条件性位置回避模型大鼠吻侧部前扣带皮层内Ng、CaMK2α的表达

目的:观察甲醛溶液足底注射诱导的条件性位置回避(formalin-induced conditioned place avoidance,F-CPA)行为大鼠的吻侧部前扣带皮层(rostral anterior cingulate cortex,r ACC)神经元中神经颗粒素(neurogranin,Ng)及钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶2 alpha(Calcium-Calmodulin-Dependent Protein Kinase Type 2 alpha,Ca MK2α)及其磷酸化(p-Ng、p-Ca MK2α)水平的变化。方法:取成年健康雄性SD大鼠40只,随机分为正常无处理(C)组、甲醛溶液足底注射(F)组、生理盐水足底注射+CPA测试(N-CPA)组、甲醛溶液足底注射+CPA模型建立(F-CPA1)组、甲醛溶液足底注射+CPA模型消退(F-CPA2)组(n=8),进行CPA行为学测试,并采用免疫印迹法检测各组大鼠r ACC中Ng、Ca MK2α和其磷酸化的表达。结果:处理前,N-CPA、F-CPA1、F-CPA2组条件刺激匹配室停留时间的差异无统计学意义。处理后,F-CPA1、F-CPA2组大鼠条件刺激匹配室停留时间减少,回避分数高于N-CPA组(P<0.05)。同时,F-CPA1组r ACC内Ca MK2α、p-Ca MK2α水平同其他对照组相比均减少(P<0.05),而各组间r ACC内Ng、p-Ng的表达及p-Ng/Ng、p-Ca MK2α/Ca MK2α比值的差异无统计学意义。48h后,F-CPA2组大鼠回避分数与对照组的差异无统计学意义,且F-CPA2组大鼠r ACC内Ca MK2α、Ng及其磷酸化水平与其他对照组的差异无统计学意义。结论:大鼠r ACC中Ca MK2α及p-Ca MK2α表达下调可能参与甲醛溶液诱导的疼痛厌恶情绪,而Ng及p-Ng的表达与其无显著相关。Ca MK2α可能并不通过Ng-Ca M-Ca MK2α途径参与疼痛厌恶情绪。

电针刺激对大鼠条件性位置回避行为反应的影响及其作用机制

目的探讨电针(electroacupuncture,EA)刺激对大鼠条件性位置回避(conditioned place avoidance,CPA)行为反应的影响及其可能的作用机制。方法免疫荧光染色法检测正常大鼠前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)脑区组织中μ-阿片受体和NR1的共表达情况。于大鼠ACC脑区内分别预先微量注射μ-阿片受体拮抗剂CTOP及0.9%氯化钠(NS)后,经左脚掌皮下注射完全弗氏佐剂(complete Freund adjuvant,CFA)诱导产生慢性炎性疼痛,并与特定环境进行匹配,建立CPA模型,再进行环跳穴位电针(electroacupuncture,EA)刺激(即CTOP+CFA+EA组和NS+CFA+EA组),同时设假EA刺激组(EA不通电,即CTOP+CFA+shamEA组和NS+CFA+shamEA组)及对照组(ACC及脚掌均注射NS,EA不通电,即NS+NS+shamEA组),记录CPA试验的第1、3天各组大鼠在痛侧匹配室停留时间,计算回避分数。将各组大鼠放置50℃热板上,检测EA刺激对大鼠热痛行为反应的影响。Western blot法检测各组大鼠ACC脑区组织中μ-阿片受体及磷酸化NR1(p-NR1)的表达水平。结果μ-阿片受体与NR1在正常大鼠ACC脑区同一个神经元上共表达。NS+CFA+shamEA组大鼠第3天在痛侧停留时间比第1天显著缩短(P<0.001),回避分数比NS+NS+shamEA组显著增大(P<0.001);NS+CFA+EA组大鼠第3天在痛侧停留时间与第1天相比,差异无统计学意义(P>0.05),回避分数比NS+CFA+shamEA显著减小(P<0.001)。EA刺激不影响大鼠的热痛行为反应。与NS+CFA+shamEA组比较,NS+CFA+EA组大鼠ACC脑区μ-阿片受体表达量明显增高(P<0.001),p-NR1蛋白表达量明显降低(P<0.001)。CTOP可明显逆转EA刺激对CFA诱导CPA反应及ACC脑区μ-阿片受体、p-NR1的表达水平的影响(P<0.001)。结论大鼠CPA反应可能是由CFA诱导ACC脑区p-NR1水平增高导致的,而EA刺激可通过激活μ-阿片受体来减弱该反应。

痛情绪反应量化方法的探索

目的:在经典的formalin诱导的条件位置回避模型的基础上,结合本实验室条件探索一种新的痛情绪测量。方法:完全弗氏佐剂(CFA)诱导的条件性位置回避。方法:雄性SD大鼠左侧足底皮下注射完全弗氏佐剂,建立条件性位置回避(CPA)模型。结果:SD大鼠足底皮下注射CFA会引起持续的炎性疼痛,可以产生稳定的条件性位置回避。足底注射生理盐水(NS)组和空白对照(naive)组不能产生条件性位置回避。结论:CFA诱导的CPA模型可以作为痛情绪量化的一种方法。

