杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元与人血浆蛋白结合率测定

目的:测定杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元与人血浆蛋白的结合率。方法:采用平衡透析法结合HPLC,使用Zorbax SB-C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,5μm),杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元分别采用乙腈-水(26∶74)、(30∶70)、(28∶72)为流动相,流速0.3 m L·min-1,检测波长220 nm。结果:在低、中、高不同质量浓度下,杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元和人血浆蛋白的平均结合率分别为83.48%、94.19%、84.04%。结论:杠柳毒苷、杠柳次苷、杠柳苷元和人血浆蛋白的结合率大于80%,为高血浆蛋白结合的化合物。

杠柳苷元在大鼠肝微粒体中代谢产物的UPLC-Q-TOF/MS法鉴定

为考察杠柳苷元经大鼠肝微粒体体外代谢的特点,对其代谢产物进行了定性研究。建立肝微粒体温孵体系,采用超高效液相色谱和四级杆飞行时间串联质谱(ultra performance liquid chromatography/quadrupole-time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF/MS)技术,结合保留时间、精确质量数和离子的碎片特征对孵育后的代谢产物进行结构鉴定。结果表明:杠柳苷元经肝微粒体温孵后,可以检测到除原型以外的4个I相代谢产物;杠柳苷元经大鼠肝微粒体温孵后,主要的代谢途径为脱水、脱氢和甲基化。本研究为其体内代谢的研究提供了基础。

杠柳苷元大鼠在体肠吸收动力学研究

目的：考察杠柳苷元大鼠在体肠吸收动力学,探讨杠柳苷元可能的吸收机制。方法：采用大鼠在体单向肠灌流模型,使用高效液相色谱法以Hypersil ODS2（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱为固定相,乙腈-水（29∶71）为流动相,流速1 mL·min^（-1）,于220 nm波长测定灌流液中杠柳苷元的含量。结果：杠柳苷元不同浓度下的吸收速率常数（Ka）和表观吸收系数（Papp）在考察浓度范围内（1.25、5、20μg·mL^（-1））具有显著性差异（P〈0.01）,存在浓度依赖性。结论：杠柳苷元的肠吸收机制除被动扩散外,可能还涉及主动转运。

杠柳苷元的抗肿瘤作用研究

目的研究中药香加皮提取单体化合物杠柳苷元对体外培养S180、SGC-7901、A549、LOVO、MCF-7、Hep G2肿瘤细胞株的毒性作用，探讨杠柳苷元对荷瘤模型小鼠的抗肿瘤作用。方法四氮唑盐（MTT）法测定杠柳苷元对体外培养肿瘤细胞的毒性作用，移植性荷瘤动物模型评价杠柳苷元对整体动物的抗肿瘤作用。结果杠柳苷元对体外培养肿瘤细胞的毒性作用显著，对常见肿瘤细胞株的个数抑制浓度介于（O．46～1．50）~g／mL；荷瘤模型动物给予杠柳苷元10．0mg／kg剂量时，S180实体瘤抑瘤率达到51．O％±17．O％，使荷腹水瘤小鼠存活时间延长94．2±13．1％，与临床常用抗肿瘤药物FU相当（P〉0．05）；抗肿瘤作用有明显的剂量依赖关系；部分受试动物给药后出现食欲减退、脱毛、抗拒等不良反应，未见死亡。结论杠柳苷元有显著的抗肿瘤作用，同时也有一定的不良反应，其潜在开发价值有待进一步研究评价。

杠柳苷元抑制人乳腺癌细胞增殖作用的研究

目的观察杠柳苷元(periplogenin)对人乳腺癌细胞MCF7的抑制作用并考察其抑制作用的机理。方法使用四氮唑盐(MTT)法测定杠柳苷元对MCF7细胞的增殖抑制效果,并使用蛋白免疫印迹法测定其中凋亡蛋白的表达。结果杠柳苷元对MCF7细胞起到了明显的抑制作用,其抑制作用呈剂量依赖性,蛋白免疫印迹法也观察到杠柳苷元促进MCF7细胞内凋亡相关蛋白的表达,其表达呈时间依赖性。结论杠柳苷元具有显著的体外抑制MCF7细胞增殖的作用,其抑制作用是通过促进MCF7细胞凋亡而发挥的。

