吗啡诱导条件位置性偏爱大鼠海马CA1区NR2A、NR2B的变化

目的检测吗啡诱发条件位置性偏爱(conditioned place preference,CPP)大鼠海马CA1区NMDA受体亚型NR2A、NR2B的变化,探讨NR2A、NR2B在吗啡精神依赖形成过程的作用与可能机制.方法采用恒量法(10mg/kg)连续颈背部皮下注射(subcutaneous,SC)吗啡8 d建立大鼠CPP模型.采用免疫组化法测定海马CA1区NR2A、NR2B的表达.结果 SC 10 mg/kg吗啡8 d建立大鼠CPP模型,吗啡组海马CA1区NR2A表达与生理盐水组比较无显著性变化(P>0.05),而NR2B表达较生理盐水对照组增加(P<0.05).结论吗啡诱导大鼠CPP海马CA1区NR2B表达增加,NR2B可能参与吗啡诱导CPP形成.

东莨菪碱对吗啡诱发条件位置性偏爱重现大鼠杏仁核p-CREB及c-Fos表达的影响

目的:探讨东莨菪碱对吗啡诱发条件位置性偏爱(conditioned place preference,CPP)重现大鼠杏仁核(amygdala nucleus,Amy)cAMP反应元件结合蛋白(phospho-cAMP response element binding protein,p-CREB)和c-Fos表达的变化。方法:以剂量递增法建立大鼠CPP模型,生理盐水替代吗啡训练大鼠,使形成的CPP逐渐消退,小剂量吗啡激活已消退的CPP。采用免疫组化技术测定不同剂量东莨菪碱对吗啡诱发CPP重现时大鼠杏仁核p-CREB和c-Fos的变化。结果:东莨菪碱可抑制吗啡点燃诱发大鼠CPP重现行为;并可减少吗啡诱发的CPP重现时大鼠杏仁核p-CREB和c-Fos的表达。结论:东莨菪碱对小剂量吗啡诱发吗啡依赖大鼠CPP重现行为的抑制作用可能与其抑制大鼠杏仁核p-CREB和c-Fos蛋白表达有关。

吗啡点燃条件位置性偏爱重现大鼠海马CA1区多巴胺递质的变化

目的检测吗啡(morphine,Mo)r点燃条件位置性偏爱(conditioned place preference,CPP)重现大鼠海马CA1区多巴胺(dopamine,DA)递质的变化,揭示海马CA1区DA递质的变化与吗啡点燃诱发CPP重现的关系.方法用恒量法(10mg/kg)给大鼠连续颈背部皮下注射(subcutaneous,SC)吗啡8d建立CPP模型;用生理盐水替代吗啡训练大鼠10d,使形成的CPP逐渐消退;单次SC2.5mg/kg吗啡点燃已消退的CPP.用荧光分光光度法检测吗啡点燃CPP重现大鼠海马CA1区DA递质的变化.结果SC10mg/kg吗啡8d建立CPP,生理盐水训练10d使已形成的CPP消退,小剂量吗啡(2.5mg/kg)使消退的CPP重现;吗啡点燃CPP重现大鼠海马CA1区DA含量与对照组比较显著增加(P<0.05).结论吗啡点燃CPP重现时大鼠海马CA1区DA增加,小剂量吗啡诱发大鼠CPP重现行为可能与海马CA1区中DA含量增加有关.

吗啡点燃条件位置性偏爱重现大鼠海马CA1区NR2B、CaMKⅡ的变化

目的:探讨吗啡(morphine,Mor)点燃条件位置性偏爱(conditioned place preference,CPP)重现大鼠海马CAl区N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA受体)调节亚基NR2B,钙依赖钙调蛋白激Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulin dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)表达的变化。方法:用恒量法(10 mg·kg^(-1))给大鼠连续颈背部皮下注射(subcutaneous,sc)吗啡8 d建立CPP模型;用生理盐水替代吗啡训练大鼠10 d,使形成的CPP逐渐消退;单次sc2.5 mg·kg^(-1)吗啡点燃已消退的CPP。用免疫组化法检测吗啡点燃CPP重现大鼠海马CA1区NR2B、CaMKⅡ表达,图像分析系统测定阳性反应产物的平均灰度值的变化。结果:sc10 mg·kg^(-1)吗啡8 d建立CPP,生理盐水训练10 d使已形成的CPP消退,小剂量吗啡(2.5 mg·kg^(-1))使消退的CPP重现;吗啡点燃(CPP重现大鼠海马CA1区NA2B、CaMKⅡ表达,与对照组比较呈显著增加(P<0.05)。结论:小剂量吗啡诱发大鼠CPP重现行为可能与海马CA1区NR2B、CAMKⅡ表达增加有关。

