蛹虫草多糖除杂蛋白的方法

介绍了蛹虫草多糖提取过程中的除蛋白杂质的方法。在提取的蛹虫草胞内、外粗多糖中 ,含有大量的杂蛋白等杂质 ,如何对杂蛋白定量和去除是纯化蛹虫草胞外多糖的关键问题。制备粗多糖后 ,通过正交试验对粗多糖除蛋白诸多因素的影响进行考察 ,得到样品 /氯仿 正丁醇的配比为1∶2 .4 ,氯仿 正丁醇的体积比为 1∶0 .2 ,萃取时间 5min为最佳 ,得到的多糖得率为 5 0 % ,除蛋白率为

清开灵注射液中杂蛋白的检测方法研究

目的:建立清开灵注射液中大分子杂蛋白的检测方法。方法:以三氯乙酸沉淀结合双缩脲法初步测定清开灵注射液中杂蛋白的浓度,再用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测杂蛋白的分子量。结果:清开灵注射液成品中杂蛋白的分子量在3～7 KD之间。结论:本方法可用于检测清开灵注射液中的大分子杂蛋白。

注射用替加环素中辅料乳糖杂蛋白研究

目的运用牛奶过敏源试剂盒法测定乳糖的杂蛋白含量。方法采用牛奶过敏源试剂盒规定的检测方法,分别对比日本WAKO和德国拜发公司生产的牛奶过敏源试剂盒。结果两种试剂盒均可检测出杂蛋白,日本试剂盒比德国试剂盒灵敏度高。结论所建立方法准确、简便、检测成本低,可用于乳糖杂蛋白含量的测定。

金葡菌素提取精制杂蛋白及效价测定对比实验分析

目的:金葡菌的提纯的效价对比。方法:采用盐稀法调pH值到等电点分离杂蛋白,以效价为检验指标,用两步试验法考察提取因素对其含量的影响,从中优选出最佳提取分离工艺。结果:金葡菌在解毒前增加一步提纯,解毒后提纯接种家兔制免疫血清测定毒素效价,测定5批后效价达稳定指标。结论:两步提纯减少了毒素中杂蛋白的含量,对产品效价无影响。

垂体后叶注射液中主成分和杂蛋白谱的生物质谱研究

目的:垂体后叶注射液是国家基本药物,其主成分为缩宫素和升压素。本品工艺简单,成分复杂而风险较大,对其主成分和杂蛋白谱进行分析,可为生产工艺监督提供新视角。方法:4个企业共77份样品用MALDI-TOF/TOF质谱进行主成分鉴定,还采用HPLC-Q-TOF质谱对垂体后叶国家标准品和4个企业杂蛋白进行了鉴定、相对含量与差异分析。结果:77份样品均检出缩宫素与猪源升压素,均未检出牛源升压素。标准品和样品中共鉴定到274个杂蛋白。企业2杂蛋白相对含量及种类存在显著变化。结论:MALDI-TOF/TOF测定可有效地用于本品的种属快速筛查。利用HPLC-Q-TOF获得4个企业的杂蛋白谱与相对含量结果,其中,杂蛋白相对含量的变化为药品的质量监督提供了新的分析视角。

胶原蛋白的鉴别及其杂蛋白检测技术

目的:建立用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)来鉴别胶原蛋白及分析杂蛋白含量的方法。方法:利用特异性的胶原酶对胶原蛋白进行酶解,而后检测样品中没有被胶原酶消解的杂蛋白的含量,同时检测实验方法的染色灵敏度,确定杂蛋白的检测下限。结果:经过多次验证实验表明,在本实验条件下,考马斯亮蓝对BSA的染色极限能达到100 ng,含量在0.5%以上的杂蛋白均能被测定。结论:本研究建立了有效的杂蛋白检测技术,为胶原蛋白为基础的生物材料中杂蛋白的检测和监控提供了有效可行的方法。

