一例DMD基因Alu元件插入突变导致杜氏肌营养不良及其白发症状分析

杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是由DMD基因突变引起的抗肌萎缩蛋白缺乏的一种严重X连锁隐性遗传病,突变形式主要包括外显子缺失和重复、点突变、插入突变等,这些突变通过不同方式影响了抗肌萎缩蛋白的正常表达,最终导致疾病的发生。本研究报告了1例DMD基因第59号外显子(exon 59,E59)插入突变引起的DMD,该患儿相关生化指标明显异常,表现较为明显的DMD早期症状,并出现了多处白发。其母亲和姐姐为携带者,生化指标轻微异常,母亲有轻微临床症状,姐姐无临床症状。其他成员基因和身体状况正常。经测序和序列比对发现,该插入片段为AluYa5亚家族的Alu元件,该片段插入可产生两个终止密码子,末端含一段多聚腺苷酸尾(polyA)。为了解该插入突变对于DMD基因的影响以及与临床症状的关联,通过外显子剪接增强子(exonic splicing enhancer,ESE)预测发现,该插入并不影响E59的剪接,由此推测该插入序列会最终出现在DMD基因的mRNA序列中,插入序列中的2个终止子和polyA很可能会在翻译过程中发挥终止作用,不能产生有功能的抗肌萎缩蛋白,这可能是导致DMD发生的机制。另外该患儿除了典型的DMD症状外,还出现了过早白发症状。本研究首次报道了1例DMD基因编码区插入Alu元件导致的DMD,为研究Alu序列逆转座引发基因突变提供线索,同时扩展了对DMD基因突变的认识。

宁夏地区新生儿杜氏肌营养不良症筛查

目的初步评估宁夏地区男性新生儿人群中杜氏肌营养不良症(Duchennemusculardystrophy,DMD)发病率,建立新生儿DMD筛查的临界值以区分新生儿正常人群和患病人群。方法采用免疫荧光分析法对10000例男性新生儿足跟干血斑滤纸片中的肌酸激酶同工酶浓度进行检测,筛查出高于正常临界值的新生儿,召回进行血清肌酸激酶浓度测定,异常者通过基因检测以明确DMD诊断。结果共筛查10000例男性新生儿,其中2例新生儿经基因检测确诊为DMD,初步估算宁夏地区男性新生儿DMD发病率为1/5000;宁夏地区新生儿肌酸激酶同工酶浓度临界值为468.57ng/mL。结论在宁夏地区进行新生儿DMD筛查是可行的,通过对DMD患儿的早期筛查、早期诊断和早期治疗,可以改善患儿生活质量,为家庭再生育赢得更短的决策时间。

杜氏肌营养不良症(DMD)的植入前遗传学诊断

目的对杜氏肌营养不良症(duchenne muscular dystrophy,DMD)进行植入前遗传学诊断(preim-plantation genetic diagnosis,PGD),阻断DMD患儿的出生。方法针对患者的DMD基因的48号外显子缺失位点采用巢式PCR分别对患者和携带者的单个淋巴细胞、行体外授精-胚胎移植治疗的健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞进行扩增,建立稳定的经单细胞基因诊断DMD的方法。再对在该中心进行超排和体外授精-胚胎移植治疗的DMD携带者的胚胎活检后完成PGD,根据诊断结果选择健康的优质的胚胎移植入子宫。结果携带者的单个淋巴细胞的PCR扩增成功率为90.5%(95/105),健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞PCR扩增成功率为85.7%(54/63),假阳性率为0(0/28)。分别对3例DMD携带者施行了植入前遗传学诊断,病例1移植了2枚未受累的优质胚胎,且成功妊娠单胎并已于2005年4月分娩了1个健康的女婴;病例2移植了2枚优良胚胎,不幸的是未能妊娠。病例3诊断为未受累的仅有的2枚胚胎因胚胎质量差而未能移植。结论该组采用的方案可对DMD基因的48号外显子缺失突变的DMD家庭进行PGD,达到了阻断DMD患儿出生的目的。

