高效液相色谱法测定发酵液中杆菌肽A

提出了高效液相色谱法测定发酵液中杆菌肽A含量的方法。地衣芽孢杆菌发酵液经离心得到杆菌肽A的粗提液。所得粗提液再经三氯乙酸提取,离心分离。取上清液用Beckman C18色谱柱分离,用乙腈和磷酸二氢钾缓冲溶液以不同体积比混合为流动相梯度洗脱,在220 nm波长处进行测定。杆菌肽A的质量浓度在1.0~15.0 g·L-1范围内与其峰面积呈线性关系,检出限（3S/N）为0.08 g·L-1。在7.37 g·L-1和11.01 g·L-1两个添加水平做回收试验,平均回收率分别为98.1%和97.4%。

亚甲基水杨酸杆菌肽对白羽肉鸡生长性能和肠道菌群结构的影响

亚甲基水杨酸杆菌肽(bacitracin methylene disalicylate, BMD)具有良好的抑菌活性与安全性,可作为一种药物添加剂用于预防和治疗动物疾病。然而,目前关于BMD对白羽肉鸡的生长性能和肠道菌群结构的影响尚不明确。作者选用3日龄健康白羽肉鸡作为实验对象,分别在基础饲粮上添加50 mg/kg金霉素制剂与高(60.0 mg/kg)、中(40.0 mg/kg)、低(20.0 mg/kg)剂量的BMD进行比较饲喂管理。记录28 d内白羽肉鸡料重比变化,利用第二代高通量测序技术对28 d的白羽肉鸡肠道微生物菌群和组成变化进行测序分析,比较各组间与组内的肠道微生物多样性及主要优势菌群相对丰度差异。结果发现,饲喂不同剂量的BMD和金霉素制剂对白羽肉鸡的生长性能均有一定影响,饲喂60.0 mg/kg的BMD时,白羽肉鸡料重比最低,效果最佳。同时,饲喂BMD与金霉素制剂对白羽肉鸡的肠道菌群也产生了一定影响,造成了菌群多样性下降、丰度上升。与空白组相比,添加BMD和金霉素后拟杆菌门、软壁菌门的优势菌群显著上升(P<0.05),而厚壁菌门显著下降(P<0.05)。在属水平上,Fournierella的相对丰度显著上升(P<0.05),而粪杆菌属的相对丰度显著下降(P<0.05)。研究结果表明,饲喂BMD对白羽肉鸡的生长性能和肠道菌群结构均有促进作用,能够有效降低白羽肉鸡料重比且能够促进肠道菌群的微生态健康。

杆菌肽在兽医临床的研究进展

杆菌肽是一种多肽类抗菌药物,主要成分为杆菌肽A和杆菌肽B,抗菌谱与青霉素相似,主要作用于革兰阳性菌,梭菌对其尤为敏感,该药物在动物体口服几乎不吸收,大部分随粪便排出,毒性低,无残留,具有较高的安全性。近年来,许多研究已经表明,亚甲基水杨酸杆菌肽(BMD)可以用于治疗鸡、兔的坏死性肠炎和猪痢疾,美国和欧盟也推荐将该药物用于治疗猪痢疾,其有望从主要发挥促生长作用转为治疗作用。本文主要从杆菌肽的理化性质、作用机制和特点、安全性、残留检测方法和消除特征等几个方面介绍了杆菌肽,并总结了杆菌肽目前在兽医临床上被禁止用作饲料添加剂之后的研究和应用进展,为杆菌肽未来在兽医临床上的应用提供了理论依据。