人血白蛋白中杂蛋白的生物质谱分析

目的建立基于电喷雾质谱(ESI-Q-TOF MS)技术检测人血白蛋白中杂蛋白的方法,考察国内上市的27家企业的28批白蛋白产品中的未知蛋白组分。方法按2015年版《中国药典》四部通则3121方法,采用凝胶过滤色谱柱(Hiprep16/60Sepharyl S-200HR),对人血白蛋白中的各组分进行分离,并收集其中的二聚体、多聚体组分;经除盐、浓缩和胰蛋白酶酶解后,采用BEH C18(2.1 mm×100 mm,130 )色谱柱,以水(含0.1%甲酸)-乙腈流动相梯度洗脱,采用色谱-质谱(MS)技术对多肽进行二级质谱序列测定,并利用搜库软件(PLGS3.0)分析鉴定人血白蛋白中的杂蛋白。结果利用所建立的方法对27家企业的制品进行测定,共检测出23种杂蛋白,其中载脂蛋白A-Ⅱ(apolipoprotein A-Ⅱ)、人结合珠蛋白(haptoglobin)、人血色素结合蛋白(hempoexin)、α-1B-糖蛋白(alpha-1B-glycoprotein)与α-2-HS-糖蛋白(alpha-2HS-glycoprotein)等5种蛋白为所有企业产品共有的杂蛋白;α白蛋白(VE结合蛋白)、N-乙酰-L-丙氨酸酰胺酶、触珠蛋白相关蛋白,血红蛋白(β亚基,α亚基)、转甲状腺素蛋白等蛋白大部分企业产品均存在。各企业杂蛋白数量分布在8~17种之间,27家企业产品杂蛋白种类数量差异较大。结论本方法可用于人血白蛋白中未知组分的研究,为人血白蛋白的生产工艺优化提供了指导。

人干扰素/β肿瘤坏死因子重组杂合蛋白的免疫调节功能

报道了人干扰素／β肿瘤坏死因子（ｒｈＩＦＮ－／ｒｈＴＮＦ－β）杂合蛋白对正常动物免疫反应的影响，结果如下：经ＬＰＳ激活的豚鼠腹腔巨噬细胞，当与适宜剂量的杂合蛋白温育后，其无细胞上清液中的Ｈ２Ｏ２浓度高于对照组。ＤＮＣＢ致敏的大鼠在半抗原攻击前，如在一侧耳翼内注入适宜剂量的ｒｈＩＦＮ－／ｒｈＴＮＦ－β，则由ＤＮＣＢ诱导的迟发超敏（ＤＴＨ）反应大于在另一侧耳翼内注入ＰＢＳ作为对照的反应强度。在抗体形成细胞（ＡＦＣ）反应检测系统中，经异种红细胞致敏的小鼠免疫脾细胞用杂合蛋白做短暂处理后，其ＡＦＣ反应比对照组有所增强。

探索增溶辅料对中药注射剂杂蛋白测定方法的影响

对中药注射剂不良反应的统计与分析表明，其中可能存在的杂质蛋白是影响其安全性的关键因素。因此建立杂质蛋白灵敏、准确的检测方法成为中药质量控制急需解决的难题之一。聚山梨酯-80等表面活性剂作为增溶辅料在中药注射剂中广泛应用，其使用干扰现有方法的准确和灵敏，引起假阳性或造成漏检。

β-β交联的Fe(Ⅱ)-Co(Ⅱ)杂化血红蛋白玻尔(Bohr)效应的研究

本文使用500MHz ~1H NMR谱仪研究了β—β交联的β_1 82Lys—β_2 82Lys不对称Fe(Ⅱ)Co(Ⅱ)杂化血红蛋白在去氧状态下其四级结构与溶液 pH的相互关系.实验结果证明,溶液中H^+浓度的减少,有利于血红蛋白从束缚态(T态)向松弛态(R态)方向转化.在可交换质子区(9.0—15.0PPm)由pH的改变所引起的[2(Co)β(Fe)]_A[α(Co)β(Co)]_cXL的~1H NMR谱峰的变化比[α(Fe)β(Co)]_A[α(Co)β(Co)]_cXL的~1H NMR谱峰的变化大.这为研究血红蛋白四个亚基的构象随pH改变而变化的先后次序提供了一定的依据,可以认为,当溶液中H^+浓度减少时,首先使蛋白构象发生改变的应在α—亚基上,而不在β—亚基上.此外,从它们的~1H NMR谱图随pH的变化可推测,溶液中除了 T态和R态之外,还存在着一些中间过渡态.