伏隔核壳部巴氯芬灌注阻断吗啡成瘾小鼠条件位置性偏爱记忆再巩固

氨基丁酸B型受体(GABAB受体)是治疗药物成瘾的潜在靶点,伏隔核壳部(nucleus accumbens shell, AcbSh)是成瘾环路的关键节点,但AcbSh GABA_B受体与记忆再巩固的关系尚不清楚。本文旨在探讨AcbSh微量灌注GABA_B受体激动剂巴氯芬(baclofen, BLF)对吗啡奖赏记忆再巩固及复吸行为的影响。建立吗啡条件位置性偏爱(conditioned place preference, CPP)小鼠模型,采用吗啡奖赏记忆提取激活实验,对比观察环境线索激活吗啡奖赏记忆后,双侧AcbSh灌注BLF对吗啡CPP、吗啡激发CPP重建以及自主活动量的影响。结果表明,吗啡奖赏记忆激活后,Acb Sh单次注入0.06nmol/0.2μL/侧或0.12nmol/0.2μL/侧BLF显著抑制吗啡CPP,且吗啡激发不能重建CPP,而0.01nmol/0.2μL/侧BLF灌注不能抑制吗啡CPP。激活后注入生理盐水及未激活组BLF灌注均未抑制CPP。无论是否激活吗啡奖赏记忆,BLF注入AcbSh都不影响小鼠自主活动。以上结果提示,AcbSh GABA_B受体参与了吗啡CPP的记忆再巩固。记忆激活后激动AcbSh GABA_B受体可通过阻断吗啡CPP的记忆再巩固,消除奖赏记忆,抑制复吸行为。

转轮运动对小鼠吗啡条件性位置偏爱的建立、消退及重建的影响

目的:研究转轮运动对小鼠吗啡条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)的建立、消退及重建的影响。方法:每次吗啡CPP训练之后,均将动物置于特制的带有转轮的饲养笼内6 h;在CPP测试之后,动物每天在训练箱中自由穿梭,进行CPP消退训练;待CPP消退之后,皮下注射(sc)10 mg.kg-1吗啡点燃。结果:非转轮运动组和转轮运动组的小鼠经过吗啡CPP训练后,在伴药箱的时间较训练前均显著增加(P<0.001),但两组间没有明显差异;两组小鼠的吗啡CPP消退过程也没有明显差异(P>0.05)。sc吗啡点燃后,非转轮运动组CPP能够重建,而转轮运动组CPP未能重建;结论:转轮运动对吗啡CPP的建立及消退均没有影响,但可以抑制吗啡CPP的重建。

Environmental cues associated with morphine modulate release of glutamate and γ-aminobutyric acid in ventral subiculum

Objective To investigate whether environmental cues associated with different properties of morphine could regulate the extracellular levels of glutamate and y-aminobutyric acid （GABA） in the hippocampal ventral subiculum, which play a critical role in the reinstatement of drug-seeking behavior induced by environmental cues. Methods Conditioning place preference （CPP） and conditioning place aversion （CPA） models were used to establish environment associated with rewarding and aversive properties of morphine respectively. Microdialysis and high performance liquid chromatography were used to measure the extracelluar level of glutamate and GABA in the ventral subiculum under these environmental cues. Results Exposure to the environmental cues associated with rewarding properties of morphine resulted in a decrease （approximately 11%） of extracellular level of GABA in ventral subiculum, and exposure to the environmental cues associated with aversive properties of morphine resulted in an increase （approximately 230%） of extracellular level of glutamate in ventral subiculum. Conclusion Environmental cues associated with different properties of morphine modulate the release of distinct neurotransmitters in the hippocampal ventral subiculum possibly through different neural circuit.

