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杜邦嗜热菌脂肪酶在黑曲霉中的异源表达 被引量:1
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作者 黎小军 蔡礼年 郑建永 《江西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2022年第5期503-507,共5页
该文将杜邦嗜热菌脂肪酶TDL2在黑曲霉系统中异源表达,并考察TDL2自带信号肽和pCAMBIA质粒信号肽对脂肪酶TDL2表达的影响.利用PCR和无缝克隆技术,将脂肪酶TDL2的编码序列与质粒pCAMBIA0380线性片段拼接,分别构建利用β-葡萄糖苷酶bgl2的... 该文将杜邦嗜热菌脂肪酶TDL2在黑曲霉系统中异源表达,并考察TDL2自带信号肽和pCAMBIA质粒信号肽对脂肪酶TDL2表达的影响.利用PCR和无缝克隆技术,将脂肪酶TDL2的编码序列与质粒pCAMBIA0380线性片段拼接,分别构建利用β-葡萄糖苷酶bgl2的信号肽的重组质粒pCAMBIA-TDL2-1和利用TDL2信号肽序列的重组质粒pCAMBIA-TDL2-2.用根瘤农杆菌介导转化宿主细胞A.niger CICC 2213构建组成型黑曲霉工程菌A.niger/pCAMBIA-TDL2-1和A.niger/pCAMBIA-TDL2-2,在发酵120 h后其发酵单位分别达到18.5 U·mL^(-1)和38.3 U·mL^(-1),实现了脂肪酶TDL2在黑曲霉中的异源表达.SDS-PAGE分析和活力测定结果表明:利用脂肪酶TDL2信号肽的工程菌A.niger/pCAMBIA-TDL2-2比利用bgl2信号肽的工程菌A.niger/pCAMBIA-TDL2-1的表达量更大、发酵单位更高. 展开更多
关键词 黑曲霉 脂肪酶TDL2 杜邦嗜热菌 信号肽 异源表达
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基于组合优化策略在毕赤酵母中高效表达杜邦嗜热菌脂肪酶 被引量:1
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作者 汪步青 陈洲 +4 位作者 王亚森 许向阳 高晓冬 藤田盛久 李子杰 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期125-131,共7页
杜邦嗜热菌脂肪酶(LIP1)是一种在洗涤行业、生物柴油制备、油脂改性等领域具有良好应用潜力的碱性脂肪酶,然而其天然产量极低,难以满足产业化需求。采用组合优化策略筛选出高效表达LIP1的毕赤酵母重组菌株。首先,构建毕赤酵母密码子偏... 杜邦嗜热菌脂肪酶(LIP1)是一种在洗涤行业、生物柴油制备、油脂改性等领域具有良好应用潜力的碱性脂肪酶,然而其天然产量极低,难以满足产业化需求。采用组合优化策略筛选出高效表达LIP1的毕赤酵母重组菌株。首先,构建毕赤酵母密码子偏好性优化的LIP1基因,通过高浓度G418抗性平板和BMMY-罗丹明B定性平板筛选出脂肪酶活性较高的重组菌株;其次,利用信号肽优化和分子伴侣共表达优化筛选得到一株高效表达的重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-Mss-SSA4-LIP1,采用碱滴定法测定其酶活,采用比色法测定其底物特异性。结果表明,经组合优化策略筛选出的菌株在摇瓶和5 L发酵罐中发酵最高分泌酶活分别达到1 136 U/mL和12 150 U/mL。底物特异性结果显示重组脂肪酶LIP1最适底物为C8链长的对硝基苯酚酯。综上所述,基于组合优化策略实现了LIP1在毕赤酵母中的高效表达,为未来LIP1的产业化奠定基础。 展开更多
关键词 杜邦嗜热菌脂肪酶(LIP1) 组合优化策略 毕赤酵母 高密度表达 底物特异性
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一种有效的嗜热真菌杜邦嗜热菌靶向基因替代系统 被引量:2
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作者 何佳宁 牛雪梅 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期230-241,共12页
