出吸光度变化,即没有显示出APx和PODs活性。本研究成功克隆As.APx-CcP基因、初步探索了重组蛋白的酶学性质,从序列角度分析了蛋白失活的可能原因,为今后挖掘As.APx-CcP的功能,探究As.APx-CcP在银耳伴生过程中的作用以及未来银耳的良种改造奠定了基础。 展开更多
关键词 香灰菌 B型血红素过氧化物 同源克隆 生物信息学 原核表达
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甘油脱水酶的理性设计:基因杂合改善酶的性质 被引量:1
11
作者 齐向辉 罗兆飞 +4 位作者 吴杰群 孟晓蕾 唐悦 韦宇拓 黄日波 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第20期2373-2380,共8页
1,3-丙二醇是一种重要的化工原料,越来越受到广泛的关注.以弗氏柠檬酸菌和克雷伯氏菌的总DNA以及宏基因组为模板,克隆并表达了3个不同来源的甘油脱水酶基因,前两者均有活力,而后者则没有活力.为了改造甘油脱水酶使其更有利于工业化生产... 1,3-丙二醇是一种重要的化工原料,越来越受到广泛的关注.以弗氏柠檬酸菌和克雷伯氏菌的总DNA以及宏基因组为模板,克隆并表达了3个不同来源的甘油脱水酶基因,前两者均有活力,而后者则没有活力.为了改造甘油脱水酶使其更有利于工业化生产,通过同源建模(homology modeling)构建了这3个甘油脱水酶的三维结构,并利用一些生物信息学软件对这3个甘油脱水酶进行亚基之间的杂合改组(gene swapping)的理性设计,根据设计结果对这3种不同来源的甘油脱水酶的大、中小亚基基因分别进行了克隆.通过基因交换的方法对甘油脱水酶大、中小亚基进行了杂合,得到6种异源亚基杂合酶.部分杂合酶的酸碱稳定性、热稳定性及Vmax得到了明显的改善,同时杂合改组使本没有活力的来源于宏基因组的甘油脱水酶具有了活力而且杂合酶的热稳定性也得到了显著提高.根据构建的三维结构分析了结构差异对酶学性质的影响. 展开更多
关键词 甘油脱水 宏基因组 基因置换 理性设计 杂合酶
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杂合β-甘露聚糖酶AuMan5A^(loop)的H321对其酶学性质的影响
12
作者 李雪晴 袁风娇 +3 位作者 程建青 董运海 李剑芳 邬敏辰 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期48-53,共6页
目的:将loop置换杂合β-甘露聚糖酶AuMan5A^(loop)的H321突变回野生型酶AuMan5A对应的Gly,以分析杂合酶的酶学性质与H321的相关性。方法:采用大引物PCR技术将AuMan5A^(loop)基因(Auman5Aloop)编码H321的密码子CAC突变为Gly的GGT,构建突... 目的:将loop置换杂合β-甘露聚糖酶AuMan5A^(loop)的H321突变回野生型酶AuMan5A对应的Gly,以分析杂合酶的酶学性质与H321的相关性。方法:采用大引物PCR技术将AuMan5A^(loop)基因(Auman5Aloop)编码H321的密码子CAC突变为Gly的GGT,构建突变酶基因Auman5A^(loop/H321G);借助表达质粒pPICZαA将该突变酶基因在Pichia pastoris GS115中实施表达,并分析重组表达产物AuMan5A^(loop) H321G的酶学性质。结果:AuMan5A^(loop/H321G)置换前后的最适温度T_(opt)均为75℃,高于AuMan5A的65℃;AuMan5A^(loop/H321G)在70℃的半衰期t_(1/2)^(70)为300 min,介于AuMan5A(10 min)和AuMan5A^(loop)(480 min)之间;AuMan5A^(loop/H321G)比活性分别为AuMan5A和AuMan5A^(loop)的12.8和1.43倍;催化效率k_(cat)/K_m为后两者的14.1和1.12倍。结论:通过H321G置换及对3种酶的温度特性、比活性和催化效率的测定及比较,证实了H321对AuMan5A^(loop)的酶学性质有一定的影响。 展开更多
关键词 Β-甘露聚糖 杂合酶 定点突变 突变 学性质
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利用同源片段交换提高腈水合酶的热稳定性 被引量:1
13
作者 房月芹 崔文璟 +2 位作者 崔幼恬 陈艳 周哲敏 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期276-280,284,共6页
目的通过计算机辅助半理性设计对热不稳定的恶臭假单胞菌Psedomonas putida NRRL-18668腈水合酶(EC4.2.1.84,nitrile hydratase,简称NHase)分子进行改造,提高酶催化的热稳定性和活性。方法以嗜热假诺卡菌Pseudonocardia thermophila J... 目的通过计算机辅助半理性设计对热不稳定的恶臭假单胞菌Psedomonas putida NRRL-18668腈水合酶(EC4.2.1.84,nitrile hydratase,简称NHase)分子进行改造,提高酶催化的热稳定性和活性。方法以嗜热假诺卡菌Pseudonocardia thermophila JCM3095和睾丸酮丛毛单胞菌Comamonas testosterone 5-MGAM-4DNHase作为模板,利用位点靶向氨基酸重组(site-targeted amino acid recombination,STAR)软件和分子动力学模拟分析选择合适的同源靶片段,通过同源交换替换Pseudomonas putida NRRL-18668NHase相应的片段,构建7株分别含有3种不同来源片段的新型杂合NHase,检测其热稳定性及活性;圆二色光谱分析野生酶和杂合酶3AB的二级结构。结果 7株杂合NHase(1A、2B、2C、2BC、3AB、3AC、3ABC)经50℃热处理10 min后,与野生型NHase相比,热稳定性分别提高了1.5~3.5倍,其中杂合NHase 3AB的热稳定性提高了3.5倍,酶活力提高了1.4倍;野生酶和杂合酶3AB二级结构中α螺旋含量分别为(34.56±3.21)%和(36.88±1.41)%,,β折叠含量分别为(19.78±3.21)%和(18.69±1.74)%。结论通过利用热稳定性的同源片段来替换相应的热不稳定结构域这种理性设计的方法,成功将不耐热的NHase改造成耐热杂合NHase,同时提高了酶的比活力,并能维持NHase分子的基本二级结构不改变。 展开更多
关键词 腈水 稳定性 杂合酶 同源片段 分子改造
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Analysis of Protein and Isoenzyme of LiLum davidii var.unicolor,Lilium Asiatic Hybrids and Their Hybrid F_1 被引量:1
14
作者 李雪 杨彩玲 +2 位作者 张鸣 霍彩霞 朱彦荣 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第1期54-57,共4页
