青蒿转杜松烯合成酶基因发根系的培养

将已克隆的棉花杜松烯合成酶的ｃＤＮＡ（ｃａｄＣ１４）插入到植物表达载体ｐＢＩ１２１中，构建含ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动下的杜松烯合成酶基因的植物表达载体ｐＢＩＣ１４。用含ｐＢＩＣ１４质粒的发根农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）１５８３４感染青蒿（ＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．）叶片并诱导发根，共建立１２１个生长迅速的发根系。经浓度为２０ｍｇ／Ｌ的Ｋａｎ筛选，获得１２个抗Ｋａｎ阳性根系。ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析表明，外源杜松烯合成酶基因已整合到青蒿基因组中，其转基因频率为３％。ＲＴＰＣＲ分析表明，外源杜松烯合成酶基因在Ｃ３７根系中，在转录水平上已有表达。

陆地棉棉酚合成关键基因杜松烯合酶基因克隆及序列差异分析

利用同源克隆法克隆获得有酚陆地棉(Gossypium hirsutum)杜松烯合酶(Delta-cadinene sythase)基因。结果表明,该基因长ORF为1 665 bp,编码551个氨基酸,具有类戊二烯的保守结构域,有酚和低酚陆地棉之间,该基因存在序列差异。

棉花杜松烯合成酶基因的克隆及其表达分析

杜松烯合成酶是棉酚合成途径中的关键酶,催化(E,E)-法呢基焦磷酸(FPP)环化形成(+)-δ-杜松烯。从陆地棉Y18R中克隆分离了杜松烯合成酶基因(GhCdn),该基因的基因组序列为2700bp,具有6个内含子,剪切后其ORF为1665bp,编码554个氨基酸,该基因属于杜松烯合成酶C亚家族。应用Overlap PCR方法将其上的2个HindⅢ酶切位点钝化后,将GhCdn基因连接到表达载体pBI121上,构建出分别由组成型启动子CaMV 35S和绿色组织高效启动子Psbp驱动的2个植物表达载体pGBI-CaMV 35S-GhCdn和pGBI-Psbp-GhCdn。通过农杆菌介导法转化棉花下胚轴并进行组织培养,获得了9个35S转基因阳性愈伤系和2个P转基因阳性愈伤系。经检测,阳性愈伤组织中GhCdn基因的mRNA表达量和棉酚含量均有所增加,但35S系普遍高于P系。本研究为通过基因工程手段提高棉花组织器官中的棉酚含量提供了依据。

亚洲棉(+)-δ-杜松烯合成酶基因CAD1-A的分离及其在幼苗中的表达特征分析

棉花倍半萜环化酶，即（＋）－δ－杜松烯合成酶（ＣＡＤ），由一个基因家族编码．该 基因家族可分为两个亚族：ＣＡＤ１－Ａ和ＣＡＤ１－Ｃ．分离了亚洲棉ＣＡＤ１－Ａ基因．对亚洲棉 ７天龄幼苗的ｍＲＮＡ原位杂交表明，ＣＡＤ１－Ａ和ＣＡＤ１－Ｃ的转录子主要分布在侧根原 基、顶端分生组织和新生侧根的维管组织中，在幼苗下胚轴的原形成层和部分表皮、下 表皮细胞中也有分布．ＣＡＤ１－Ａ启动子在转基因烟草中表现出相似的活性．组织化学实 验发现，倍半萜醛类分布于侧根根尖的外层细胞以及地上部分的色素腺体中．ＣＡＤ１基 因在亚洲棉幼苗中的表达特征，以及倍半萜醛类的分布特征，组成了棉花幼苗的化学 防御体系。

紫茎泽兰花的化学成分

从紫茎泽兰（ Ｅｕｐａｔｏｒｉｕｍ ａｄｅｎｏｐｈｏｒｕｍ ） 的花中分离得到１２ 个化合物， 其中紫茎泽兰内酯为一新的杜松烯类倍半萜内酯化合物， 其它为２ － 乙酰氧基－ ３ ， ４ ， ６ ， １１ － 四去氢杜松烷－ ７ － 酮， ７ － 羰基泽兰酮， 克拉维醇， 丁香酚－ Ｏ－ β－ 吡喃葡萄糖甙， ５ ， ４′－ 二羟基－ ３ ，６ － 二甲氧基－ ７ － Ｏ－ β－ 吡喃葡萄糖基黄酮， ５ ， ４′－ 二羟基－ ６ ，７ － 二甲氧基－ ３ － Ｏ－ β－ 吡喃葡萄糖基黄酮，３ ， ５ ， ４′－ 三羟基－ ６ ，７ － 二甲氧基黄酮等化合物。

利用RNAi技术调控GhCAD1-A基因创制低酚棉材料

棉酚作为棉花的主要植保素之一,抵抗病虫害侵害的同时也对单胃动物和人具有毒害性。本研究利用RNAi技术结合种子特异启动子,降低杜松烯合酶GhCAD1-A基因在种子中的表达,可用于选育棉花种子低酚而植株其它组织棉酚含量正常的材料。此类棉花既可以控制病虫害的侵害,又可以消除棉酚对棉籽的抗营养作用,对充分利用棉籽副产品、增加人类植物营养来源具有积极意义。

新樟茎的化学成分研究

目的研究新樟Neocinnamomum delavayi茎的化学成分。方法采用硅胶、MCI、RP-18、Sephadex LH-20凝胶和半制备HPLC等柱色谱方法进行分离纯化,通过波谱分析鉴定化合物的结构。结果从新樟茎80%乙醇提取物中分离得到17个化合物,包括4个酚苷、3个木脂素、6个倍半萜、3个黄酮以及1个甾醇类化合物,分别鉴定为6-O-紫丁香酰基-1-O-香草酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、6-O-乙酰基-1-O-（3,4,5-三甲氧基苯基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）、1,6-二-O-紫丁香酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）、3,4,5-三甲氧基苯基-6-O-紫丁香酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、鹅掌揪树脂酚B二甲醚（5）、sesartemin（6）、（＋）-9′-O-（E）-阿魏酰基-5,5′-二甲氧基落叶松脂醇（7）、oplodiol（8）、柳杉二醇（9）、4-表柳杉二醇（10）、7α,11-二羟基-10（14）-杜松烯（11）、（-）-2,9-丁香烷二醇（12）、菜豆酸（13）、儿茶素（14）、表儿茶素（15）、反式-二氢槲皮素（16）、（24S）-24-乙基胆甾-3β,5α,6β-三醇（17）。结论化合物1、2为新的酚苷类化合物,分别命名为新樟苷A和新樟苷B,化合物3~17为首次从新樟属植物中分离得到。