红树林来源内生真菌杂色曲霉Aspergillus versicolor MA-229次级代谢产物研究

从分离自红树林植物榄李新鲜叶片中的内生真菌杂色曲霉Aspergillus versicolor MA-229的发酵产物中分离得到新化合物1(22-epi-aflaquinolone B)和4个4-苯基-3,4-二氢喹啉酮类化合物(2~5)以及4个喹诺唑啉酮类化合物(6~9)。通过核磁共振和质谱等技术对化合物的结构进行了鉴定,并且通过X-射线单晶衍射实验确定了化合物1的绝对构型。这些化合物均表现出不同程度的卤虫致死活性和抗菌活性,其中新化合物1有明显的卤虫致死活性(LD50值为1.73μmol/L),与阳性对照活性相当。化合物1对农业病害菌小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminis)也具有一定的抑制活性(MIC值为32μg/mL),化合物6对农业病害菌小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)有较好的抑制活性(MIC值为16μg/mL)。

间接竞争酶联免疫分析用于薏苡仁中杂色曲霉毒素的快速检测研究

杂色曲霉毒素(Sterigmatocystin,ST)是一种主要由杂色曲霉和构巢曲霉等真菌产生的次级代谢产物,其结构与黄曲霉毒素相似,具有潜在的致癌性和毒性,严重危害人类生命健康。研究发现部分中药易ST污染,但目前针对中药中ST的快速检测研究相对较少。通过系统优化样品前处理条件及影响检测灵敏度的关键参数,建立了简便的间接竞争酶联免疫分析法(ic-ELISA),用于消费量较大的药食同源薏苡仁中ST的快速筛查。所建立ic-ELISA的半数抑制浓度(Half-Maximal Inhibitory Concentration,IC 50)为0.11 ng/mL,线性范围为6.25~100μg/kg,加标回收率在79.27%~99.95%之间,相对标准偏差(RSD)<12%。此外,该方法可抗基质干扰,只需利用溶剂标准曲线即可进行定量。用所建立的ic-ELISA对96批薏苡仁样品进行了检测,并用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对阳性样品进行了确证。该ic-ELISA快速、准确、经济,可作为薏苡仁中ST高通量快筛的技术手段,同时为其他中药中ST的快速检测提供参考。

杂色曲霉固态发酵晒青毛茶工艺优化研究

以晒青毛茶为原料,利用杂色曲霉进行固态发酵。通过单因素试验及响应面试验,以发酵茶叶感官评分及茶多酚含量为考察指标,对菌种添加量、外加水量、发酵时间、发酵温度4个因素进行黑茶发酵工艺条件优化研究。结果表明,当菌种添加量为14.5%、外加水量为25%、发酵温度为32℃、发酵时间为10 d,发酵得到的茶叶感官评分为(91.00±2.29)分,茶多酚含量为(17.84±0.28)%。此工艺条件下制得的黑茶外形匀整、汤色红浓明亮、香气纯正、滋味醇厚,且茶多酚含量高。

杂色曲霉β-葡萄糖苷酶分离纯化及酶学性质研究

试验旨在从杂色曲霉发酵液中分离纯化β-葡萄糖苷酶,并对其进行酶学性质研究。利用ENrich Q,10×100离子交换色谱法对杂色曲霉产β-葡萄糖苷酶分离纯化,采用SDS-PAGE测定其分子质量。结果表明:该β-葡萄糖苷酶的分子质量约为88.5 kDa,纯化倍数为53.44,回收率为70.78%,比酶活为1438.11 U/mg。该β-葡萄糖苷酶最适反应温度为50℃,最适反应pH为5.5;在温度20~50℃,pH 5.0~7.0时有较好的稳定性。Mn^(2+)对该酶具有明显的促进作用;Co^(2+)、Cu^(2+)、Cd^(2+)对该酶表现出抑制作用;而Na^(+)、Mg^(2+)、K^(+)、Ca^(2+)、Ba^(2+)对该酶无明显影响。该酶以水杨苷为底物时,米氏常数K_(m)为0.48 mg/mL,最大反应速率V_(m)为0.04 mg/(min·mL)。试验从杂色曲霉发酵液中成功分离出一种β-葡萄糖苷酶,为纤维素类饲料的应用提供了数据支撑。

