条件增殖型腺病毒PSA—ZD55-hTERT对人前列腺癌细胞移植瘤的抑制作用

目的探讨条件增殖型腺病毒PSA—ZD55-hTERT对人前列腺癌LNCaP细胞移植瘤端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达和肿瘤生长的抑制作用。方法建立人前列腺癌LNCaP细胞裸鼠移植瘤模型，瘤体内注射PSA—ZD55-hTERT，定期测量肿瘤体积，免疫荧光检测移植瘤组织中E1A及hTERT表达，原位末端标记法（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡。结果PSA—ZD55-hTERT能有效沉默hTERT基因，PSA—ZD55-hTERT组hTERT表达水平显著低于Ad—hTERT组、Ad—EGFP组及PBS组，差异显著；Ad—hTERT组、Ad—EGFP组及PBS组细胞凋亡阳性率分别为（49．7±5．1）％、（28．8±4．0）％和（2．8±2．4）％，而PSA—ZD55-hTERT细胞凋亡阳性率为（73．5±6．4）％，表明PSA—ZD55-hTERT能有效诱导肿瘤细胞凋亡；PSA—ZD55-hTERT接种7周后肿瘤体积为（131．5±28．2）mm^3，明显低于Ad—hTERT组[（469．2±74．3）mm^3]、Ad—EGFP组[（583．0±98．5）mm^3]和PBS组[（1547．5±196．4）mm^3]。结论PSA—ZD55-hTERT对裸鼠人前列腺癌LNCaP细胞移植瘤有显著的治疗效果，为治疗前列腺癌提供新的平台。

荷载LASP-1基因siRNA的条件增殖型腺病毒的构建

目的利用腺病毒包装质粒pBHGE3与携带LASP-1 siRNA的穿梭质粒pZD55-LASP-1、pCA13-LASP-1在HEK293细胞内,包装成病毒ZD55-LASP-1和Ad-LASP-1。方法利用Effectene DNA转染试剂将质粒pBHGE3与质粒pZD55-LASP-1、pCA13-LASP-1分别感染HEK293细胞,纯化并扩增病毒。通过PCR鉴定Ad-LASP-1、ZD55-LASP-1是否包含目的基因,E1区是否缺失及有无野生型腺病毒污染。鉴定正确的病毒进行扩增,CsCl梯度离心纯化,TCID50法测病毒滴度。结果PCR鉴定证明ZD55-LASP-1未混杂野生型腺病毒,且包含目的序列LASP-1 siRNA;Ad-LASP-1 E1区缺失,且包含目的序列LASP-1 siRNA。ZD55-LASP-1滴度为4×10^(10) PFU/ml,Ad-LASP-1滴度为2×10^(10)PFU/ml。Western-blot证实ZD55-LASP-1在肿瘤细胞中表达E1A,Ad-LASP-1不表达E1A。结论靶向表达LASP-1 siRNA序列的病毒ZD55-LASP-1重组成功,为肾癌的下一步基因治疗提供了基础。

Ki67启动子调控的肿瘤增殖腺病毒对黑素瘤细胞的杀伤作用

目的:研究Ki67启动子调控增殖腺病毒Ki67-ZD55对黑素瘤A375细胞的杀伤作用。方法:将PBS、ZD55-EGFP和Ki67-ZD55分别作用于A375细胞。RT-PCR法检测Ki67-promoter mRNA的表达;荧光显微镜观察Ki67-ZD55增殖过程;MTT法检测细胞存活率;Western Blot法检测E1A蛋白及线粒体途径凋亡相关蛋白BAX、Bcl-XL、MCL-1和Caspase-3的表达。结果:RT-PCR检测结果显示Ki67-ZD55能够在A375细胞中表达Ki67-promoter序列;荧光显微镜观察结果显示Ki67-ZD55增殖明显;MTT结果表明Ki67-ZD55组对A375细胞的增殖具有明显抑制作用,抑制效果大于ZD55-EGFP组(P<0.05);Western Blot法检测结果表明E1A、BAX的表达量增加,Bcl-XL、MCL-1的表达量均降低,Procaspase-3发生了明显剪切。结论:Ki67-ZD55能够明显抑制A375细胞增殖,促进A375细胞凋亡。