杜氏肌营养不良症(DMD)及其动物模型研究进展

杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)属于X连锁隐性遗传病。DMD基因是人类最大基因,突变机制复杂。随着分子生物学的研究进展,对DMD的基因和其编码的抗肌萎缩蛋白(dystrophin)及抗肌萎缩蛋白相关蛋白(utrophin)的认识不断深入。本文就DMD的病理学特点,Dys基因结构、表达、功能,DMD突变及其相关检测技术,DMD实验动物模型及相关治疗的研究进展进行综述。

利用光学基因组图谱技术诊断杜氏肌营养不良1例报告

目的 初步探讨光学基因组图谱技术(OGM)在杜氏肌营养不良(DMD)中的诊断价值。方法 对1例疑似DMD的患儿进行OGM分析,以期发现致病的分子基础。结果 1例男性患儿,7月龄时发现肌酸激酶显著升高,临床疑诊DMD。经多重连接依赖性探针扩增分析(MLPA)和全外显子组测序检测均未发现致病性基因变异。21月龄独走不稳,易摔跤,查体发现双侧腓肠肌肥大、肌力低下。2岁时通过OGM识别出DMD基因内一个长约711kb的臂内倒位,涉及该基因44~55号区段的12个外显子,实现了该患儿的分子诊断。结论 OGM技术能够成功识别出DMD基因的倒位突变,有望成为该病的补充诊断手段。

二代测序技术在杜氏肌营养不良症家系中的分子诊断应用

对22例临床拟诊断为杜氏肌营养不良症(DMD)患儿的家系临床资料进行分析,探讨二代测序(NGS)技术在DMD患者分子诊断中的临床应用价值。先证者同时送检遗传性神经肌肉病相关panel行NGS检测和Dystrophin基因多重连接探针扩增术(MLPA)检测,分析两种方法检出的Dystrophin基因外显子缺失/重复突变结果,Dystrophin基因点突变经Sanger测序验证。通过NGS测序,22例先证者均检出Dystrophin基因突变,其中外显子缺失/重复型突变14例,点突变及微小变异8例。MLPA检测结果与NGS检测结果一致。Sanger测序结果显示NGS检测出的点突变及微小变异是正确的。1例错义突变c.6290G>T,1例无义突变c.3487C>T,4例微小缺失导致的移码突变c.1208delG、c.7497_7506delGGTGGGTGAC、c.9421_9422delAA、c.8910_8913delTCTC在人类基因突变数据库中均未见报道,为Dystrophin基因新突变。该研究结果显示NGS技术可全面检测Dystrophin基因外显子缺失/重复、点突变、微小缺失和内含子突变等变异,在DMD患者分子诊断中的临床应用有一定价值,值得推广。

多重连接依赖式探针扩增和变性高效液相色谱法检测Duchenne型肌营养不良症患者DMD基因的缺失/重复突变

目的比较多重连接依赖式探针扩增法（MLPA）和变性高效液相色谱法（DHPLC）检测Duchenne型肌营养不良症（DMD）患者DMD基因缺失／重复突变的效果。方法选择2004年10月-2005年10月在我院确诊的22位无关DMD男性患者，采用MLPA法对经DHPLC技术检测过的患者的DMD基因的缺失／重复突变进行突变筛查，同时对先证者的23位女性亲属进行基因的缺失／重复突变检测。结果DHPLC技术和MLPA法均检测出11位先证者具有DMD基因缺失突变，3位先证者具有DMD重复突变；MLPA法除能更精确地检测出上述突变外，还检测出DHPLC法未检测出的两位患者的DMD基因存在缺失突变。16个家系中18位可能的女性携带者中，12位经检测为缺失／重复突变携带者。两种方法均未检测到6位先证者及其女性亲属DMD基因具有缺失／重复突变。结论与DHPLC法和传统的多重PCR方法相比，MLPA法检测DMD基因的缺失／重复突变位置更为准确。MLPA法可用于检测先证者及家系中女性携带者DMD基因的缺失／重复突变。