纳米银胁迫下黄曲霉(Aspergillus flavus)TL-F3的氧化应激响应及其吸附能力

为研究纳米银(AgNPs)胁迫下黄曲霉(Aspergillus flavus TL-F3)的氧化应激变化及其对AgNPs的吸附能力,通过序批式试验,探究不同浓度AgNPs对A.flavus TL-F3生长、细胞形态、胞外聚合物(EPS)分泌、抗氧化系统和吸附能力的影响。研究发现,AgNPs可抑制A.flavus TL-F3生长,且抑制效果与浓度正相关。AgNPs可致A.flavus TL-F3菌丝发育不完全,表面破损。与不加AgNPs的对照组相比,当AgNPs的质量浓度为80 mg·L^(-1)时,胞外聚合物含量升至237.55 mg·g^(-1),丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性、还原性谷胱甘肽含量均显著(P<0.05)提高,而Na^(+)K^(+)-ATP酶活性显著(P<0.05)降低了50.37%。A.flavus TL-F3对AgNPs有一定的吸附能力,当AgNPs的质量浓度为1、30、50、80 mg·L^(-1)时,A.flavus TL-F3对AgNPs的吸附率可达68.54%以上。综上所述,A.flavus TL-F3可用于含Ag和AgNPs污染水体的修复。

酱香白酒酿造环境曲霉的分离及Aspergillus hennebergii酶分泌胁迫条件

以茅台镇酱香白酒酿造过程关键环节样品为载体,对曲霉的生态结构分布进行分析;以新鲜麸皮为培养基模拟固态发酵方法对影响筛选优势菌株Aspergillums henneberguii的生长及分泌糖化酶、蛋白酶的主要发酵胁迫条件进行了分析。结果分离得到曲霉103株,分别鉴定为10个种属种,即A.niger、A.oryzae、A.terreus、A.tubingensis、A.flavus、A.henneberguii、A.fumigatus、A.niveus、A.candidus和Monascus;发酵基质初始水分在50%和初始p H在3.5~4.0条件下有利于Aspergillums henneberguii的生长和酶的分泌;Aspergillums henneberguii的适宜生长温度范围为30~35℃,酶分泌温度为32~35℃;高乙醇体积质量（〉8%）对Aspergillums henneberguii的生长和产酶存在抑制,低乙醇体积质量（2%）反而有利于其生长和酶的分泌;（NH4）2SO4有利于Aspergillums henneberguii糖化酶的分泌,Na NO2和酵母浸膏有利于其生长和蛋白酶的分泌;乳糖和麦芽糖对Aspergillums henneberguii的生长和产酶有利,山梨糖、蔗糖、果糖可促进菌株糖化酶的分泌;单独添加硫酸钠有利于Aspergillums henneberguii的生长和酶的分泌;新鲜麸皮富含碳源、氮源、无机盐、微量元素等,为Aspergillums henneberguii菌体生产及制酶的优质天然载体。Aspergillums henneberguii的应用可满足传统固态白酒酿造过程的双边发酵和风味形成机制需求。

不同生境来源杂色曲霉次级代谢产物研究进展

杂色曲霉是曲霉属的常见种类,广泛分布于海洋、高等植物、红树林和节肢动物等生境中,近年研究表明杂色曲霉可产生生物碱、萜类、聚酮等结构多样的次级代谢产物,具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等活性。本文总结了2017—2022年间报道的37株杂色曲霉次级代谢产物结构及其生物活性的研究进展,涉及325个次级代谢产物,其中新化合物111个。本文揭示了杂色曲霉的次级代谢产物与生境的相关性,对从更多生境来源的杂色曲霉及其它微生物资源来挖掘新天然产物具有参考作用。