“活性”/可控自由基聚合在蛋白质杂化体制备中的应用研究进展

"活性"/可控自由基聚合(LPR)诞生于20世纪60年代,其当前主要包含引发链转移终止剂法(Iniferter)、氮-氧稳定的自由基聚合(NMP)、原子转移自由基聚合(ATRP)、可逆加成-断裂链转移聚合(RAFT),特别是近年来将"活性"/可控自由基聚合(LPR)所得聚合物以共价键耦合到蛋白质杂化体中的应用特别多。根据一些国内外的最新研究,概述了这4种LPR体系在蛋白质上应用的基本原理和发展历程,及在蛋白质杂化制备中的应用研究进展。

人γ干扰素/β肿瘤坏死因子重组杂合蛋白对γ干扰素抗性细胞株的杀伤效应

已有大量研究资料表明,γ干扰素(Interferon γ,IFNγ)、淋巴毒素(Lymphotoxin,LT,又称TNFβ)或肿瘤坏死因子(TNFα),均有杀伤肿瘤细胞的细胞毒效应,并对其作用机理进行了广泛的研究。与此同时还对晚期肿瘤患者进行了临床治疗的探索,也取得了可喜的进展。但有些肿瘤细胞对这两种淋巴因子有天然的或逐渐获得的抗性现象,而且这两者在临床用有效抗癌剂量时,又可出现不同程度的副作用。为此有人用IFN和TNF联合处理肿瘤细胞,发现它们具有协同抗癌效应,这就为低剂量治疗肿瘤以减轻副作用提供了理论依据。据此。

蟾毒配基脂质-蛋白杂化纳米粒的制备及评价

目的采用搅拌超声法制备蟾毒配基脂质-蛋白杂化纳米粒,延缓药物的体外释放。方法以单因素考察法优化处方及制备工艺,并应用透射电镜观察制剂形态,动态光散射法测定粒径和ζ-电位,差示扫描量热法和X-射线衍射法表征药物在制剂中的存在形式,透析法考察纳米粒及溶液剂中药物的释放行为。结果纳米粒外观圆整均匀,平均粒径为(82.4±28.5)nm,ζ-电位为-19.44 m V,药物在制剂中以无定形态存在,与溶液剂相比,纳米粒可显著延缓药物释放,其释放行为符合Weibull模型,释放机制以扩散为主。结论利用搅拌超声法,以白蛋白和卵磷脂作为载体和稳定剂制备的脂质-蛋白杂化纳米粒可显著延缓蟾毒配基的体外释放。

应用合成氨基酸改善生长猪对低蛋白杂粕型饲粮利用效果的研究

将 8 0头生长猪 ( 2 9.4 9± 1 .8kg)按照来源不同、体重相近、公母各半的原则随机分进不同的圈 ,每处理 4圈 ,每圈 4头。试猪均为自由采食、自由饮水 ,试期 6周。应用人工合成赖氨酸 (Lys)、蛋氨酸 (Met)、苏氨酸 (Thr)和色氨酸 (Trp)来平衡日粮氨基酸之间的相对比例。试验日粮共分 5种即 1 6CP % (对照 ) ,1 4CP +Lys(处理 1 ) ,1 4 %CP +Lys+Met(处理 2 ) ,1 4 %CP +Lys+Met+Thr(处理 3)和 1 4 %CP +Lys +Met+Thr+Trp(处理 4 )。准确测定试猪体重和饲料消耗以计算日增重、采食量和饲料转化率。在 3周末每圈取 2头进行前腔静脉采血以测定血清尿素氮含量。结果表明 :各处理间采食量无明显差异。在低蛋白日粮中随着Lys、Met、Thr和Trp的依次添加猪的日增重和饲料转化率线性改进 (P <0 .0 1 ) ,血清尿素氮含量线性下降 (P <0 .0 1 )。其中处理 3和处理 4两组猪的日增重分别比对照提高 63.75和 1 1 3.75g。

