杠柳毒苷通过诱导细胞自噬抑制前列腺癌细胞增殖

检测杠柳毒苷(periplocin,PP)对前列腺癌细胞(prostate cancer,PCa)增殖的抑制作用并探讨其分子机制。体外培养前列腺癌DU145和PC3细胞,CCK8实验、克隆形成、3D基质胶侵袭实验检测杠柳毒苷对前列腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移侵袭等作用;流式细胞术、Hoechst 33258染色、Western blot实验确定杠柳毒苷诱导前列腺癌细胞凋亡、诱导凋亡小体形成及细胞凋亡相关蛋白表达水平;RNA-Seq转录组测序检测杠柳毒苷对前列腺癌细胞基因表达谱影响;DCFH-DA荧光探针检测杠柳毒苷对细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平影响;Western blot、EGFP-LC3B融合蛋白表达细胞检测杠柳毒苷对细胞自噬相关蛋白表达及对细胞自噬体形成的影响;构建裸鼠荷瘤模型检测杠柳毒苷对前列腺癌细胞体内生长抑制作用。研究结果表明,杠柳毒苷可浓度依赖性抑制前列腺癌细胞增殖、克隆形成能力及迁移侵袭能力;诱导细胞凋亡小体产生及凋亡相关蛋白表达;改变前列腺癌细胞基因表达谱;浓度依赖性提高前列腺癌细胞内ROS水平,上调自噬标志蛋白LC3B和Beclin-1表达,下调自噬降解标志蛋白p62表达;抑制前列腺癌细胞在裸鼠体内生长。本研究发现PP可抑制PCa细胞增殖并诱导细胞凋亡,其分子机制可能为PP诱导前列腺癌细胞自噬最终导致细胞死亡。

盐胁迫对杠柳幼苗生长及次生代谢产物积累的影响

【目的】探索盐胁迫对杠柳幼苗生长及次生代谢物的影响,初步了解杠柳盐耐受范围及盐胁迫对杠柳次生代谢产物的诱导作用。【方法】以培养30 d的杠柳实生苗为材料,测定不同盐浓度[0(CK)、0.2%、0.5%、1.0%、2.0%]处理后,杠柳幼苗的生物量及总甾体成分、强心苷类成分(杠柳毒苷、杠柳次苷及杠柳苷元)、4-甲氧基水杨醛含量的变化特征。【结果】杠柳幼苗在中低浓度盐胁迫下生长良好,且地上部分干鲜质量及地下部分干质量均有不同程度增加,其干湿比也均随盐胁迫程度的增加逐渐升高;植株体内的主要有效成分如总甾体、强心苷类的含量在中等盐胁迫浓度作用下呈现明显上升趋势,而4-甲氧基水杨醛含量则在高浓度盐胁迫下显著增加。【结论】杠柳具有较强的耐盐性,且一定浓度范围内的盐胁迫可显著提高杠柳幼苗根、茎中主要药效成分含量。

我区成功提取杠柳成分生物合成天然橡胶

2024年1月3日,记者从自治区科技厅获悉,宁夏大学开展的自治区重点研发计划一—“天然橡胶生产替代植物杠柳的培育与产业化利用关键技术研发”项目,近日取得重要科技成果:该项目成功提取杠柳成分生物合成天然橡胶,为破解我国天然橡胶资源贫乏所致的工业瓶颈、丰富橡胶资源提供了技术支撑。

杠柳毒苷理化性质研究

目的为中药单体杠柳毒苷制剂的开发提供科学的参考依据及技术支持。方法以杠柳毒苷为研究对象,考察了杠柳毒苷的溶解度、引湿性、稳定性。结果在pH1.0~8.0之间的介质中的杠柳毒苷溶解度存在一定的pH依赖性,且均属于微溶;具有引湿性;在高温、高湿、酸的条件下均不稳定,在氧化、强碱及光照条件下较为稳定;金属离子影响溶液稳定性。结论本研究可为杠柳毒苷的制剂开发提供参考。