杂色曲霉菌的分离鉴定及鹅源乳杆菌对其抑制作用研究

研究旨在分离出杂色曲霉,并探究乳杆菌对杂色曲霉的抑制作用。采用体外牛津杯法,设3个处理组,分别是发酵乳杆菌组、罗伊氏乳杆菌组、混合乳杆菌组,将杂色曲霉孢子悬浊液浓度调整为1×10^(5)CFU/mL,将发酵乳杆菌和罗伊氏乳杆菌复苏后菌液浓度调整为1×10^(8)CFU/mL,将发酵乳杆菌和罗伊氏乳杆菌按照1:1比例制备成混合乳杆菌菌液,测定抑菌圈直径,比较3个组对杂色曲霉的抑制作用;采用纸片琼脂扩散法,测定杂色曲霉对20种常见药物的耐药性。结果表明:(1)与发酵乳杆菌组相比,罗伊氏乳杆菌和混合乳杆菌对杂色曲霉抑菌效果较好;(2)分离的杂色曲霉菌株对头孢曲松、米诺环素、卡那霉素、庆大霉素、头孢拉定和氨苄西林耐药,对其他14种药物敏感。本试验可以为益生菌抑制畜禽饲料霉菌提供新资料,为治疗禽畜曲霉病提供数据参考。

39株指/趾甲分离黄曲霉复合体(Aspergillus section Flavi)菌种鉴定和抗真菌药物敏感性

目的对来自伊朗马什哈德地区(Mashhad,Iran)甲真菌病患者指/趾甲分离的39株黄曲霉复合体(Aspergillus section Flavi)菌株进行菌种鉴定及抗真菌药物敏感性研究。方法菌种鉴定采用β-tubulin/calmodulin基因测序的分子鉴定联合MALDI-TOF质谱鉴定;体外药物敏感性试验参照CLSI M38-A3方案检测包括特比萘芬、新三唑类药物、棘白菌素类等10种抗真菌药物。结果基于形态学鉴定的39株黄曲霉复合体(Aspergillus section Flavi)菌株中,分子鉴定结果表明38株为Aspergillus flavus(A.flavus)/Aspergillus oryzae(A.oryzae),1株为Aspergillus minisclerotigenes(A.minisclerotigenes)。对38株分子鉴定为A.flavus/A.oryzae菌株采用MALDI-TOF质谱鉴定结果为A.flavus,而MALDI-TOF质谱错误鉴定同形菌种A.minisclerotigenes为A.flavus。抗真菌药物敏感性结果表明,特比萘芬、泊沙康唑和棘白菌素类药物对黄曲霉复合体(Aspergillus section Flavi)菌种均具有抗真菌活性。结论分子鉴定联合MALDI-TOF质谱鉴定可准确鉴定黄曲霉复合体菌株到菌种水平,特别是分子鉴定不能区分A.flavus/A.oryzae,而MALDI-TOF鉴定可将二者区分。完善参考菌种数据库是MALDI-TOF质谱准确鉴定的关键。特比萘芬、泊沙康唑和棘白菌素类药物可作为治疗黄曲霉复合体(Aspergillus section Flavi)菌种所致甲真菌病的潜在有效药物。

一株杂色曲霉的分离筛选鉴定及其果胶酶的性质表征

从土壤中分离、筛选得到一株产果胶酶的丝状真菌XYYWZSP1,通过分子生物学方法将其鉴定为杂色曲霉。通过测定,发现其液态培养产的果胶酶的酶学性质如下:最适作用pH值为4.5和温度为50℃,在35℃比较稳定。在实验室规模香蕉果汁的制造中,该菌的果胶酶能够将香蕉果汁的产率提高30.23%±1.89%,还原糖产量提高15.85%±0.36%,表现出一定的应用潜力。