[Objective]The paper was to provide theoretical basis for selection of parental combination and early identification of hybrids.[Method]The soluble protein and peroxidase of LiLum davidii var.unicolor,Lilium Asiatic h... [Objective]The paper was to provide theoretical basis for selection of parental combination and early identification of hybrids.[Method]The soluble protein and peroxidase of LiLum davidii var.unicolor,Lilium Asiatic hybrids and their filial generations were analyzed using polyacrylamide gel electrophoresis technique.[Result]The protein spectrum of filial generation with L.davidii var.unicolor as parent not only appeared the homologous band as parent with darker coloring,but also had new bands compared with parent.Peroxidase zymogram of hybrid F1 mainly displayed incomplete complementary and hybrid type of parent.[Conclusion]Protein spectrum and peroxidase zymogram could be used as the biochemical markers for the identification of hybrids of lily,which could also detect the target traits of plant. 展开更多
关键词 LiLum davidii var.unicolor Lilium Asiatic hybrids Hybrid F1 PROTEIN PEROXIDASE
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DIFFERENTIATION OF PSEUDOCONDYLOMA OF VULVA AND CONDYLOMA ACUMINATA BY DOT BLOT HYBRIDIZATION AND POLYMERASE CHAIN REACTION 被引量:1
15
作者 刘跃华 王家璧 司静懿 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 1996年第1期53-55,共3页
This study differentiated pseudocondyloma of vulva from condyloma acuminata using dot blot hybridization and polymerase chain reaction (PCR). A total of 27 cases of pseudocondyloma of vulva and 65 cases of condyloma a... This study differentiated pseudocondyloma of vulva from condyloma acuminata using dot blot hybridization and polymerase chain reaction (PCR). A total of 27 cases of pseudocondyloma of vulva and 65 cases of condyloma acuminata were selected for the study. The genital lesions were examined clinically and were biopsied. Each biopsy was subjected to histological examination and HPV DNA analysis by dot blot hybridization and PCR. Dot blot analysis detected HPV DNA in 19(82. 6%) out of 23 cases of condyloma acuminata and 2(25% ) out of 8 cases pseudocondyloma of vulvae (P<0. 05). PCR detected HPV DNA in 51 (92. 7%) out of 55 cases of condyloma acuminata , compared with none in 23 cases of pseudocondyloma (P<0.001 ). HPV DNA was present in the majority of condyloma acuminata specimens. HPV 6 and 11 were the predominant types. Peudocondyloma is probably not associated with HPV. PCR was the most sensitive and useful technique for HPV DNA detection. 展开更多
关键词 pseudocondyloma condyloma acuminata polymerase chain reaction
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RAPID SCREENING OF AN ARRAYED cDNA LIBRARY BY IMPROVED PCR-BASED METHOD 被引量:5
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作者 杜光伟 潘美辉 +3 位作者 袁建刚 周彦 强伯勤 梁植权 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 1998年第2期63-66,共4页
The present study reports an improved PCR-based technique that allows quick and effective screening of cDNA libraries. First, the cDNA library was arrayed as follow: about 3 X 10’ cDNA clones were multiplied as indiv... The present study reports an improved PCR-based technique that allows quick and effective screening of cDNA libraries. First, the cDNA library was arrayed as follow: about 3 X 10’ cDNA clones were multiplied as individual plaques on solid medium in 24-well culture dishes at 1 200 plaque forming units per well. The phage suspension of each well was transferred to an individual microcentrifuge tube in 72-tube box. Then, box pool, row pools and column pools were set up that respectively represent a 72-tube box, rows and columns within the box. To screen a specific target cDNA,primers specific for novel ESTs ob- tained in our laboratory were employed to conduct PCR in a hierarchy mode. PCR began with the box pools, resulting