兽用预混剂中非法添加杆菌肽锌UPLC-PDA检查方法的建立

建立了兽用地克珠利预混剂、盐霉素预混剂、莫能菌素预混剂中非法添加杆菌肽锌的超高效液相色谱-二极管阵列检查方法。采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.05 mol/L甲酸铵溶液(甲酸调节pH值至4.0)-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速0.5 mL/min,二极管阵列检测器(PDA),波长采集范围为200~400 nm,记录色谱图波长217 nm,柱温30℃,进样量5μL。采用峰纯度检查和光谱相似度检查辅助标准品比对方法,对非法添加杆菌肽锌进行确证,并对建立的方法进行方法学验证。结果显示,杆菌肽锌质量浓度在0.4~2 mg/mL内峰面积呈良好线性关系(R^(2)=0.9996),在地克珠利预混剂、盐霉素预混剂、莫能菌素预混剂中杆菌肽锌的平均回收率分别为100.34%、99.22%和95.92%,RSD分别为1.40%、1.21%和1.26%,主成分杆菌肽A与其他成分分离度较好,峰纯度检查和光谱相似度检查均符合要求。本方法操作简便、准确、可靠,适用于以上三种兽用预混剂中非法添加杆菌肽锌的检查。

肠杆菌肽对鸡源大肠杆菌和沙门氏菌抑菌作用

试验旨在研究肠杆菌肽对临床分离大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌作用特性。采用药敏纸片法、微量肉汤法测定肠杆菌肽对大肠杆菌、沙门氏菌抑菌圈直径和最小抑菌浓度,通过微量棋盘法测定肠杆菌肽与硫酸粘杆菌素联合抑菌效果,并测定肠杆菌肽对大肠杆菌和沙门氏菌的生长抑制作用。结果显示,肠杆菌肽对鸡源大肠杆菌和沙门氏菌的最小抑菌浓度分别在4~8 mg/L和4~16 mg/L之间;抑菌圈直径在6.0~21.6 mm和6.0~22.5 mm之间。肠杆菌肽与硫酸粘杆菌素的联合抑菌指数(FIC)在1.0~1.5之间。研究表明,肠杆菌肽对大肠杆菌和沙门氏菌具有良好的抑菌作用,与硫酸粘杆菌素无联合抑菌效应。

杆菌肽与百里酚酞的共组装体用于大肠杆菌的可视化检测

利用溶剂环境变化诱导杆菌肽(AMP)与疏水性pH指示剂百里酚酞(TP)共组装形成纳米颗粒(AMP/TP NPs),并结合磁分离技术,利用大肠杆菌适配体修饰的磁珠(Apt-MB)捕获富集细菌,所制备的AMP/TP NPs与Apt-MB和大肠杆菌(Escherichia Coli,E.coli)混合,形成AMP/TP NPs@E.coli@Apt-MB夹心复合物,构建了对E.coli的灵敏分析平台。随着加入NaOH后溶液pH改变使AMP/TP NPs溶解产生比色信号,通过监测在590 nm处的OD值来定量E.coli。E.coli浓度在2.08×10^(1)~2.08×10^(5)CFU·mL^(-1)范围内与OD_(590 nm)呈现良好的线性关系,检测限低至1.66 CFU·mL^(-1)。此外,将比色信号与智能手机结合有利于现场即时定量检测。该工作为食品安全、临床诊断和环境监测等领域中实现即时检测细菌提供了新方法。

杆菌七肽对草鱼生长性能的影响

试验旨在研究草鱼(Ctenopharyngodon idella)饵料中添加不同水平的杆菌七肽(Microcin C7)对其生长性能的影响,探讨杆菌七肽在草鱼养殖中的最适添加水平。研究选用400尾体重约15g的草鱼,按照单因素试验设计均分4个处理,每个处理4个重复,每个重复25尾草鱼。各组草鱼分别投喂含有0mg/kg、40mg/kg、80mg/kg和120mg/kg的杆菌七肽的试验饵料。预饲期1周,正式试验期8周。试验结束,检测各组草鱼的生长性能相关指标。结果表明,在草鱼养殖中添加80mg/kg和120mg/kg的杆菌七肽可以显著提高草鱼的试验末体重(P<0.05),分别比对照组显著提高了19.12%、21.62%(P<0.05);显著提高了草鱼的增重率(P<0.05),分别比对照组显著提高了29.23%、31.79%(P<0.05);特定生长率分别比对照组显著提高了17.68%、22.10%(P<0.05);而添加80mg/kg和120mg/kg的杆菌七肽可以显著降低草鱼的饵料系数(P<0.05),分别比对照组显著降低了8.87%、9.85%(P<0.05)。研究表明,在草鱼养殖中使用适量的杆菌七肽可以显著改善草鱼的生长性能,综合养殖成本考虑,杆菌七肽的最适添加水平为80 mg/kg。

