基于Wnt 5a/β-catenin信号通路探讨杜仲健骨方对骨质疏松症大鼠的治疗作用

目的探究不同剂量杜仲健骨方对骨质疏松症模型大鼠骨力学参数的影响及对Wnt5a/β-catenin信号通路的干预作用。方法60只SD大鼠分为对照组、模型组、杜仲健骨方低剂量组、杜仲健骨方中剂量组和杜仲健骨方高剂量组,采用去势(摘除大鼠双侧卵巢)制备骨质疏松症大鼠模型,对照组仅翻动两侧卵巢,不做其他处理。造模成功后杜仲健骨方各处理组分别给予低、中、高计量的杜仲健骨方灌胃90 d,实验终点检测大鼠骨密度、骨生物力学指标,骨形态学指标;通过Elisa法检测各组大鼠血清中抗酒石酸碱性磷酸酶(TRAP)、尿I型胶原交联N末端肽(U-NTX)、骨碱性磷酸酶(BALP)、雌二醇(E2)、尿型胶原交联C末端肽(U-CTX)、骨钙蛋白(BGP)等骨转化指标;通过qPCR和Western blot法检测骨组织中Wnt5a/β-catenin通路分子的mRNA和蛋白表达水平。结果杜仲健骨方能显著增加骨质疏松大鼠股骨、脊柱骨的骨密度(P<0.01),提高股骨生物力学参数水平(P<0.01);增加皮质骨面积百分比、骨小梁平均厚度、骨小梁面积、骨小梁体积(P<0.01),增加血清中的BALP、E2水平(P<0.01),降低血清中的BGP、TRAP、U-NTX、U-CTX水平(P<0.01);显著增加Wnt5a/β-catenin通路分子的mRNA和蛋白表达水平(P<0.01)。结论杜仲健骨方可以提高骨质疏松大鼠骨力学参数,并且调控Wnt5aβ-catenin信号通路,有利于骨质疏松症的治疗。

杜仲健骨方对大鼠骨质疏松症作用机制研究

目的复制大鼠骨质疏松症模型,测定骨组织Wnt3a、β-catenin基因、蛋白表达,探讨杜仲健骨方对大鼠骨质疏松症作用机制。方法将大鼠采用去卵巢方式制备骨质疏松症动物模型,随机分为模型组、阿仑膦酸钠组(阳性药组)、假手术组、杜仲健骨方高、中、低剂量共6组,每组10只。灌胃70 d,每天1次,假手术组干预同模型组。采用酶联免疫测试方法(ELISA)检测血清总碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、骨钙素(OC)和I型原胶原N-端前肽(PINP),实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测骨组织Wnt3a、β-catenin mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测骨组织Wnt3a、β-catenin蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组骨密度显著降低(P<0.01);与模型组比较,杜仲健骨方剂量组、阳性药组骨密度明显增加(P<0.01,P<0.05);与假手术组比较,模型组血清骨形成指标ALP、TRAP、OC、PINP含量差异有统计学意义(P<0.01);杜仲健骨方各剂量组、阳性药组大鼠血清中ALP、TRAP、OC、PINP含量与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与假手术组比较,模型组骨组织中Wnt3a、β-catenin mRNA及蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.01);杜仲健骨方剂量组、阳性药组Wnt3a、β-cateninm RNA及蛋白表达水平与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论杜仲健骨方作用于Wnt/β-catenin信号通路,发挥治疗骨质疏松症的作用。

基于PI3K/AKT/GSK‐3β信号通路的杜仲健骨方治疗骨质疏松症作用机制研究

目的基于PI3K/AKT/GSK‐3β信号通路探讨杜仲健骨方治疗骨质疏松症的作用机制。方法将60只SD大鼠按随机数字表法分成6组,每组10只,分别为:空白组、杜仲健骨方高(4.86 g/kg)、中(2.43 g/kg)、低剂量组(1.215 g/kg)、阿仑膦酸钠组(阳性药,1 mg/kg)、模型组(生理盐水),摘除双侧卵巢造模,制备骨质疏松症模型。空白组仅翻动两侧卵巢,不做任何处理。给药8周后,主动脉采血,ELISA法测定各组血清抗酒石酸酸性磷酸酶(Str ACP)、肿瘤坏死因子‐α(TNF‐α)、白介素‐1β(IL‐1β)、丙二醛(MDA)含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)活性;骨密度扫描仪测定大鼠股骨骨密度值;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT‐PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸肌醇3‐激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、糖原合成酶激酶‐3(GSK‐3β)mRNA和蛋白表达。结果模型组大鼠骨密度值、血清中Str ACP、TNF‑α、IL‐1β、MDA、SOD的水平,PI3K、AKT、GSK‐3βmRNA和蛋白表达,与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,杜仲健骨方剂量组能够提高骨密度值,血清SOD活性显著升高(P<0.05,P<0.01),血清TNF‐α、IL‐1β、Str ACP、MDA含量显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,杜仲健骨方各剂量组中PI3K、AKT、GSK‐3βmRNA和蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论杜仲健骨方对骨质疏松症的治疗作用可能是通过调控信号通路PI3K/AKT/GSK‐3β来实现的。