微小RNA簇miR-302s条件性基因打靶小鼠的制备和鉴定

目的制备微小RNA簇miR-302s条件性基因打靶小鼠。方法构建miR-302s打靶载体，通过电穿孔的方法转染胚胎干细胞（ES细胞），用正负筛选法筛选阳性Es细胞并进行PCR鉴定和Southern分析。利用显微注射技术将正确同源重组的ES细胞注射至B6（Cg）-Tyr〈sup〉c．2J〈／sup〉／J小鼠囊胚腔内，注射后的囊胚植入受体小鼠子宫。将得到的嵌合体小鼠与野生型雌鼠交配获得miR-302s-LoxP基因打靶小鼠。结果获得嵌合体小鼠11只，其中4只嵌合雄鼠嵌合率〉50％。利用嵌合体小鼠进行繁育交配，得到miR-302s基因打靶杂合子小鼠11只。结论成功建立miR-302s条件性基因打靶小鼠模型，为进一步研究miR-302s基因功能打下基础。