in the identification of some Positive box pools. Then PCR went down to the row and col- umn pools of the positive box. The intersection of the positive row (s) and column (s) revealed the candi- date positive tubes. The specificity of PCR products were meanwhile checked by restriction enzyme diges- tion. Finally, hybridization was carried out to get single specific cDNA clomes from the positive tubes. This PCR-based technique features high specificity, high efficiency and less-cost in large-scale cDNA library screening. Our initial implementation of the technique resulted in the isolation of three longer different cD- NA clones from a human fetal brain cDNA library. Thus this improved technique can serve as an alterna-tive to the time-consuming and laborious conventional hybridization-based method for screening cDNA li-brary. 展开更多
关键词 arrayed cDNA library hierarchy PCR HYBRIDIZATION
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Identification of polymorphic allozyme markers for assessing genetic variability in Labeo dyocheilus (McClelland,1839)
17
作者 Peyush PUNIA Lalit NARAIN +4 位作者 Vindhya MOHINDRA Anshumala BHARDWAJ Rajeev Kumar SINGH Dhurendra KAPOOR Kuldeep Kumar LAL 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第1期167-170,共4页
The Labeo dyocheilus(family Cyprinidae)in-habits fresh water streams at the fo thill regions and is a commercially important food fish.It is native to Afganistan,Pakistan,India,Nepal,Bhutan,Bangladesh,M yanmnar,Cambod... The Labeo dyocheilus(family Cyprinidae)in-habits fresh water streams at the fo thill regions and is a commercially important food fish.It is native to Afganistan,Pakistan,India,Nepal,Bhutan,Bangladesh,M yanmnar,Cambodia and Thailand(Froese and Pauly,2003).In India,the species in-habits the Indus,Ganges and Mahanadi river sys-terns.It is identified as a potential cultivable species and has considerable significance for the fishery of these regions.L.dyocheilus has been categorized as a vulnerable fish due to declining commercial catches in India(Mahanta et a1.,1994).At present the fishery is supported through capture from natural sources.To achieve domestication,various aspects of captive breeding and propagation are being studied. 展开更多
关键词 Labeo dyocheilus Polymorphic allozyme Genetic variability
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Analysis of hepcidin expression: In situ hybridization and quantitative polymerase chain reaction from paraffin sections 被引量:1
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作者 Yuhki Sakuraoka Tokihiko Sawada +4 位作者 Takayuki Shiraki Kyunghwa Park Yuhichiro Sakurai Naohisa Tomosugi Keiichi Kubota 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2012年第28期3727-3731,共5页
AIM: To establish methods for quantitative polymerase chain reaction (PCR) for hepcidin using RNAs isolated from paraffin-embedded sections and in situ hybridization of hepatocellular carcinoma (HCC). METHODS: Total R... AIM: To establish methods for quantitative polymerase chain reaction (PCR) for hepcidin using RNAs isolated from paraffin-embedded sections and in situ hybridization of hepatocellular carcinoma (HCC). METHODS: Total RNA from paraffin-embedded sections was isolated from 68 paraffin-embedded samples of HCC. Samples came from 54 male and 14 female patients with a mean age of 66.8 ± 7.8 years. Quantitative PCR was performed. Immunohistochemistry and in situ hybridization for hepcidin were also performed. RESULTS: Quantitative PCR for hepcidin using RNAs isolated from paraffin-embedded sections of HCC was performed successfully. The expression level of hepcidin mRNA in cancer tissues was significantly higher than that in non-cancer tissues. A method of in situ hybridization for hepcidin was established successfully, and this demonstrated that hepcidin mRNA was expressed in non-cancerous tissue but absent in cancerous tissue. CONCLUSION: We have established novel methods for quantitative PCR for hepcidin using RNAs isolated from paraffin-embedded sections and in situ hybridization of HCC. 展开更多