杜氏肌营养不良症的临床表现与基因表型的关联

目的：分析杜氏肌营养不良症（DMD）患者的基因突变特点,探讨疾病的临床表现与基因型的关联。方法：回顾性分析52例DMD患者的临床表现和基因特点。结果：患者多表现为肢体无力、走路姿势异常,发育迟缓,部分患者伴智力下降,心脏功能减退等。多重链接探针依赖扩增技术发现基因检测无异常4例（7.69%）,DMD基因缺失40例（76.9%）,重复8例（15.3%）。基因突变发生在外显子45~55 22例（40.74%）,2~19区域10例（19.23%）。48例基因异常患者中,符合阅读框架原则42例（87.5%）。结论：基因缺失的大小与临床症状的关系不大,病情严重程度关键取决于突变是否会破坏阅读框结构。基因突变越接近5＇端对智力的影响越轻,越接近3＇端对智力的影响越重。

间充质干细胞治疗杜氏肌营养不良症：如何优化移植方案？

背景:药物治疗杜氏肌营养不良症并不理想,近年来越来越多的科学家尝试用间充质干细胞移植治疗杜氏肌营养不良症。目的:旨在通过间充质干细胞治疗杜氏肌营养不良症进展的总结,指导动物实验,以促进其临床应用。方法:由第一作者应用计算机检索Pub Med,中国期刊全文数据库(CNKI)2005年1月至2014年6月相关文献。在标题、摘要、关键词中以"Duchenne muscular dystrophy,mesenchymal stem cells,stem cell transplantation"或以"杜氏肌营养不良症,间充质干细胞,干细胞移植"为检索词进行检索。选择文章内容与间充质干细胞治疗杜氏肌营养不良症有关者,同一领域文献选择近期发表在权威杂志的文章。结果与结论:初检得到317篇文献,根据纳入标准选择41篇文献进行综述。主要通过增加间充质干细胞归巢数量,提高抗肌萎缩蛋白的表达来达到治疗杜氏肌营养不良症目的,常用方法有选择较理想的种子细胞、预处理细胞、改善移植途径、干预归巢过程等。间充质干细胞可以从根本上治疗杜氏肌营养不良症,并且能避免药物治疗的不良反应,具有广阔应用前景。

1例杜氏肌营养不良症家系的基因检测及产前诊断

目的分析杜氏肌营养不良症的遗传学诊断及致病基因的突变位点。方法回顾1例杜氏肌营养不良症患儿的临床资料及家族史,进行DMD基因检测及产前诊断。结果 DMD基因存在错义变异位点c.2270C>G,母亲携带该位点变异,其腹中胎儿未发现该位点存在上述变异。结论通过对先证者基因诊断可对该家庭进行再生育指导及产前诊断。

肌酸激酶MM同工酶在新生儿杜氏肌营养不良症筛查中的应用

目的评估肌酸激酶MM同工酶(CK-MM)用于新生儿杜氏肌营养不良症(DMD)筛查的可行性。方法收集男性新生儿滤纸干血片样本7035份,采用时间分辨荧光法检测CK-MM,对筛查阳性的样本进行DMD基因检测。对时间分辨荧光法检测CK-MM的性能(正确度、精密度、线性范围等)进行验证。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价CK-MM筛查DMD的效能。结果时间分辨荧光法检测CK-MM的批内CV、批间CV和平均偏移均<10%,线性回归方程为Y=1.0458X+1.9296(r=0.9999,P<0.01)。DMD患儿CK-MM浓度明显高于正常对照组(P<0.0001),是正常对照组的67倍。7035例男性新生儿筛查阳性6例(0.085%),确诊2例,DMD基因检测结果显示均为半合变异,基因型分别为c.1990C>T(p.Gln664*)和c.7657C>T(p.Arg2553*)。ROC曲线分析结果显示,CK-MM诊断DMD的曲线下面积(AUC)为1.0,最佳临界值为762 ng/mL,敏感性为100%,特异性为99.94%。结论以滤纸干血片为样本检测CK-MM能有效筛查出DMD患儿,且检测方法简便,值得临床推广。