牛乳铁蛋白稳定性研究

目的 :研究牛乳铁蛋白原料的稳定性。方法 :以反相高效液相色谱法测定牛乳铁蛋白及其杂蛋白的含量 ,分别用强光照射法、加速试验法和室温留样观察法对牛乳铁蛋白原料进行稳定性试验。结果 :牛乳铁蛋白检测浓度线性范围为25～1000μg/ml,RSD=0 .05 % ;其在强光照射、加速试验和室温留样观察试验中 ,各项指标均符合质量标准。结论 :牛乳铁蛋白在室温、密闭的贮存条件下性质稳定。

七子花叶片蛋白组分含量动态分析

对七子花叶片中5种蛋白组分含量的动态变化进行了研究。结果表明:七子花叶片的总蛋白含量变化曲线呈"W"型,叶片生长初期含量基本保持稳定,5月中旬含量开始下降,并且下降幅度较大,6月中旬达一低值后,其含量迅速上升,到7月中旬(盛花期)达一峰值,接着其含量下降,到8月中旬达到最低,后又上升直至落叶时达到最高值。水溶蛋白含量季节性变化呈"低-高-低-高",在叶生长初期上升,峰值出现在5月中旬,以后逐渐下降,到7月中旬达最低值,之后缓慢上升,落叶前达到最高值。盐溶蛋白在叶生长初期迅速下降,到5月中旬达最低值,后一直呈上升趋势。醇溶蛋白与碱溶蛋白在叶生长初期有所下降,至6月中旬达到最小值,以后迅速上升,至7月中旬达到高峰后大幅度下降,在落叶前又有所回升。杂蛋白在叶生长初期迅速下降,至5月中旬达到最低值后,基本趋于稳定。推测水溶蛋白、盐溶蛋白和醇溶蛋白、碱溶蛋白与七子花的展叶和开花生理过程有密切关系。

静脉注射人免疫球蛋白具体成分调查研究

目的IVIG的主要成分是IgG(≥95%),IgG含量高低是衡量IVIG质量优劣的一项重要指标。此外,IVIG中还含有少量的其他免疫球蛋白,这些免疫球蛋白对IVIG临床治疗效果具有重要影响。目前尚无厂家或研究机构对国内血液制品企业生产的IVIG有效蛋白成分进行检测。本项目调查、比较、分析国内不同血液制品厂所生产的IVIG中免疫球蛋白成分含量,以期为血液制品厂选择原料血浆、改进生产工艺以及为医院临床使用剂量提供参考依据。方法采用ELISA法测定不同厂家不同批次的IVIG制品中IgG、IgA、IgD、IgE、IgM等免疫球蛋白的含量以及IgG亚型含量。

高效毛细管电泳法测定牛乳铁蛋白的含量

目的:采用高效毛细管电泳法(HPCE)的毛细管区带电泳模式(CZE)分离测定牛乳铁蛋白(BLF)的含量.方法:熔融石英毛细管柱67 cm(有效长度55 cm)×50μm;运行缓冲液为33 mmol·L-1磷酸二氢钾-10 mmol·L-1磷酸溶液(pH 2.5);压力进样6.9 kPa × 5 s;运行电压25 kV;检测波长214 nm;毛细管柱温为25℃.结果:乳铁蛋白进样浓度在100.0～600.0 mg·L-1范围内线性关系良好(r=0.999 5),最低检测限为25 mg·L-1.结论:采用HPCE测定乳铁蛋白及杂蛋白的方法简便,结果可靠.

离子交换层析分离纯化人α1-抗胰蛋白酶

目的建立一种新的用离子交换层析从Cohn组分IV沉淀中分离纯化α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)制剂的工艺。方法以Cohn组分Ⅳ为原料,用12倍体积20mmol/L Tris-HCl缓冲液溶解后,加入2.5%气相二氧化硅搅拌吸附脂蛋白等杂质。抽提液经离心收集上清,再用0.45μm滤膜过滤。将滤液上样于CM-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析柱,收集未吸附的流穿蛋白液。再将收集的流穿液上样于Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱,上样及平衡液清洗后,用含60mmol NaCl的缓冲液洗涤杂蛋白,再用含100mmol/L NaCl的缓冲液洗脱,收集洗脱液。