以嗜热真菌杜邦嗜热菌ThermomycesdupontiiNRRL2155为研究材料,利用同源重组原理和真菌原生质体转化方法,以潮霉素抗性基因替换嗜热真菌目标基因,获得抗潮霉素的靶向基因敲除突变菌株。优化的遗传转化体系为:用15mg/mL裂解酶,在28℃下酶... 以嗜热真菌杜邦嗜热菌ThermomycesdupontiiNRRL2155为研究材料,利用同源重组原理和真菌原生质体转化方法,以潮霉素抗性基因替换嗜热真菌目标基因,获得抗潮霉素的靶向基因敲除突变菌株。优化的遗传转化体系为:用15mg/mL裂解酶,在28℃下酶解2g杜邦嗜热菌菌丝5.5h以获得原生质体,经STC缓冲液洗涤重悬后,利用PEG(polyethylene glycol)介导的遗传转化方式,将10μg线性敲除全长片段转化至杜邦嗜热菌原生质体中,通过潮霉素筛选及PCR验证得到基因替换突变菌株,同源重组率达到20%。本研究首次将原生质体转化方法应用在杜邦嗜热菌,并成功建立稳定高效的基因替换体系,为快速构建杜邦嗜热菌的遗传转化体系和研究该嗜热真菌的基因功能提供有效方法。 展开更多
关键词 嗜热真菌 杜邦嗜热菌 原生质体转化 基因敲除 生物合成基因
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产耐高温木聚糖酶菌株的筛选鉴定及酶学性质初步研究 被引量:2
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作者 何海燕 凌新 +2 位作者 黄琦琦 黄智娴 覃拥灵 《饲料研究》 CAS 北大核心 2021年第20期60-63,共4页
研究采用透明圈法筛选1株耐高温木聚糖酶产生菌TP-1。通过菌落特征观察、显微镜观察和ITS序列分析,鉴定为杜邦嗜热菌。结果显示,经酶学性质初步研究杜邦嗜热菌TP-1所产的木聚糖酶的最佳作用温度为60℃,最佳反应pH值为5,最适条件下测得... 研究采用透明圈法筛选1株耐高温木聚糖酶产生菌TP-1。通过菌落特征观察、显微镜观察和ITS序列分析,鉴定为杜邦嗜热菌。结果显示,经酶学性质初步研究杜邦嗜热菌TP-1所产的木聚糖酶的最佳作用温度为60℃,最佳反应pH值为5,最适条件下测得酶活为75.96 U/g。pH值4、60℃条件下保温2 h,该酶仍可保持较高活性。研究表明,Fe^(2+)、Ba^(2+)、Mn^(2+)对木聚糖酶酶活具有明显的提升作用,Co^(2+)能够降低酶活。该酶在饲料加工行业具有较好应用前景。 展开更多
关键词 木聚糖酶 筛选 鉴定 杜邦嗜热菌 酶学性质
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SDR基因在嗜热杜邦菌Thermolides生物合成中的作用
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作者 杜远江 黄为平 +1 位作者 张克勤 牛雪梅 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1415-1426,共12页
对嗜热杜邦菌Thermomyces dupontii中负责生物合成PKS-NRPS大环内酯Thermolides的关键基因进行异源宿主表达的前期研究发现,短链脱氢酶(short chain dehydrogenase,SDR)基因负责Thermolides中6-羰基还原成羟基,并是生物合成Thermolides ... 对嗜热杜邦菌Thermomyces dupontii中负责生物合成PKS-NRPS大环内酯Thermolides的关键基因进行异源宿主表达的前期研究发现,短链脱氢酶(short chain dehydrogenase,SDR)基因负责Thermolides中6-羰基还原成羟基,并是生物合成Thermolides A-C的最后反应步骤.对原宿主嗜热杜邦菌中基因功能缺失进行研究,发现乙酰基转移酶(acetyltransferase,AT)基因负责的Thermolides乙酰化修饰是合成Thermolides A-C最后反应步骤.因此进一步对嗜热杜邦菌突变菌株ΔSDR和ΔAT进行发酵,并比较分析这两株突变菌株代谢图谱中的差异化合物.在ΔSDR中,未检测到异源宿主表达研究中Thermolides的6位羰基的中间体及其衍生物,也未检测到其他可能的所有生物合成Thermolides的羰基中间体及其衍生物.研究结果表明SDR基因不仅负责Thermolides中6位酮基还原为羟基,也可能参与了Thermolides骨架的形成;这为解析类似的SDR基因的原有功能提供了一定思路,同时表明通过异源宿主表达和本宿主基因编辑来研究生物合成基因的功能会产生差异. 展开更多
关键词 杜邦嗜热菌 Thermolides 短链脱氢酶基因(SDR) 异源表达 基因功能
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