动物组织中粘杆菌素、杆菌肽及维吉尼霉素残留量的液相色谱-串联质谱检测

建立了动物组织（肌肉、肝脏、肾脏）中粘杆菌素、杆菌肽和维吉尼霉素等多肽类抗生素残留量的检测方法。样品经甲醇-0.1%甲酸提取,Oasis HLB固相萃取柱净化后,利用液相色谱-串联质谱进行定性、定量分析。3种多肽类抗生素的检出限分别为粘杆菌素25μg/kg,杆菌肽50μg/kg,维吉尼霉素20μg/kg;平均回收率分别为粘杆菌素89%～98%,杆菌肽90%～99%,维吉尼霉素92%～100%;相对标准偏差为1.91%～9.81%。方法具有快速简便、准确度和灵敏度高、重复性好等特点,适于动物组织中多肽类抗生素的测定。方法的技术指标满足国内外对多肽类抗生素残留量检测的要求。

酵母β－葡聚糖和杆菌肽锌对早期断奶犊牛生长性能和胃肠道发育的影响

本试验旨在研究在犊牛代乳粉中分别添加酵母β-葡聚糖和杆菌肽锌对早期断奶犊牛生长性能及胃肠道发育的影响。选取20头新生荷斯坦公犊牛,随机分为4组,每组5个重复,每个重复1头牛。A组(对照组)饲喂基础饲粮,B、C组饲喂基础饲粮+75m g/kg酵母β-葡聚糖,D组饲喂基础饲粮+60m g/kg杆菌肽锌。试验期28d。每日记录犊牛采食量、每14d逐一称重并计算平均日增重(ADG),在试验第21天晨饲时,给A、B、D3组犊牛口服大肠杆菌肉汤培养基进行攻毒,C组继续正常饲养,收集攻毒后3d直肠内容物经稀释后做微生物计数。试验结束时屠宰,取瘤胃前背盲囊、十二指肠、空肠和回肠做肠道组织切片。结果显示:1)大肠杆菌攻毒前,B组犊牛第1～14天和第15～21天ADG比对照组分别提高了26.17%和24.93%(P<0.05);攻毒后,B、D组ADG比对照组分别提高了30.38%和30.81%(P<0.05)。试验各期饲料转化率(F/G)上,B、D组均显著优于对照组(P<0.05)。2)与对照组相比,B、D组犊牛攻毒后12和24h时直肠中大肠杆菌数量显著降低(P<0.05),同时D组犊牛直肠中乳酸杆菌数量也显著降低(P<0.05);C组犊牛直肠中乳酸杆菌数量显著高于对照组(P<0.05)。3)屠宰试验表明:与对照组相比,B、C组可显著增加犊牛瘤胃乳头长度和乳头宽度(P<0.05)。C、D组犊牛十二指肠隐窝深度显著小于对照组和B组(P<0.05);绒毛高度和隐窝深度比(V/C)也以试验B、C、D各组显著高于对照组(P<0.05)。由此可见,在代乳粉中添加75m g/kg酵母β-葡聚糖能缓解由大肠杆菌攻毒所导致的生长性能下降、小肠组织形态损伤,从而保证犊牛健康生长,并能在一定程度上替代或减少抗生素的使用。