痛情绪形成过程中的影响因素

目的:痛情绪是疼痛体验的一个重要部分。条件性位置回避(conditioned place avoidance,CPA)装置可用来测量痛情绪,本研究通过操纵影响CPA形成的变量来探究哪些因素会影响痛情绪的形成。方法:采用高渗盐水足底注射建立大鼠条件位置回避(CPA)模型。结果:足底高渗盐水注射引起大鼠自发痛反应,5 min达高峰,15 min基本消失。条件室内两次(0 min、15 min)足底注射高渗盐水配对特定环境训练30 min,大鼠能够形成条件位置回避,单次注射或室外注射高渗盐水均不能形成条件位置回避。结论:影响痛情绪形成的因素有时间因素、线索认知以及匹配时疼痛时相,这三种因素分别指向关于痛情绪形成的两种机制:记忆机制和学习机制。

痛情绪和相关记忆产生的神经机制

感觉分辨和情绪体验是疼痛的两个基本成分．痛的情绪成分包括原发性痛不愉快(primary unpleasantnPss)和继发性痛情绪(secondary pain affect)两部分．在过去40年间,对痛感觉成分的研究在整体、细胞、分子和基因等各个层次上获得了巨大的进展．然而,只考虑痛的感觉成分而忽视其情绪、情感成分,只是看到问题的一部分,而且不是最重要的部分．越来越多的临床观察表明, 慢性痛患者所遭受的恶性情绪,如焦虑、恐惧、孤独、甚至厌世等给病人造成的心身伤害远比疼痛本身更为严重．今天,对于疼痛的情绪成分,已经受到越来越多的关注．近年来,笔者在这一研究领域进行一系列有益的探索,本篇综述简要回顾了该领域的主要研究进展和已获得的部分研究结果．

不同浓度的完全弗氏佐剂影响大鼠疼痛行为的观察

目的:观察脚掌注射不同浓度完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)产生的不同强度的伤害刺激对大鼠痛感受和痛情绪反应程度的影响。方法:福尔马林诱导的条件性位置回避(conditioned place avoidance,CPA)的行为测试近来被用于评估痛情绪反应。本实验采用另一种炎性致痛物质CFA在大鼠的脚掌皮下注射使之产生持续性炎性痛,诱导大鼠产生条件性位置回避(conditioned place avoidance,C-CPA)反应。根据在大鼠的脚掌皮下注射不同浓度的CFA将大鼠分为正常(Naive)组,生理盐水(NS)组,1/5 CFA组,1/3 CFA组,1/2 CFA组,之后分别检测各组大鼠的热缩足潜伏期(paw withdrawal latency,PWL)和C-CPA反应。结果:1/3 CFA组和1/2 CFA组匹配后热缩足潜伏期与匹配前比较,均明显减小,即痛阈下降,且两组匹配前与匹配后的差值与生理盐水组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);1/3 CFA组的下降值小于1/2 CFA组(P<0.05);1/2 CFA组在匹配后痛侧停留的时间明显缩短,且回避分数与生理盐水组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CFA所诱导的PWL反应和CPA反应的程度与CFA的注射浓度有关,从行为上证实大鼠痛情绪与痛感受的产生存在不同的机制。

前扣带皮层吻侧部注射NR2B受体阻断剂Ifenprodil对骨癌痛大鼠伴随痛厌恶情绪体验的影响

目的探讨前扣带皮层吻侧部(rACC)内注射N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚基(NR2B)受体阻断剂Ifenprodil是否减轻骨癌痛大鼠伴随的痛厌恶情绪体验。方法无位置偏爱的雄性Wistar大鼠30只随机分为空白对照组、骨癌痛组和Ifenprodil组,每组10只。骨癌痛组和Ifenprodil组大鼠右胫骨骨髓腔接种MADB-106细胞3μL(4.8×109/mL),而空白对照组给予同等剂量的生理盐水作对照。术后第14天Ifenprodil组rACC内给予NR2B受体阻断剂Ifenprodil 1.2μL,而空白对照组和骨癌痛组给予同等剂量的生理盐水。分别于术前1天,以及术后第3、7、10、12及14天采用Von Frey刺激法测量大鼠右后爪机械刺激痛阈的变化。术后第14天rACC内给予Ifenprodil后观测骨癌痛大鼠伴随的痛厌恶情绪体验。结果骨癌痛组及Ifenprodil组大鼠自术后第10天至第14天右后爪机械刺激痛阈值明显降低(P<0.05),而空白对照组无改变(P>0.05)。组间比较术后第10、12和14天骨癌痛组和Ifenprodil组明显低于空白对照组(P<0.05)。条件性位置回避实验显示,骨癌痛组大鼠A室滞留时间的百分比为(30±4)%,低于空白对照组(52±5)%(P<0.05);经rACC内注射Ifenprodil后A室滞留时间的百分比为(42±5)%,较骨癌痛组升高但仍低于空白对照组(P<0.05)。结论前扣带回皮层注射NR2B受体阻断剂ifenprodil能够减轻骨癌痛大鼠伴随的痛厌恶情绪体验。