基于斑马鱼模型的杠柳毒苷肝毒性评价

目的基于斑马鱼模型初步探讨杠柳毒苷的毒性靶器官和潜在作用机制。方法将斑马鱼(4dayspostfertilization,4 dpf)暴露于不同浓度(低浓度1μg·mL^(-1),高浓度1.5μg·mL^(-1))的杠柳毒苷溶液中24 h,统计杠柳毒苷对斑马鱼的致死率;10%致死剂量下(<LC10)暴露24 h后,基于肝脏面积变化,吖啶橙染色,肝脏组织病理切片,谷丙转氨酶(ALT)与谷草转氨酶(AST)活性变化等指标评价杠柳毒苷的肝毒性;通过网络药理学与分子对接技术预测杠柳毒苷肝毒性潜在作用机制,并通过实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)对预测靶点进行验证。结果杠柳毒苷对斑马鱼的亚致死浓度(LC10)为1.6126μg·mL^(-1),亚致死浓度暴露条件下,与空白组相比,杠柳毒苷能够引起斑马鱼肝脏面积减小和明显的肝脏细胞凋亡,组织病理切片结果显示杠柳毒苷能够诱导肝细胞出现结构排列松散紊乱以及明显空泡化等病理特征。此外,杠柳毒苷能够显著升高斑马鱼ALT、AST活性,证明杠柳毒苷对斑马鱼模型有显著的肝毒性;网络药理学结果表明杠柳毒苷诱导肝毒性与21个潜在作用靶点相关,PPI蛋白互作网络分析排名前5位的靶点为信号转导与转录激活因子3(STAT3)、热休克蛋白(HSP)90AA1、缺氧诱导因子1A(HIF1A)、一氧化氮合酶3(NOS3)、雷帕霉素靶蛋白(MTOR),KEGG结果显示杠柳毒苷肝毒性可能与缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路、钙(Calcium)信号通路等信号通路相关,RT-PCR进一步验证以上预测结果。结论杠柳毒苷可能是通过影响HIF-1信号通路与PI3K-Akt信号通路,进而引发肝毒性。

杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元与人血浆蛋白结合率测定

目的:测定杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元与人血浆蛋白的结合率。方法:采用平衡透析法结合HPLC,使用Zorbax SB-C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,5μm),杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元分别采用乙腈-水(26∶74)、(30∶70)、(28∶72)为流动相,流速0.3 m L·min-1,检测波长220 nm。结果:在低、中、高不同质量浓度下,杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元和人血浆蛋白的平均结合率分别为83.48%、94.19%、84.04%。结论:杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元和人血浆蛋白的结合率大于80%,为高血浆蛋白结合的化合物。

滇杠柳的化学成分

从滇杠柳(Periploca forrestii)根茎中分得一个新强心甙元8-羟基杠柳甙元(3β,5β,8β,14β-四羟基-强心甾-20(22)-烯内酯(1),同时还获得杠柳甙元(2),杠柳甙(3),北五加皮甙E(4),胡萝卜甙(5)和熊果酸(6)。它们的化学结构经光谱和化学方法得以确定。

杠柳甙元对人肝癌Hep3B细胞增殖、凋亡、迁移的调控作用及其机制研究

目的:观察杠柳甙元(Periplogenin,PPG)对人肝癌Hep3B细胞增殖、凋亡、迁移的调控作用,并探讨其相关机制。方法:将Hep3B细胞分为空白组、PPG组。空白组的Hep3B细胞未行PPG处理,PPG组的Hep3B细胞分别以2.5、5、12.5μmol/mL PPG干预48 h。使用CCK-8法检测细胞增殖;光镜观察细胞形态变化;DAPI/PI染色法观察细胞凋亡状态;平板克隆法检测细胞克隆形成能力;划痕法检测细胞迁移能力;Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Bcl-2以及细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteina 9,MMP-9)。结果:与空白组比较,各PPG组细胞增殖水平降低,细胞数量减少且出现体积缩小、染色质固缩、核破裂等现象。PPG处理后,Hep3B细胞克隆形成水平降低,细胞迁移率降低。与空白组相比,Bcl-2蛋白水平显著降低,Cleaved Caspase-3/Caspase-3蛋白比例增高;MMP-9蛋白表达水平降低,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论:杠柳甙元可有效抑制肝癌Hep3B细胞的增殖、迁移,促进其凋亡,并呈剂量依赖性,其作用机制可能与激活Caspase信号通路、抑制MMP-9活性相关。