溶氧对地衣芽孢杆菌DW2合成杆菌肽的影响

本文研究了3L发酵罐中不同供氧水平对地衣芽孢杆菌发酵杆菌肽的影响。结果表明,地衣芽孢杆菌DW2发酵杆菌肽的总效价和A组分比例随发酵搅拌转速或通风比的提高而增加;通过比较发酵溶氧水平分别为20%和5%的杆菌肽发酵过程,初步探讨了溶氧对杆菌肽发酵的影响机制。控制发酵液溶氧20%以上,发酵液中的丙酮酸,柠檬酸和α-酮戊二酸等有机酸浓度都高于5%溶氧水平的,说明高溶氧强化了菌体EMP途径和TCA循环;分析发酵液中的Glu、Asn、His、Ile、Lys和Asp等杆菌肽组成性氨基酸浓度,都高于5%溶氧水平的,说明高溶氧还通过促进氨基酸代谢提高杆菌肽效价。

高产杆菌肽菌株的筛选及培养条件研究

采用细胞融合技术得到的菌株与不同来源地衣芽孢杆菌菌株，进行深层液体发酵生产杆菌肽，研究了不同菌株，不同碳源，不同量锌和磷量诸因素对杆菌肽高产的影响．结果表明，1号菌比B-1号、B-2号、3号、4号株菌的效价高，为5．80×10^2Iu·mL^-1．以柠檬酸为碳源时，磷的用量为0．10～0．20mmol·L^-1的最佳培养基中培养时，最有利于杆菌肽的合成，锌的用量10％，其发酵液中杆菌肽效价最高，可达8．86×10^2～9．85×10^2Iu·mL^-1。

基因改组选育高产杆菌肽地衣芽孢杆菌及改组菌株差异分析

为了提高地衣芽孢杆菌肽产量,采用全基因组改组技术进行菌株选育。以地衣芽孢杆菌TJ12为原始菌株,通过紫外诱变、亚硝基胍诱变、常压室温等离子体诱变构建了TJ12菌的突变体库。在优化其原生质体制备和再生条件的基础上,以其中4株诱变菌株(U11、U23、H1、L71)作为亲本,采用聚乙二醇介导的方法进行3轮多亲本的全基因组改组,同时,结合双亲灭活的筛选方法,最终选出1株杆菌肽产量提高并能稳定遗传的优良菌株F3,对其摇瓶发酵36 h,杆菌肽A产量达760 mg/L,为野生菌株TJ12的1.7倍。与野生菌株TJ12相比,改组菌株提前进入生长稳定期,两者发酵过程pH值几乎无差异;最终改组菌生长量虽低于野生菌,但菌株单位细胞还原糖产量及杆菌肽产量都高于野生菌株;其合成基因和调控基因表达量相对野生菌株都上调,其中合成基因上调幅度较大。推测改组菌株自身有了更强大的杆菌肽耐受机制,且合成基因相关部位可能发生了改变。

亚甲基双水杨酸杆菌肽对鸡坏死性肠炎的药效观察

亚甲基双水杨酸杆菌肽对鸡坏死性肠炎的药效观察沈建忠肖希龙杨汉春查振林（中国农业大学动物医学院，北京１０００９４）杆菌肽是从地衣型芽孢杆菌的发酵液中获得的一种多肽类抗生素。它对大多数革兰氏阳性菌、梭菌、螺旋体以及放线菌均有较强的抑杀作用。由于杆菌肽性质...

杆菌肽发酵过程中用毛细管电泳研究氨基酸代谢

应用毛细管电泳技术研究了杆菌肽发酵过程中游离氨基酸含量的动态变化及与发酵效价间的关系,并分析了杆菌肽发酵过程中的部分代谢流方向和规律。结果显示,在高浓度有机氮源的发酵培养基中,菌体代谢的EMP途径从3-PG向PEP转化过程的抑制被解除,同时TCA循环得到加强,这种有利的变化以及添加适量外源Lys,可以促进发酵前期菌体细胞的TCA循环通量,皆可提高发酵效价。