杜氏肌营养不良症的细胞治疗进展

杜氏肌营养不良症（DMD）为X-连锁隐性遗传，患病率为3．3／10万。本病发生是编码抗肌萎缩蛋白（Dystrophin,Dys）的基因突变引起。DMD患者骨骼肌呈反复退化和再生，最终肌卫星细胞耗竭，骨骼肌被结缔组织和脂肪代替。患者往往在20岁左右因呼吸衰竭而死亡。目前DMD临床治疗效果仍不理想．本文就DMD细胞治疗实验及临床研究进行综述。

女性杜氏肌营养不良症1例并文献复习

目的:研究女性杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)患者的临床特征,探讨其可能的发病机理。方法:对1例具有典型DMD症状和体征的18岁女性患者进行血清肌酶、心电图、肌电图和染色体检查。结果:该患者血清肌酶显著增高,肌电图为肌源性损害表现,核型分析正常。结论:该患者具有典型的DMD临床表现,核型分析正常,考虑XP21/常染色体易位或单亲二倍体是其可能的机理,需作进一步研究。

靶向治疗杜氏肌营养不良症新药——维托拉森(viltolarsen)

杜氏肌营养不良症(DMD)是一种严重的,与X染色体相关的连锁性隐患疾病,人体性染色体中的X染色体发生异常,漏失一段DMD基因所致。DMD基因位于X染色体短臂Xp21处。DMD基因会制造一种重要的抗肌萎缩蛋白(dystrophin),使患者的细胞内完全缺少抗肌萎缩蛋白,肌纤维膜变得无力脆弱。全球范围内,每出生3500~5000例男婴,必有1例患有此隐性疾病,患病率为男婴每10万例有3例,其中2例的母亲是致病基因携带者,另1例由新发基因突变所致。患儿通常在3~4岁开始出现步态异常,10~12岁起逐渐丧失行走能力,经年累月伸展后,导致肌肉逐渐退化消失,包括其呼吸肌肉,许多患者至疾病末期时,常因呼吸功能减退,产生肺部并发症或呼吸衰竭而导致死亡。DMD是由抗肌萎缩蛋白基因(dystrophin gene)突变引起的,约68%的突变是“阅读框”外缺失,破坏翻译阅读框,防止功能性抗肌萎缩蛋白的合成。DMD患者的护理和疾病管理策略已足够延长患者的预期寿命,但无法治愈,急需额外的治疗。近期针对DMD病因的治疗已取得相当大的进展,针对缺乏抗肌萎缩蛋白,通过恢复其功能或增加抗肌萎缩蛋白的表达。有一种遗传方法是外显子跳跃,使用反义寡核苷酸跃过阻止合成的突变基因,并恢复阅读框,产生一种缩短抗肌萎缩蛋白所包含重要功能。靶向治疗DMD新药viltolarsen(维托拉森)是一种磷酸二酰胺类吗啉反义寡核苷酸,由日本新药株式会社和日本国立精神神经医疗研究中心(NCNP)联合研制,2013年2月日本新药株式会社和NCNP重新签署协议,将致力于临床开发,用于治疗DMD。2018年10月在世界肌肉病学大会上,日本新药株式会社公布Ⅱ期临床试验结果,显示与自然病史控制组的男童患者相比,接受维托拉森静脉输注治疗的患儿在10米行走、6分钟行走、从坐姿起立等一系列指标上有改善。显示维托拉森注射液能够提高DMD患儿体内抗肌萎缩蛋白水平,增强肌肉力量。此外,试验中没有出现因为剂量增加而发生的不良反应,表明新药的安全性较好。Ⅱ期临床试验的结果公布后,美国食品药品监督管理局(FDA)和日本批准新药上市的部门——日本医药品医疗器械综合机构(PMDA)同时给予维托拉森静脉滴注液优先审评资格,FDA还授予快速通道、孤儿药和罕见病资格认定。2019年6月29日,在美国奥兰多举行的后多形性肌营养不良症(post-polymorphic dystrophy,PPMD)的年会上,日本新药研发部主管表示,维托拉森静脉滴注液将进入Ⅲ期临床试验研究。2019年9月日本新药株式会社向PMDA提交维托拉森静脉滴注液新药上市申请(NDA),2020年3月25日获得加速批准上市,商品名为ビルテプソ^■。2020年2月7日,日本新药株式会社在美国的全资子公司NS药业公司向美国FDA递交反义寡核苷酸维托拉森静脉滴注液NDA,FDA接受该公司的申请,并认可优先审查的待遇,2020年8月12日加速批准上市,商品名为Viltepso^■。这是美国FDA继2019年12月12日批准美国Sarepta生物制药公司的戈洛地生(golodirsen)上市之后第2款治疗杜氏肌营养不良症的反义寡核苷酸疗法,通过屏蔽(跳跃)抗肌萎缩蛋白基因中的第53号外显子,促进功能性抗肌萎缩蛋白的产生。该文对维托拉森静脉注射液的非临床和临床药理毒理学、临床研究、不良反应、适应证、剂量与用法、用药注意事项及知识产权状态和国内外研究进展等进行介绍。