杠柳天然橡胶合成相关R2R3-MYB基因克隆及表达分析

首次克隆了杠柳中调控天然橡胶生物合成途径的R2R3-MYB基因,为杠柳天然橡胶生物合成调控机制的研究提供候选基因。利用生物信息学的方法,对杠柳的基因组数据进行分析,发现122条R2R3-MYB基因。通过构建系统进化树、氨基酸多序列比对、保守结构域和三级结构分析,确定杠柳中可能参与调控天然橡胶合成的R2R3-MYB基因,并进行基因在杠柳中的组织特异性表达分析。结果表明:PsMYB79、PsMYB102、PsMYB159和PsMYB178与巴西橡胶树HbMYB在同一分支上,均具有典型的R2R3-MYB结构域及SHAQKYF保守基序,而且氨基酸之间序列相似性分别为72.5%、64.5%、61.6%和57.8%。RT-PCR分析结果表明,4个基因在乳胶形成的部位中均表达,其中PsMYB79和PsMYB178在根中表达最强,PsMYB102在幼叶中表达强烈,PsMYB159在根、茎、幼叶和老叶中普遍表达。因此推测杠柳R2R3-MYB转录因子家族中PsMYB79、PsMYB102、PsMYB159和PsMYB178基因可能参与调节植物不同组织器官中天然橡胶生物合成过程。

杠柳不同部位的杠柳毒苷含量

目的:测定杠柳不同部位的杠柳毒苷含量。方法:采用HPLC法,ODS色谱柱,流动相为乙腈∶水=27∶73,检测波长220 nm。结果:杠柳的根皮、茎皮、根的木质部和茎的木质部的杠柳毒苷含量分别为1.03%、0.65%、0.26%、0.39%;杠柳的叶及果实未检出杠柳毒苷。结论:杠柳植物可综合利用。

香加皮强心成分杠柳毒苷肠菌代谢研究

[目的]检测杠柳毒苷在大鼠和人体肠菌作用下含量与成分的变化。[方法]采用离体粪便温孵法,利用高效液相—紫外法对温孵不同时间的杠柳毒苷及其代谢产物含量进行测定,并利用高效液相—质谱联用法对代谢物进行鉴定。[结果]杠柳毒苷含量随温孵时间的延长呈快速下降的趋势,温孵5h含量降低约75%,与此同时有代谢物生成,并随温孵时间的延长呈上升趋势。[结论]杠柳毒苷在肠菌(大鼠/人体)作用下,代谢迅速,生成了代谢产物杠柳次苷。

香加皮杠柳苷对人肺癌QG56细胞抑制作用的研究

目的：研究香加皮杠柳苷（CPP）对人肺癌QG56细胞的抑制作用及其作用机制。方法体外培养人肺癌QG56细胞，设对照组和终浓度为1.25、2.50、5.00、10.00、20.00μg/L的CPP（CPP 1~5）组，每组设3个平行孔，分别培养24、48、72 h。采用MTT法检测CPP对QG56细胞增殖的影响；倒置显微镜观察CPP处理前后细胞形态变化；流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布；RT-PCR法检测CPP作用后QG56细胞中凋亡相关基因bax mRNA表达情况；免疫细胞化学法检测CPP对QG56细胞bax蛋白表达的影响。结果随CPP浓度的增加、作用时间的延长，细胞增殖抑制率明显增高。显微镜下可见CPP处理后的QG56细胞变圆，皱缩，呈悬浮状态。随CPP浓度的增加，G0/G1期细胞比例增高，而S期和G2/M期细胞比例减少, QG56细胞凋亡率明显增高。CPP 2组经CPP作用48 h后，细胞凋亡率高于对照组，CPP 3组经CPP作用24 h后，细胞凋亡率均高于对照组，CPP 4组经CPP作用12 h后，细胞凋亡率均高于对照组（均P＜0.05）。CPP 2~4组经CPP作用48 h时QG56细胞中bax mRNA和蛋白的表达明显增强。结论 CPP可通过阻滞细胞周期和诱导凋亡发挥对人肺癌QG56细胞的抑制作用。

杠柳杀虫活性成分的分离

采用柱层析分离、高效液相色谱切分和生物活性追踪法,从杠柳Periploca sepium根皮甲醇提取物中分离出2个具有杀虫活性的化合物(G1和G2),经鉴定其分别为已知物杠柳新苷D和F。生物活性测定结果表明,化合物G1和G2对3龄粘虫Mythimna separata 48 h的胃毒致死中浓度(LC50)分别为0.39和0.34 mg/mL,对小菜蛾Plutella xyllostella 48 h的胃毒LC50值分别为1.21和1.39 mg/mL。