猪可食性组织中杆菌肽残留量测定的微生物学方法

一种微生物学方法被用于猪可食性组织中杆菌肽残留量的测定。猪组织中杆菌肽残留采用甲醇提取,正己烷去脂肪,40℃减压旋转蒸干后,用5%磷酸盐缓冲液溶解残渣。采用杯碟法测定杆菌肽残留量。杆菌肽标准工作液在0.05 IU/mL^0.8 IU/mL范围内,药物浓度对数与抑菌圈直径的平方线性关系良好(R2>0.99)。猪组织样品添加浓度在0.025 IU/g、0.05 U/g和0.1 IU/g时,其肌肉、肝脏、肾脏及皮脂中的回收率均在80%以上。杆菌肽的测定低限为0.025 U/g(相当于410μg/kg)。本研究建立的猪组织中杆菌肽残留的提取、净化和检测方法,适用于猪可食性组织中杆菌肽残留量的测定。

杆菌肽锌和金霉素对蛋鸡产蛋性能和蛋品质的影响机理

选 3 0 0日龄罗曼蛋鸡 576羽 ,随机分为三组 ,每组设四个重复 ,每一重复 4 8羽 .饲喂相同的基础饲粮 ,两试验组饲粮分别添加 50 m g/kg杆菌肽锌和 1 0 0 mg/kg金霉素 .试验为期 90 d,进行屠宰测定 ,并对血液激素水平和常规生化指标进行分析 .结果显示 :饲粮中添加杆菌肽锌和金霉素均能显著提高产蛋率 ( P<0 .0 5)、蛋壳厚度 ( P<0 .0 1 )和蛋壳相对重 ( P<0 .0 5) ,降低料蛋比 ( P<0 .0 5) .但对采食量、蛋重、蛋比重、蛋黄指数、蛋形指数和哈夫单位无明显影响 ( P>0 .0 5) .它们还显著提高了血清中促黄体生成素、促卵泡生成素和甲状旁腺素水平 ( P<0 .0 5) ,且明显降低了尿酸的含量和超氧化物歧化酶活性 ( P<0 .0 5) .此外 ,金霉素还显著提高了碱性磷酸酶活性 ( P<0 .0 5)

杆菌肽产生菌的分离鉴定及其发酵条件初步研究

杆菌肽在畜牧养殖业中应用广泛,开展菌种筛选工作十分必要。以低浓度杆菌肽为筛选方法,分离得到一株杆菌肽产生菌,鉴定并命名为地衣芽孢杆菌Y822(Bacillus licheninformis Y822)。该菌株发酵生产杆菌肽时,最适p H为7.0,溶氧能够促进产物肽积累。将B.licheninformis Y822传代5次,分别进行发酵试验,可得到(783.51±7.34)U/m L杆菌肽,其中A组分占(75.04±0.83)%。B.licheniformis Y822杆菌肽产量较高,生产能力稳定,并且产物中杆菌肽A组分含量高,具有较高的工业应用价值。

杆菌肽产品在动物饲料中的应用研究进展

杆菌肽是一种多肽类抗生素,具有促进动物生长、提高饲料转化率、预防和治疗多种动物肠道疾病的作用,同时具有无残留、无休药期、不产生耐药性、无毒副作用、安全性好等特性,在动物养殖和饲料生产中已有广泛应用。文中简介了杆菌肽的理化性质及其特点,综述了杆菌肽产品在动物饲料中的应用研究进展,并分析和展望了杆菌肽产品的市场应用前景。

杆菌肽锌对产蛋鸡血清生化指标的影响

取 30 0日龄罗曼蛋鸡 768只 ,随机分为 2组 ,饲喂相同的玉米—豆粕型饲粮。其中一个组为对照组 ,另一组为添加 50mg/kg杆菌肽锌的试验组。在自由采食、饮水和光照 16h的条件下 ,进行为期 90d的饲养试验 ,并分别于第 4 5d(前期 )和第 90d(后期 )采样分析。结果表明 :试验组蛋鸡前、后期血清中总蛋白和白蛋白含量分别比对照组升高了 16 2 3% (P <0 0 5)、13 59% (P <0 0 5)和2 6 0 8% (P <0 0 1)、33 90 % (P <0 0 1)。