杠柳苷元诱导鼻咽癌细胞凋亡及其作用机制的研究

目的分析中药香加皮杠柳苷元诱导人鼻咽癌CNE2细胞凋亡及其作用机制。方法应用CellTiterGlo发光法检测杠柳苷元对鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响,并计算其半数抑制浓度(IC50);采用荧光定量PCR检测经杠柳苷元处理后细胞凋亡相关基因mRNA表达的改变;采用Western blot法检测相应蛋白酶活性变化。结果(1)在一定浓度范围内,随杠柳苷元浓度升高,对CNE2细胞增殖的抑制作用增加;杠柳苷元作用于CNE2细胞在48 h的IC50为1.712μmol/L。(2)杠柳苷元浓度为1μmol/L的caspase-3 mRNA表达量少量上升作用不明显、2μmol/L的caspase-3 mRNA表达量上升,有一定的作用(P<0.05)。而浓度为4μmol/L的caspase-3 mRNA表达量显著上调,差异显著(P<0.01)。与对照组相比,不同浓度下杠柳苷元的EGFR mRNA的表达量影响结果无统计学意义。(3)杠柳苷元处理CNE2细胞48 h后,杠柳苷元组的caspase-3蛋白酶的表达水平较对照组显著上调(P<0.01);EGFR蛋白酶表达量与对照组相比差异不大(P>0.05)。结论杠柳苷元可明显抑制鼻咽癌细胞的增殖,其机制可能为通过上调凋亡基因caspase-3及其蛋白酶的表达而诱导细胞凋亡。

杠柳苷元对肥大细胞脱颗粒及释放组胺影响的研究

目的:研究香加皮提取单体化合物杠柳苷元对大鼠和小鼠肥大细胞脱颗粒及组胺释放的影响。方法:大鼠腹腔注射百日咳疫苗、后腿注射卵白蛋白致敏,用于测定肥大细胞脱颗粒反应及制备抗血清;取致敏大鼠的血清稀释后对小鼠进行腹腔注射,测定肥大细胞脱颗粒反应;以荧光分光光度法测定组胺浓度。结果:杠柳苷元对体外培养肥大细胞的组胺释放有显著的抑制作用,实验剂量即可使组胺释放浓度降低(69.4±8.6)%,其抑制作用呈显著的剂量依赖关系;杠柳苷元对抗原致敏大鼠肥大细胞的组胺释放也有显著的抑制作用,在20μg·mL-1浓度时即可使组胺释放浓度减少73.55%;杠柳苷元口服给予致敏小鼠后,在50mg·kg-1剂量时即可使小鼠组胺释放浓度减少80%以上,并呈显著的剂量依赖关系。结论:杠柳苷元对体外培养的肥大细胞、致敏大鼠肥大细胞的组胺释放有显著的抑制作用;口服给予杠柳苷元可使小鼠显著减少肥大细胞的组胺释放。鉴于肥大细胞脱颗粒及组胺释放在炎症反应中的作用,可认为杠柳苷元是香加皮具有抗炎作用的有效成分之一。

杠柳毒苷、杠柳次苷及杠柳苷元生物药剂学分类研究

目的采用生物药剂学分类系统(Biopharmaceuticals Classification System,BCS)对杠柳毒苷、杠柳次苷及杠柳苷元进行生物药剂学分类研究。方法采用实验和计算机预测软件Pipeline Pilot 8.5、ChemDraw研究杠柳毒苷、杠柳次苷和杠柳苷元的溶解性和渗透性,根据实验值和预测值利用BCS分类方法对3者进行分类。结果根据实验结果杠柳毒苷、杠柳次苷和杠柳苷元均为BCSⅢ类药物,与不同软件预测的分类结果存在差异。基于Clg P的渗透性结果与实验结果一致;基于lg Cs的溶解性及基于Alg P、lg D的渗透性预测结果与实验结果相反。结论杠柳毒苷、杠柳次苷和杠柳苷元均为BCS Ⅲ类药物,3者溶解性依次降低,但仍都属于高溶解性成分。3者的渗透性是影响其吸收的关键因素。基于化学结构对甲型强心苷类药物活性成分进行的生物药剂学属性预测值与实验结果存在较大差异,对含此类成分的中药制剂的口服吸收进行BCS研究及体内外相关性评价时建议采用多种方法对数据进行校正,增加结果的可靠性。