从《黄帝内经》扶阳思想探讨杜氏肌营养不良症的诊疗

杜氏肌营养不良症(duchenne muscular dystrophy,DMD)发病率较高,预后较差,对我国儿童的公共卫生健康构成了威胁。临床中,以《黄帝内经》扶阳思想为指导对DMD进行诊疗,可有效缓解症状、控制病情的发展。中医学认为,DMD归属于“痿证”范畴,与五迟、五软息息相关。小儿本为稚阳之体,先天阳气不足,后天阳气易损;小儿的生理病理特点是脾肾常虚。DMD的基本病机是脾肾阳虚为本、痰瘀互结为标,靶点治疗上注重顾护阳气,从温补脾肾之阳着手促进小儿肌肉充养、肢体强健,推动水液代谢以消痰浊化瘀血,从而达到控制、改善DMD患儿症状,延缓患儿病情进展,最大限度保持患儿生活自理能力。

延续性护理降低杜氏肌营养不良症患儿家长焦虑抑郁情绪的效果研究

目的延续性护理在降低杜氏肌营养不良症患儿家长焦虑抑郁情绪中的应用效果。方法选取60例杜氏肌营养不良症患儿家长随机分为对照组与实验组,对照组实施常规护理,实验组在此基础上开展延续性护理,1年后比较两组患儿家长的焦虑抑郁情绪(采用临床自评量表SAS/SDS)。结果实验组采取延续性护理干预后SAS/SDS评分均显著降低,且明显低于对照组(P<0.01)。结论采取延续性护理能有效降低杜氏肌营养不良症患儿家长的焦虑抑郁情绪,提高患儿的生活质量,具有一定的临床意义。

美国FDA批准杜氏肌营养不良治疗药物Elevidys增加新适应证

美国FDA于2024年6月20日批准杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)治疗药物Elevidys(delandistrogene moxeparvovec-rokl;CAS登记号:2305040-16-6)增加新的适应证:用于年龄≥4岁的儿童治疗DMD基因突变阳性杜氏肌营养不良,适应于可走动和不可走动的患者。

美国FDA批准首种非甾类杜氏肌营养不良治疗药物Duvyzat(givinostat)

美国FDA于2024年3月21日批准Duvyzat(givinostat,研发代号ITF2357,CAS登记号497833⁃27⁃9,分子式C24H27N3O4)用于6岁以上(含6岁)儿童治疗杜氏肌营养不良(duchenne muscular dystrophy,DMD)。Duvyzat是1种组蛋白脱乙酰基酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂,可以从根本上减少肌肉炎症与功能丧失。Duvyzat是FDA批准的首个非甾类杜氏肌营养不良治疗药物,可用于治疗所有基因型DMD。DMD是肌营养不良症中最常见的类型,主要影响男童,患者早夭率较高。但近些年DMD患者的预期寿命有所提高,有些患者能活到30多岁。Duvyzat为口服药物,1日2次,餐服。推荐剂量需根据患者体重确定。