曲菌Aspergillus oryzae黄曲霉毒素合成基因同源体分析——曲菌不产生黄曲霉毒素的理由

酿造用曲菌在分类学上属于Aspergillus属Flavi节，部分与可产生黄曲霉毒素（AF）的A．flavus和A．parasiticus是近缘菌。自1960年英国的火鸡因食用了含AF的饲料死亡，发现并认定黄曲霉毒素是一种极强的致癌物质后，有报告说酿造用曲菌因属于与A．flavus近缘的菌，其部分菌也会产生AF，这在当时对酿造界是一种极大的冲击。

多壁碳纳米管固定化生物酶修饰电极检测杂色曲霉素的初步研究

杂色曲霉素 (ST)是一种致癌致畸的真菌毒素 ,已报道的检测ST的技术有TLC、HPLC、ELISA以及毒素基因的PCR检测技术。初步探索了酶生物传感器三电极系统对ST的电化学分析。在实验中 ,应用多壁碳纳米管作为分子识别元件ADTZ的固定化基质和传感器的电子传递体构建了Au工作电极 ,对ST进行CV和DPV分析 ,结果表明 :ST在 - 6 0 0mV位置有一明显的特征还原峰电位 ,线性检测范围是 8 32× 1 0 - 5～ 6 6 5 6× 1 0 - 5mg mL ,检测下限为8 32× 1 0 - 5mg mL ,响应时间 1 0s。

杂色曲霉素致人胚肺细胞p53及Ki-ras基因突变研究

为探讨中国恶性肿瘤高发区粮食中优势污染霉菌毒素—杂色曲霉素 (Sterigmatocystin,ST)的致癌作用 ,运用银染 PCR- SSCP方法分析了不同浓度的 ST(1μg/ ml和 3μg/ m l)对体外培养的人胚肺细胞恶性转化过程中抑癌基因 p5 3第 5、6、7、8外显子及癌基因 Ki- ras的突变情况。结果显示 ST处理后第 2 2周 ,人胚肺成纤维细胞 p5 3基因的第 8外显子和 Ki- ras癌基因均出现异常泳动带型 ,表明 ST诱发了抑癌基因 p5 3及癌基因 Ki- ras突变 ,进一步证实了 ST对人肺组织的致癌作用。

杂色曲霉素对体外培养人胚肺成纤维细胞rasp21和超微结构的影响

以人胚肺组织体外培养、流式免疫技术和电镜相结合的方法，对河北省肿瘤高发区粮食中污染的常见霉菌毒素－杂色曲霉素作用后人胚肺成纤维细胞癌基因ｒａｓｐ２１蛋白产物的表达及相应超微结构变化进行了研究。结果表明：在杂色曲霉素作用下人胚肺成纤维细胞癌基因ｒａｓｐ２１的蛋白表达明显增强。电镜观察可见杂色曲霉素处理细胞出现细胞核明显增大、异型、核膜内褶、核仁明显等一系列具有恶性肿瘤细胞特征的超微结构变化。

胃癌、肝癌高发区和低发区粮食中杂色曲霉素污染量调查

采用间接竞争酶联免疫吸附试验（ＩＣ－ＥＬＩＳＡ）测定了２０８份粮食样品的杂色曲霉素（ＳＴ）污染量，发现其中７９份含ＳＴ少于４μｇ／ｋｇ，１１１份含４～３９μｇ／ｋｇ；ＳＴ污染量高于４０μｇ／ｋｇ的有１８份，最高含３４μｇ／ｋｇ。采自胃癌、肝癌高发区的１０７份样品，有４４．９％含２０μｇ／ｋｇ以上的ＳＴ，而低发区的６１份样品只有１４．８％含ＳＴ在２０μｇ／ｋｇ以上。二者，有极显著的差异（Ｐ＜０．０１）；高发区样品的ＳＴ污染量加权平均值为（１９．６±２１．６）μｇ／ｋｇ，低发区的为（１２．２±１１．８）μｇ／ｋｇ，二者也有极显著的差异（Ｐ＜０．０１）。在同一类地区，原粮的ＳＴ污染量显著高于成品粮的；不同粮食品种之间的ＳＴ污染量有差异，按ＳＴ污染量由大到小排列为：杂粮及饲料＞小麦＞稻谷＞玉米＞面粉＞大米。就单一品种比较，来自胃癌、肝癌高发区和低发区的小麦、玉米、大米三种粮食的ＳＴ污染量之间都有显著差异（Ｐ＜０．０５），而稻谷、面粉的ＳＴ污染量差异不显著（Ｐ＞０．０５）。对其中的１６份样品按现行国家标准检测方法──薄层层析法测定ＳＴ含量，发现１５份样品的测定结果与ＩＣ－ＥＬＩＳＡ法的测定值相一致。二种测定方法的符合?