基于网络药理学的杠柳苷元治疗骨质疏松的作用机制

基于网络药理学分析杠柳苷元预防骨质疏松症的作用机制。方法:通过有机小分子生物活性数据库Pubchem得到的杠柳苷元的简化分子线性输入系统SMILES结构式,然后利用小分子药物靶点预测SwissTargetPrediction数据库预测其作用的潜在靶标。应用疾病相关的基因与突变位点数据库DisGeNET获取与骨质疏松症相关的疾病靶点。在进行比对分析后,获取杠柳苷元作用于骨质疏松的交集靶点,运用蛋白互作网络数据库STRING数据库建立活性成分-疾病靶标的蛋白相互作用网络(PPI),然后使用R语言通路富集分析clusterProfiler包(版本4.2.1)对交集靶点进行生物学功能分析(GO)及通路富集分析(KEGG)。结果:经SwissTargetPrediction数据库预测,获得杠柳苷元有123个潜在作用靶点,经DisGeNET数据库预测,获得骨1089个骨质疏松靶点,取交集得到31个交集靶点。通过PPI网络筛选出JAK-STAT3,MAPK等关键靶点。GO分析显示生物功能760个,涉及细胞内信号转导、细胞增殖、炎症反应等。KEGG分析显示通路132条,其中MAPK信号通路、JAK-STAT3信号通路等可能为治疗骨质疏松症的关键通路。结论:杠柳苷元可能通过抑制破骨细胞增值和功能,发挥对骨质疏松症的防治作用,MAPK信号通路以及JAK-STAT3信号通路在此过程中可能发挥关键作用,为今后分子机制的深入研究以及相应临床药物的开发提供了参考。

杠柳毒苷在模拟消化液中的稳定性研究

[目的]考察杠柳毒苷在模拟人体消化道液中的稳定性。[方法]配制不同pH值的模拟消化液,采用高效液相色谱法,检测杠柳毒苷在各种模拟消化液中的含量变化,并利用薄层鉴别、高效液相色谱-质谱联用法对水解产物进行定性分析。[结果]杠柳毒苷在模拟空腹胃液(pH=1.2)中1 h含量降低22.2%,其水解产物为脱去两分子糖的杠柳苷元;在模拟进食胃液、小肠液、大肠液中0～6 h含量均无变化。[结论]杠柳毒苷在不同pH值的模拟消化液中的稳定性不同,在模拟进食胃液、小肠液、大肠液中稳定,在模拟空腹胃液中不稳定,可被水解为杠柳苷元。模拟消化液的pH值是影响杠柳毒苷稳定性的重要因素,模拟消化液中的胃蛋白酶、胰蛋白酶不影响杠柳毒苷的稳定性。

杠柳茎化学成分的研究

从杠柳(Periplocaspeium)茎的乙醇提取物中的乙酸乙酯部分分离得到得3个化合物,其结构经波谱分析和化学分析方法确定为北五加皮苷E(I)、蔗糖(Ⅱ)及杠柳苷元(Ⅲ)。

香加皮最大耐受量给药小鼠体内杠柳毒苷及苷元的代谢

目的研究最大耐受量下香加皮中杠柳毒苷及苷元在小鼠体内的代谢规律。方法小鼠单次腹腔注射给予最大耐受量的香加皮水提物,高效液相色谱法测定给药后不同时间点血浆及心脏组织中杠柳毒苷及苷元的浓度。结果小鼠给药后,血浆中杠柳毒苷及杠柳毒苷苷元均出现多峰,其中杠柳毒苷在0～45 min时间段为吸收相,符合零级动力学,拟合方程为C=0.320 t,在45 min和120 min出现两个高峰,120～720 min时间段符合二室模型,t1/2α=1.694 min,t1/2β=344.049 min。在药后12 h内心脏组织中杠柳毒苷及杠柳毒苷苷元的含量相对稳定,没有显著降低。结论杠柳毒苷及苷元在体内存在肝肠循环,且苷元吸收较快;杠柳毒苷及苷元在心脏内有一定的蓄积。

滇杠柳的化学成分研究

目的研究滇杠柳Periploca forestti的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱及RP-18柱色谱进行分离纯化,并运用波谱方法对所分得化合物进行结构鉴定。结果从滇杠柳中分得了13个化合物,经波谱解析分别确定为滇杠柳苷元A(1)、杠柳苷元(2)、异甘草素(3)、8-羟基杠柳苷元(4)、甘草素(5)、大豆异黄酮(6)、(?)-高丽槐素(7)、芒柄花素(8)、大黄酚(9)、大黄素甲醚(10)、杠柳苷N(11)、原儿茶酸(12)、臭矢菜素A(13)。结论化合物3、5～9、12、13为首次从该植物中分离得到。