TRIM32通过Akt/GSK3β/CREB信号通路对甲基苯丙胺成瘾的调控作用

目的观察TRIM32在甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)成瘾过程中的作用,探讨其可能的作用机制。方法小鼠分4组:野生型小鼠(WT)+生理盐水(NS)、WT+MA、Trim32^(-/-)+NS和Trim32^(-/-)+MA组。观察WT和Trim32^(-/-)小鼠自发活动,条件位置性偏爱实验观察Trim32基因缺失对MA成瘾性的形成、消退和复燃的影响,分离各组小鼠纹状体提取蛋白,Western blot检测Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β、CREB和p-CREB的表达水平。培养PC12细胞,采用MTT法,筛选出MA最适给药浓度,体外细胞实验分4组:潜剂对照组(NC)+NS、NC+MA、siTRIM32+NS和siTRIM32+MA,采用siRNA转染技术干扰Trim32的转录,空载作对照,各组给与MA或NS后24 h,收细胞提蛋白,Western blot法检测各组中Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β、CREB和p-CREB的表达。结果WT和Trim32^(-/-)小鼠自发活动未见明显差别(P>0.05)。条件位置性偏爱实验结果显示,与给予NS相比,WT和Trim32^(-/-)小鼠给予MA时偏爱评分明显增加(WT:P<0.01,Trim32^(-/-):P<0.05),与WT+MA相比,Trim32^(-/-)+MA的偏爱评分明显减少(P<0.01)。WT和Trim32^(-/-)小鼠在MA成瘾后第28天,偏爱评分都降至给药前水平,与对照组比较无明显差别(P>0.05),当再次给予一次MA后,WT+MA偏爱评分(110±13)与WT+NS评分(22±9)相比,明显升高(P<0.05),Trim32^(-/-)+MA评分(40±10)与Trim32^(-/-)+NS(27±7)相比无明显差异(P>0.05),同时WT+MA评分(110±13)和Trim32^(-/-)+MA(40±10)两组小鼠的偏爱评分差异有统计学意义(P<0.05)。小鼠纹状体Western blot结果显示,与WT+NS比,WT+MA中TRIM32表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01);各组间Akt、GSK3β和CREB蛋白水平无明显变化;同给予NS相比,WT小鼠在给予MA时,p-Akt和p-GSK3β蛋白表达明显下降(P<0.01),p-CREB蛋白表达明显上调(P<0.05);与WT+MA相比,Trim32^(-/-)+MA小鼠p-Akt和p-GSK3β蛋白表达明显上调(p-Akt:P<0.05,p-GSK3β:P<0.01),p-CREB蛋白表达明显下降(P<0.05)。MTT实验筛选PC12细胞MA最适剂量为800μmol/L,建立成瘾模型。细胞Western blot结果与小鼠纹状体结果一致。结论Trim32基因缺失小鼠对MA不易成瘾和复燃,其机制可能与激活Akt/GSK3β/CREB信号通路有关。

东莨菪碱对吗啡诱发CPP重现大鼠海马p-CREB及c-Fos表达的影响

目的:探讨东莨菪碱对吗啡诱发条件位置性偏爱激活大鼠海马(hippocampus,Hip)cAMP反应元件结合蛋白(phos-pho-cAMP response element binding protein,p-CREB)和c-Fos表达的变化。方法:以吗啡剂量递增法6d建立大鼠条件位置性偏爱(conditioned place preference,CPP)模型,生理盐水替代吗啡训练大鼠10d,使形成的CPP逐渐消退,小剂量吗啡激发已消退的CPP。采用免疫组化技术检测不同剂量东莨菪碱对吗啡诱发CPP重现时大鼠海马p-CREB和c-Fos表达的变化。结果:东莨菪碱可抑制吗啡点燃诱发大鼠CPP重现行为;并可减少吗啡诱发的CPP重现时大鼠海马p-CREB和c-Fos的表达。结论:东莨菪碱对小剂量吗啡诱发吗啡依赖大鼠CPP重现行为的抑制作用可能与其抑制大鼠海马p-CREB和c-Fos蛋白表达有关。