关键词 HEPCIDIN EXPRESSION In situ hybridization IMMUNOHISTOCHEMISTRY Real-time polymerase chain reaction
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Identification of 11 STD Pathogens in Semen Using Polymerase Chain Reaction (PCR) and "Flow-through" Hybridization Technology
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作者 Rubina Ghani Kashif Nisar +1 位作者 Hasan Ali Saara Ahmad 《Journal of Life Sciences》 2016年第2期91-99,共9页
The transmission of sexually transmitted infection (STI) pathogens from an infected donor to the recipient of a semen donation in assisted conception may result not only in acute infection but also in long-term repr... The transmission of sexually transmitted infection (STI) pathogens from an infected donor to the recipient of a semen donation in assisted conception may result not only in acute infection but also in long-term reproductive complications or adverse outcomes of pregnancy including infection of the offspring. Semen samples were obtained by masturbation into sterile containers. Samples were subjected to semen analysis within one hour of collection and processed for freezing within two hours of collection. The sperm motility was determined. After DNA extraction the PCR was performed and amplicons are subsequently hybridized to pathogen-specific capturing probes via "Flow-through" hybridization. During our study we came across with the STI pathogens present in semen and main cause of infertility was note. It was also observed that route for the transfer for these STI pathogens were the men working in other cities and visited commercial sex workers and their complained for infertility. We have reported our data that after the normal sperm count in semen samples of men with infertility or subfertility they were infected with Chlamtdia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, and Mycoplasma hominis. In our study all the 11 pathogens were detected which cause serious reproductive complications and infection in their offspring. 展开更多
关键词 Sexually transmitted disease semen analysiss chlamydia trachomatis Neisseria gonorrhoeae Mycoplasma hominis Human Pappilloma virus.
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光驱动二氧化碳转化系统的构建、优化与应用 被引量:1
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作者 干雅梅 郭亮 +4 位作者 高聪 宋伟 吴静 刘立明 陈修来 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2390-2409,共20页
利用光能驱动二氧化碳(carbon dioxide,CO_(2))还原生产化学品对于缓解环境压力、解决能源危机具有重要意义。光捕获、光电转化和CO_(2)固定等作为影响光合作用效率的关键因素,同时也制约着CO_(2)的资源化利用效率。为了解决上述问题,... 利用光能驱动二氧化碳(carbon dioxide,CO_(2))还原生产化学品对于缓解环境压力、解决能源危机具有重要意义。光捕获、光电转化和CO_(2)固定等作为影响光合作用效率的关键因素,同时也制约着CO_(2)的资源化利用效率。为了解决上述问题,本文从生物化学与代谢工程相结合的角度,系统总结了光驱动杂合系统的构建、优化与应用,并从酶杂合系统、生物杂合系统以及杂合系统应用3个方面分析了光驱动CO_(2)还原合成化学品的最新研究进展。在酶杂合系统方面,采用的策略主要有提升酶催化活性、增强酶稳定性等;在生物杂合系统方面,采用的方法主要包括增强生物捕光能力、优化还原力供应以及改善能量再生等;在杂合系统应用方面,主要阐述了光驱动CO_(2)还原生产一碳含能化合物、生物燃料以及生物食品等。最后,从纳米材料(包括有机材料和无机材料)和生物催化剂(包括酶和微生物)两个方面,展望了人工光合系统的进一步发展方向。 展开更多
关键词 系统 生物系统 CO_(2)固定 能量再生 还原力再生
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