胃癌高发区胃病患者胃液内杂色曲霉提取液的遗传毒性研究

我国有学者曾对国内六个胃癌高发区进行了病因流行病学调查,发现这些地区的慢性胃病患者胃液中杂色曲霉的检出率最高。河北省赞皇县是胃癌高发区,胃癌年平均死亡率为59/10万。我们用小鼠微核试验和人外周血淋巴细胞程序外DNA合成(UDS)试验的方法。

杂色曲霉素的分离、纯化及鉴定

将两株杂色曲霉菌分别接种于4kg玉米豆粉固体产毒培养基,28℃静置培养35d。以甲醇-4％ KC1(9:1)混合液及甲醇-三氯甲烷混合液浸提杂色曲霉素(sterigmatocy stin,简称ST),再用三氯甲烷萃取,经硅胶柱层析法初步纯化。在甲醇、乙腈、乙醚、丙酮等溶剂中多次重结晶,最后得到2271.6mg淡黄色针状结晶。经过熔点测定、元素分析、四种光谱学鉴定、薄层层析及高效液相色谱鉴定,确认该晶体为ST。纯度在99.9％以上。

高效液相色谱法测定小麦中的杂色曲霉毒素

目的:建立小麦中杂色曲霉毒素的高效液相色谱检测方法。方法:样品中的杂色曲霉毒素经正己烷提取后,经硅胶柱固相萃取去除脂肪等杂质,运用高效液相色谱法测定,色谱柱为Nova-Pak C18柱,以甲醇-水(70:30,V/V)为流动相,流速0.7mL/min,检测波长为246nm进行检测。结果:该方法在0.08～4.00μg/mL范围内线性良好(R2=0.9996),平均回收率为86.59%,相对标准偏差(RSD)为4.7%,最低检出量为0.017μg/kg。结论:本方法简便、快速、准确,可用于小麦中杂色曲霉毒素的测定。

杂色曲霉素对人胚胃粘膜细胞p53基因致突变研究

为探讨杂色曲霉素（ＳＴ）的致癌作用，运用细胞培养、流式细胞术（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）和银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ等方法研究了不同浓度的ＳＴ（１ｍｇ／Ｌ和３ｍｇ／Ｌ）诱发体外培养的人胚胃粘膜细胞恶性转化情况以及此过程中抑癌基因ｐ５３在蛋白及基因水平上的变化。结果表明，ＳＴ处理４周后处理细胞增殖旺盛，并出现恶性转化灶；ＳＴ处理２４周后处理细胞可在软琼脂上形成细胞集落（ＳＴ１ｍｇ／Ｌ和３ｍｇ／Ｌ组每皿细胞集落数平均分别为１５和１７个）；ＦＣＭ检测结果表明，ＳＴ处理的细胞细胞增殖指数增高，ＤＮＡ含量增高，出现ＤＮＡ异倍体，突变型抑癌基因ｐ５３蛋白表达明显增强。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析结果显示，ＳＴ处理２２周后，处理细胞ｐ５３第８外显子出现异常泳动带型。

杂色曲霉素对体外培养人胚支气管粘膜上皮的致癌作用初步研究

采用体外培养、动物接种方法研究了杂色曲霉素对体外培养的人胚支气管粘膜上皮致癌作用。结果发现，体外培养的人胚肺支气管组织块在杂色曲霉素处理后，γ射线照射的新生ＳＤ仔鼠皮下接种可见支气管粘膜及肺泡上皮增生。