杠柳毒素NW的杀虫活性

杠柳毒素NW是从杠柳(Periploca sepium Bunge)中分离的新化合物,是其主要的杀虫成分。对杠柳毒素NW的杀虫活性进行了测定,结果表明:杠柳毒素NW对小地老虎无明显的胃毒活性,对3龄的小菜蛾、粘虫和菜粉蝶幼虫均有较强的胃毒活性,处理后24h的致死中浓(LC50)分别是866.17,927.92和1107.08mg·L-1;对上述供试昆虫均无明显的触杀活性。此外,杠柳毒素NW对棉蚜、棉红蜘蛛及卫生害虫家蝇3龄幼虫和淡色库蚊3龄幼虫均有很好的毒杀活性,处理后24h的LC50分别为1743.17,2179.49,714.94和653.29mg·L-1。

杠柳毒苷在模拟消化液中的稳定性研究

[目的]考察杠柳毒苷在模拟人体消化道液中的稳定性。[方法]配制不同pH值的模拟消化液,采用高效液相色谱法,检测杠柳毒苷在各种模拟消化液中的含量变化,并利用薄层鉴别、高效液相色谱-质谱联用法对水解产物进行定性分析。[结果]杠柳毒苷在模拟空腹胃液(pH=1.2)中1 h含量降低22.2%,其水解产物为脱去两分子糖的杠柳苷元;在模拟进食胃液、小肠液、大肠液中0～6 h含量均无变化。[结论]杠柳毒苷在不同pH值的模拟消化液中的稳定性不同,在模拟进食胃液、小肠液、大肠液中稳定,在模拟空腹胃液中不稳定,可被水解为杠柳苷元。模拟消化液的pH值是影响杠柳毒苷稳定性的重要因素,模拟消化液中的胃蛋白酶、胰蛋白酶不影响杠柳毒苷的稳定性。

杠柳茎化学成分的研究

从杠柳(Periplocaspeium)茎的乙醇提取物中的乙酸乙酯部分分离得到得3个化合物,其结构经波谱分析和化学分析方法确定为北五加皮苷E(I)、蔗糖(Ⅱ)及杠柳苷元(Ⅲ)。

香加皮最大耐受量给药小鼠体内杠柳毒苷及苷元的代谢

目的研究最大耐受量下香加皮中杠柳毒苷及苷元在小鼠体内的代谢规律。方法小鼠单次腹腔注射给予最大耐受量的香加皮水提物,高效液相色谱法测定给药后不同时间点血浆及心脏组织中杠柳毒苷及苷元的浓度。结果小鼠给药后,血浆中杠柳毒苷及杠柳毒苷苷元均出现多峰,其中杠柳毒苷在0～45 min时间段为吸收相,符合零级动力学,拟合方程为C=0.320 t,在45 min和120 min出现两个高峰,120～720 min时间段符合二室模型,t1/2α=1.694 min,t1/2β=344.049 min。在药后12 h内心脏组织中杠柳毒苷及杠柳毒苷苷元的含量相对稳定,没有显著降低。结论杠柳毒苷及苷元在体内存在肝肠循环,且苷元吸收较快;杠柳毒苷及苷元在心脏内有一定的蓄积。

杠柳细胞悬浮培养体系的建立及有效成分杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量的测定

[目的]建立杠柳细胞悬浮培养体系,并测定悬浮细胞中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量。[方法]无菌条件下切取杠柳幼根诱导愈伤组织,将其进行继代增殖培养,然后再将愈伤组织接种到液体培养基中建立细胞悬浮培养体系,并测定细胞中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量。[结果]建立了杠柳细胞悬浮培养体系,并测定了细胞中杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量分别为4.06μg/g和1.92μg/g。[结论]通过组织培养方式可以成功建立杠柳细胞悬浮培养体系,细胞生长旺盛,但细胞中有效成分含量低,需要进一步对其基本培养基和培养条件进行考察。

广西杠柳属一新种

广西杠柳属一新种方鼎，凌惠珠（广西中医药研究所，南宁５３００２２）关键词杠柳属；大花杠柳；新种；广西ＡＮＥＷＳＰＥＣＩＥＳＯＦＰＥＲＩＰＬＯＣＡＬＩＮＮ．（ＡＳＣＬＥＰＩＡＤＡＣＥＡＥ）ＦＲＯＭＧＵＡＮＧＸＩ￥ＦａｎｇＤｉｎｇａｎｄＬｉｎｇＨｕｉｚｈ...

马达加斯加产萝摩科一新种──尾叶杠柳(英文)

文章记述了马达加斯加萝摩科杜柳属一新种──尾叶杠柳（Ｐｅｒｉｐｌｏｃａ ｃａｕｄａｔｉｆｏｌｉａ）．